紫外分光光度法測定川射干葉的總黃酮含量※

羅 森 袁崇均 陳 帥 王 笳

紫外分光光度法測定川射干葉的總黃酮含量※

羅 森 袁崇均 陳 帥 王 笳

目的 建立川射干葉中總黃酮含量測定的方法。方法 采用紫外分光光度法測定川射干葉中總黃酮的含量，以射干苷為對照品，測定波長為 266 nm。結果 射干苷在 0.8244～9.0684 μg/ml范圍內與吸光度呈良好的線性關系，r=0.9998，回收率為99.48%，RSD為1.23%，川射干總黃酮的平均含量為3.42%。結論 該方法操作簡便、靈敏、準確、具有良好的重復性和回收率，可作為川射干葉的總黃酮含量測定方法。

紫外分光光度法；川射干葉；總黃酮；含量測定

【Abstract】Objective To establish a method for determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. Methods Determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. by UV spectrophotometry，Belamcandin as control sample，the detection wavelength was 266 nm.Results Belamcandin in 0.8244～9.0684 μg/ml range and absorbance showed good linear relationship，r=0.9998，recovery rate was 99.48%，RSD=1.23%，the average content of the total flavonoids in chuanshegan 3.42%.Conclusion The method is simple，sensitive，accurate and has good repeatability and recovery rate can be used for determination of total flavonoids content in leaves of Iris tectorum Maxim..

【Key words】Ultraviolet spectrophotometric method；The leaves of Iris tectorum Maxim.；Total flavonoids；Determination of content

川射干為鳶尾科植物鳶尾 Iris tectorum Maxim.的干燥根莖，主產于四川、重慶、貴州、云南、廣西等省份，具有清熱解毒、祛痰、利咽的功效，用于熱毒痰火郁結，咽喉腫痛、痰涎壅盛、咳嗽氣喘［1］，其總黃酮提取物有很強的藥理作用［2-5］。而一種植物的不同部位，一般具有相似的化學成分，在川射干葉中發現其含有豐富的總黃酮成分，為了便于對其進行研究，本研究以射干苷為對照品，對川射干葉的總黃酮含量進行了測定。

1 儀器與材料

1.1 試驗儀器 UV-2401PC型紫外分光光度計（島津），CPA225D型電子天平（賽多利斯），KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試驗材料 川射干葉由本院中藥種植與資源所夏燕莉副研究員提供，采自其川射干培育基地（四川省成都市雙流縣），經鑒定為鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾Iris tectorum Maxim.的葉，對照品射干苷（自制，批號：20130701，含量＞99%）。

1.3 試驗試劑 乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備 取川射干葉鮮葉，洗凈、剪碎、烘干，粉碎成細粉（過 60目篩），精密稱取500 mg，置于具塞三角瓶中，加入50 ml 70%乙醇，稱定重量，超聲30 min，取出，補足減失的重量，混勻，過濾，取續濾液，搖勻，備用。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經105 ℃干燥至恒重的射干苷對照品10 mg于50 ml容量瓶中。用70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，備用。

2.3 含量測定方法 精密吸取對照品溶液 1.0 ml、供試品溶液1.0 ml分別置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。以 70%乙醇為空白，按紫外分光光度法，在266 nm波長處測定吸收度，并計算其含量。

2.4 測定波長的選擇 取2.1和2.2項下溶液各1.0 ml，分別置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。以70%乙醇為空白，在200～400 nm范圍內掃描吸收曲線，供試品與對照品的吸收曲線形狀一致，在266 nm處有最大吸收峰。故確定266 nm為測定波長。

2.5 線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2 ml 于50 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，在266 nm波長處以70%乙醇為空白，測定吸收度。以濃度C（橫軸）對吸收度A（縱軸）作圖，得一條略高于原點的直線，線性方程為y=0.1099x-0.017，r=0.9998（n=11），線性范圍為0.8244～9.0684 μg/ml。

2.6 精密度試驗 取2.1和2.2項下溶液各1.0ml，分別置于50 ml容量瓶中，按2.3項下含量測定方法重復測定 6次。測得的吸收度值無明顯變化，對結果進行計算，RSD分別為0.42%、0.57%。

2.7 穩定性試驗 取2.1和2.2項下溶液各1.0 ml，分別置于50 ml容量瓶中，按2.3項下含量測定方法于0、1、2、3、4、5、6 h進行測定。測得的吸收度值無明顯變化，對結果進行計算，RSD=0.85%，表明對照品、供試品溶液在6 h內穩定。

2.8 重現性試驗 取川射干葉細粉 6份，每份約500 mg，精密稱定，按2.1項下方法制備供試品溶液，另取2.2項下對照品溶液，按2.3項下含量測定方法進行測定，對結果進行計算，結果樣品總黃酮含量為 3.425，RSD=1.16%（n=6），表明該方法重現性良好。

2.9 加樣回收率試驗 取已知總黃酮含量（3.39%）的川射干葉細粉約250 mg，共6份，精密稱定，加入適量的對照品，按2.1項下方法制備6份供試品溶液，并按2.3項下含量測定方法測定總黃酮含量，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n=6）

2.10 樣品含量測定 取川射干葉鮮葉，洗凈、剪碎、烘干，粉碎成細粉（過60目篩），每份約500 mg，按2.1項下方法制備供試品溶液，按2.3項下含量測定方法進行測定，計算 5份樣品的含量測定結果，見表2。

表2 川射干葉含量測定結果

3 討論

在樣品制備方法考察時，本研究比較了超聲處理30 min和70%乙醇回流提取1 h兩種處理方法，通過波長掃描和含量測定，結果無明顯差異。對超聲處理時間的選擇上，分別選擇 10、20、30、40、50、60 min進行比較，結果發現超聲處理30 min以上樣品含量達到最大，后續時間延長無顯著差異，故選用超聲提取30 min。

川射干的代表性成分，如射干苷、射干苷元、二甲基射干苷元等均為異黃酮成分，其總黃酮含量的高低是其實現藥理作用的關鍵。川射干葉所含的代表性成分與藥材相似，可能存在與川射干藥材相似的藥理作用。通過本研究方法可以對川射干葉的總黃酮含量進行測定，具有良好的重現性和準確性，為更好地研究利用這一植物藥材資源提供了技術支持。

［1］ 中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015年版一部）［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2015:41-42.

［2］ 劉亞靈，寧楠，李利民.咽喉康膠囊的鎮痛和止咳作用［J］.華西藥學雜志，2007，22（6）:647-649.

［3］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.川射干化學成分的研究［J］.天然產物研究與開發，2008，20（3）:444-446.

［4］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.射干苷標準品質量標準研究［J］.中國藥房，2008，19（33）:2594-2596.

［5］ 袁崇均，王笳，陳帥，等.川射干總黃酮含量測定方法的比較研究［J］.四川中醫，2009，27（8）:58-59.

UV spectrophotometric Determination of Total Flavonoid in Leaves of Iris tectorum Maxim.

Luo Sen Yuan Chongjun Chen Shuai Wang Jia

R927.2；R284

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.08.002

四川省中醫藥科學院，四川成都 610041

※四川省公益性科研院所基本科研項目（編號：A-2014N-3）

羅森（1982-），助理研究員。主要從事中藥藥學研究。E-mall：mnmls@163.com