固相凝集法血小板抗體檢測與早期流產相關性探討

林燕，聶宇波，徐靜，張春燕

(江西省贛州市人民醫院 輸血科，江西 贛州 341000)

固相凝集法血小板抗體檢測與早期流產相關性探討

林燕Δ，聶宇波，徐靜，張春燕

(江西省贛州市人民醫院 輸血科，江西 贛州 341000)

目的研究探討通過固相凝集法檢測血小板抗體對判斷早期流產的臨床意義，并分析血小板抗體檢測結果與早期流產的相關性。方法選取江西省贛州市人民醫院產科2015年9月～2016年6月就診的有早期流產史的50例女性作為研究對象，采用固相凝集法對其血小板抗體進行檢測，并計算檢測陽性率。同時，選取同期在產科接受產前檢查的正常孕婦1092例作為對照，行相同檢測，比較2組受檢女性的血小板抗體檢測陽性率。結果有早期流產史的觀察組女性血小板抗體陽性檢出率(22.0%)顯著高于無早期流產史的正常孕婦(3.1%)(P<0.05)；有早期流產史的女性中，流產次數>2次的女性血小板抗體篩查陽性率(40.0%)顯著高于流產次數≤2次的女性(17.5%)(P<0.05)；血小板抗體檢測陽性的女性早期流產的發生率(24.4%)顯著高于檢測陰性的女性(3.6%)(P<0.05)，且血小板抗體篩查結果與早期流產之間存在顯著相關性(r=0.782，P<0.05)，其相對風險RR=6.96。結論通過固相凝集法對孕婦的血小板抗體進行篩查，有利于早期流產發生風險的預測，也有利于流產病因的分析及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜的預防。

固相凝集法；血小板抗體；早期流產

有調查研究顯示，當母嬰之間的血小板血型不合的情況下，妊娠免疫會誘發早期流產、新生兒同種免疫血小板減少性紫癜等一系列不良反應的出現[1]。因而，對不同妊娠時期孕婦的血小板抗體進行檢測具有十分重要的意義。本文選擇早期流產史的女性50例作為研究對象，通過固相凝集法對其血小板抗體進行檢測，并分析其檢測結果與早期流產之間的相關性，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取江西省贛州市人民醫院產科2015年9月～2016年6月就診的有早期流產史的女性50例作為觀察組，其年齡在22～37歲，平均年齡為(32.1±2.8)歲；其中，有1～2次自然流產史的女性40例，有2次以上自然流產史的女性10例，所有被調查者的流產時間均發生于妊娠后的3個月左右。

選取同期在婦產科接受產前檢查的正常孕婦1092例作為對照，其年齡在23～38歲，平均年齡為(31.2±3.0)歲，所有孕婦均無輸血史，且經紅細胞不規則抗體篩查結果呈陰性，IgG抗-A、抗-B效價均在64以下。

2組受檢者在年齡等方面的比較差異無統計學意義。

1.2 方法 采集受檢者的靜脈血液標本3 mL，并將其置于含有乙二胺四乙酸二鉀的采血管中進行抗凝處理，在3000 r/min的速度下離心5 min，吸取上層血漿。選擇長春博德生物科技有限公司生產的固相凝集法血小板抗體檢測試劑盒對血小板抗體結果進行判斷，操作嚴格按照試劑盒說明進行：①制備血小板懸液(有效期內機采血小板用0.9%NaCl進行5～10倍稀釋)；②向反應孔中加入50 μL血小板懸液，輕搖反應板10s，平板離心機50 g離心5 min，使血小板固定在反應孔底部，倒出反應孔中液體，洗滌工作液洗滌3次，最后一次洗滌后將反應板倒置于吸水紙上吸干殘余液體；③立即向每個反應孔中加入100 μL低離子強度溶液，并分別在相應孔中加入50 μL患者樣本、陽性及陰性對照，封口膠封好混勻置于37 ℃水浴孵育30 min；④棄去封口膜洗滌5次，加入50 μL抗人IgG及指示紅細胞，輕輕振蕩混勻，200 g離心5 min。紅細胞平鋪于反應孔的底部表面或者紅細胞只能夠結合到部分孔底部的情況為陽性；以紅細胞在反應孔底部中央發生紅細胞聚集的情況為陰性[2]。

比較2組受檢女性的血小板抗體檢測陽性率，探討早期流產史女性的流產次數與血小板抗體檢測結果的影響，并分析血小板抗體檢測陽性與早期流產之間的相關性。

2 結果

2.1 不同組別女性的血小板抗體篩查結果比較 經固相凝集法檢測2組受檢女性的血小板抗體，有早期流產史的觀察組女性和無早期流產史的正常孕婦抗體陽性檢出率分別為22.0%和3.1%，觀察組顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同組別女性的血小板抗體篩查結果比較[n(%)]Tab.1 Comparison of platelet antibody screening between two groups[n(%)]

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.2 不同流產次數的女性的血小板抗體陽性率檢測結果 有早期流產史的女性中，流產次數≤2次和>2次的女性，血小板抗體篩查陽性率分別為17.5%和40.0%，流產次數>2次的女性顯著高于流產次數≤2次的女性，2組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同流產次數的女性的血小板抗體陽性率檢測結果[n(%)]Tab.2 Comparison of platelet antibody screening between different abortion frequency[n(%)]

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.3 血小板抗體與早期流產之間的相關性 血小板抗體檢測陽性與陰性的女性中，早期流產的發生率分別為24.4%(11/45)、3.6%(39/1097)，血小板抗體篩查陽性的女性，早期流產率顯著升高，比較差異有統計學意義(P<0.05)，提示血小板抗體篩查結果與早期流產之間存在顯著相關性(r=0.782，P<0.05)，其相對風險RR=6.96。見表3。

表3 血小板抗體與早期流產之間的關系Tab.3 Corelation of platelet antibody and early abortion

3 討論

血小板表面的復雜血型抗原是由遺傳決定，且屬于常染色體顯性遺傳[3]，血小板血型抗原中，與其他細胞表面或組織共有的血型抗原，被稱為血小板相關抗原，包括人類白細胞抗原HLA-A、HLA-B及ABH紅細胞血型系統抗原；另一類則為分布于血小板膜糖蛋白上的血小板特異性抗原HPA[4]，目前被國際公認的血小板特異性抗原有5個系統10個抗原，由于其存在獨特的型特異性，被稱為血小板血型，血小板抗原不合是導致機體產生血小板抗體的重要原因，而血小板抗體的產生原因又包括了自身免疫因素、輸血因素等多種[5]。人類血小板抗原與多次輸血后血小板輸注無效、輸血后紫癜以及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜等之間都有密切的關系。機體在被血小板特異性抗原或HLA等相關免疫因素影響會產生抗血小板抗體[6]。

本文討論的是血小板抗體與女性早期流產之間的關系，則只考慮自身免疫因素的影響。母嬰間血小板血型不合的妊娠免疫會導致母親對胎兒血型抗原免疫產生抗體，并對胎兒的血小板進行破壞，胎兒的血小板減少則會誘發流產，且由于這種IgG抗體一般在妊娠第14周就可以通過胎盤屏障，孕婦發生流產的時間也一般在3個月左右；即使未出現早期流產的情況，也可能因新生兒血小板減少造成新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜，重者還會對新生兒的中樞神經系統、重要臟器等造成影響，導致水腫、出血等嚴重癥狀出現，或因急性顱內出血等情況導致死亡，危害十分嚴重。因而，對于孕婦的血小板抗體篩查意義十分重大，特別是那些有早期流產史或者習慣性流產的女性而言，血小板抗體的篩查需得到高度重視。

本文對有早期流產史的女性、正常孕婦的血小板抗體篩查結果進行了比較，發現有早期流產史的女性血小板抗體陽性率顯著高于正常孕婦，且有流產次數越多，血小板抗體陽性率也相應升高的情況，這與劉凌[7]的研究結果基本一致，且本文有早期流產史的女性血小板抗體陽性率(22.0%)較之更高，與正常孕婦之間的差異也更為顯著(P<0.05)。而通過血小板抗體篩查結果與早期流產發生風險的相關性分析可見，2者呈顯著正相關(P<0.05)，血小板抗體篩查陽性女性的早期流產高(相對風險RR=6.96)。

需要注意的因母嬰間血型不合導致流產的情況有2種，一種為母嬰間紅細胞ABO系或Rh系血型抗體不合，另一種是母嬰間血小板血型不合的血小板抗體，也就是本文研究的內容，前者被認為是導致晚期習慣性流產的主要原因[8], 而后者則被認為是導致早期流產的主要原因。這是由于相對于紅細胞，血小板在妊娠早期更容易進入母體血液循環，并因血小板血型的抗原抗體同種免疫反應誘發早期流產[9-10]。

本研究應用固相凝集法進行血小板抗體檢測發現離心速度和孵育溫度需嚴格把控，該方法結果直觀，易于判讀，敏感性和特異性強，方便臨床應用，且易于標準化。但也存在以下影響因素：樣本抗凝不充分容易形成纖維蛋白凝塊及指示紅細胞溶血或污染出可導致假陽性。

綜上所述,通過固相凝集法對孕婦的血小板抗體進行篩查，有利于早期流產發生風險的預測，也有利于流產病因的分析及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜的預防。

[1] 古國榮,朱偉峰,周敏，等.孕婦血小板抗體與新生兒血小板減少的相關性研究[J].海南醫學,2013,24(3):388-390.

[2] 余琳.妊娠合并血小板減少診斷及處理[J].中國實用婦科與產科雜志,2014,30(6):406-409.

[3] 杜振軍.妊娠對女性血小板抗體的影響[J].國際輸血及血液學雜志,2012,35(5):402-405.

[4] 謝仁偉,王明泉,李麗群，等.孕晚期孕婦2038例血小板抗體篩查分析[J].福建醫藥雜志,2016,38(2):98-99.

[5] 張趁利,龐桂芝,婁白敏，等.反復輸血患者的血小板抗體檢測及配型前后的療效對比[J].臨床輸血與檢驗,2014,16(1):66-68.

[6] 毛淑清,黃宇翔,王晴，等.固相凝集法檢測血小板抗體的臨床意義[J].中國臨床研究,2014,27(1):98-99.

[7] 劉凌,帥虎,李流嬌，等.固相凝集法在產前血小板抗體檢測中的臨床意義[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(11):1360-1361.

[8] 夏世勤,蘇莉,劉秋洪，等.血液病患者血小板抗體檢測及其與血小板輸注療效的相關性研究[J].中國當代醫藥,2013,20(22):82-84,86.

[9] 朱偉峰,古國榮,謝國勇，等.孕婦血小板抗體與新生兒血小板減少的相關性研究[J].當代醫學,2011,17(20):89-90.

[10] 肖慧英.妊娠合并血小板減少的研究新進展[J].醫學綜述,2013,19(8):1398-1400.

(編校：王儼儼)

Relationshipbetweenplateletantibodydetectionandearlyabortionbysolidstateagglutination

LIN YanΔ, NIE Yu-bo, XU Jing, ZHANG Chun-yan
(Department of Blood Transfusion, Ganzhou People’s Hospital, Ganzhou 341000, China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of platelet antibodies in the determination of early abortion by solid-phase agglutination, and to analyze the correlation between the results of platelet antibody detection and early abortion.Methods50 women selected from Ganzhou People’s Hospital of Jiangxi province from September 2015 to June 2016 had early abortion history as the research object, using solid agglutination method to detect platelet antibody, and calculate the positive detection rate.At the same time, 1092 cases pregnant women undergoing normal prenatal examination were selected as control group, for the same detection, compare platelet antibody positive rate between two groups.ResultsThe platelet antibody positive rate in early history of abortion in observation group female was 22%, which was significantly higher than that in normal pregnant women without early abortion (3.1%)(P<0.05); the platelet antibody screening positive rate in abortion time above twice of early abortion women was 40.0%, significantly higher than bellow twice(17.5%)(P<0.05); the early abortion rate of platelet antibody positive women was 24.4%, significantly higher than that of negative women (3.6%), there were statistically significant differences (P< 0.05), and there was a significant correlation between the platelet antibody screening results and early abortion(r=0.782，P<0.05), the relative risk ofRR=6.96.ConclusionIt is helpful to predict the risk of early abortion and the analysis of the cause of abortion and the prevention of neonatal autoimmune thrombocytopenia purpura by the method of solid state agglutination.

solid state agglutination; platelet antibody; early abortion

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.043

林燕，通信作者，女，本科，副主任技師，研究方向：輸血檢驗，E-mail：1403247326@qq.com。

R714.21

A