非小細胞肺癌患者化療后淋巴細胞恢復的影響因子

袁琪　林勇

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·論著·

非小細胞肺癌患者化療后淋巴細胞恢復的影響因子

袁琪林勇

目的 通過測定肺癌患者化療前后不同時間點外周血淋巴細胞的變化，探討化療后各類型淋巴細胞的恢復特點以及臨床和病理方面的影響因素。方法 采用流式細胞術檢測非小細胞肺癌患者（87例）在化療前1周、化療后2周、3個月和9個月外周血NK、CD8+、CD4+T淋巴細胞和B淋巴細胞的水平，分析化療前后淋巴細胞亞群的變化，并根據化療方案及臨床特點的不同進行亞組分析。結果 外周血T、B和NK細胞水平在化療2周后均明顯降低（P＜0.01），NK細胞和CD8+T細胞在3月內可恢復至化療前水平，但CD4+T細胞和B細胞在化療后9月后仍不能恢復至化療前水平（P＜0.05）；采用含多西他賽方案的患者和使用其他方案的患者相比，淋巴細胞恢復的時間明顯減慢（P＜0.05）。結論 化療對非小細胞肺癌患者的免疫系統可能存在長期影響，在制定化療方案時需要結合多方面因素綜合考慮。

非小細胞肺癌；化療；T淋巴細胞；B淋巴細胞

原發性肺癌（以下簡稱肺癌）是我國最常見的惡性腫瘤之一，2006～2011年我國肺癌5年患病率是130.2/10萬。居男性惡性腫瘤第2位。居女性惡性腫瘤第4位［1］，其中大約有30%確診肺癌的患者會接受全身化療［2］。藥物的作用機理為攻擊迅速生長分裂的細胞，主要為腫瘤細胞，但其他正常細胞也會受到化療藥物的破壞而導致損傷。目前在肺癌［3］和其他實體瘤［4］中，都已經有研究發現在化療最后療程之后的3個月內會發生外周血淋巴細胞的下降，但報道多限于CD4+、CD8+等T淋巴細胞，而有關肺癌患者的B淋巴細胞在化療后的變化以及各類型淋巴細胞在化療之后的較長時間內的恢復情況尚不明確。本研究主要通過觀察肺癌患者化療前和之后不同時間點外周血中NK、CD8+、CD4+T淋巴細胞和B淋巴細胞的水平，探討化療后各類型淋巴細胞的動態變化以及臨床和病理方面的影響因素。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年8月～2014年4月在南京市胸科醫院確診并治療的原發性肺癌患者共87例為觀察組，觀察組的所有患者均經過病理明確診斷并接受過4～6個周期全身化療，入選患者中男性59例，女性28例；年齡33～74歲，平均年齡為（62±11.0）歲；其中：腺癌56例，鱗狀細胞癌31例；術后輔助化療24例，晚期一線化療63例；化療的方案包括：培美曲塞或多西他賽聯合順鉑方案。排除標準：（1）年齡＞75歲；（2）有長期糖皮質激素或其他免疫抑制藥物的服藥史；（3）合并有其他惡性腫瘤、血液系統疾病；（4）入組本試驗前10年內有全身化療病史。本研究中所有患者均簽訂了知情同意書。

1.2方法

1.2.1標本采集 所有研究對象分別在化療前1周，化療后2周、3個月、9個月留取外周血標本，均于清晨空腹采集肘正中靜脈血4 ml，置于抗凝管中，由乙二胺四乙酸抗凝，24 h內流式細胞術檢測外周血中NK、CD8+、CD4+T淋巴細胞和B淋巴細胞數目。

1.2.2檢測方法 流式細胞術檢測淋巴細胞表型：離心抗凝管中的血液后，取下層細胞懸液2 ml置離心管中，加入紅細胞裂解液8 ml，靜置10 min后再次離心，取離心管底部白色物質，用PBS緩沖液將其溶解，置于EP管中，加紅細胞裂解液再次離心，留取底部白色物質。PBS液溶解后，加入帶熒光標記的單克隆抗體檢測，采用美國BD公司生產的BD FACS calibur流式細胞儀檢測血液中NK、CD8+、CD4+T淋巴細胞和B淋巴細胞的數目。

1.3統計學方法

采用SPSS 18.0軟件進行統計學分析，計量資料用（均數±標準差）表示，多組間比較采用F檢驗，組內比較采用t檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1化療前后各類型淋巴細胞的動態變化和特點

在化療2周后，四種淋巴細胞數目均較化療前明顯下降（P＜0.01），在化療3個月后，NK細胞和CD8+細胞可基本恢復至化療前水平，但直到化療9個月后，B細胞和CD4+的水平仍不能恢復至化療前水平（P＜0.05）。見圖1。

2.2不同化療方案對淋巴細胞恢復的影響

使用培美曲塞聯合方案的患者與使用多西他賽聯合方案的患者相比，化療前的B細胞和CD4+T細胞水平無差異。對于B細胞，在化療后2周、3個月和9個月，多西他賽組的細胞數目明顯低于培美曲賽組（P＜0.05）；在化療后9個月，培美曲塞組B細胞可基本恢復至化療前水平（P=0.248），但多西他塞組僅恢復至化療前51%。對于CD4+T細胞，在化療后2周，多西他賽組的細胞數目也明顯低于培美曲賽組（P＜0.05），但在之后的各時間點，兩種方案的CD4+T細胞恢復情況并無差異。見圖2。

3　討論

雖然分子靶向治療在非小細胞肺癌領域的進展日新月異，但目前傳統化療無論在早期術后輔助治療還是在相關靶點基因野生型的晚期治療中仍占有重要的地位。在日常臨床工作和研究中，我們往往重視化療的療效評估和預防控制常見不良反應如骨髓抑制等，但隨著治療總生存期的延長，有學者認為需要提高對化療后長時間內其他方面受益的關注［5］，而目前對全身化療對免疫系統的長期影響所知甚少。有研究發現機體的免疫功能和生物免疫制劑的療效有關，而化療引起的免疫功能受抑制可能會降低如單克隆抗體的反應［6］；在2015年，生物免疫治療在非小細胞肺癌中進展迅速，我們推測了解化療對機體免疫系統的影響機制將對生物制劑的應用有重要的指導意義。

我們的研究結果發現，化療在短時間內（3～6個月）可以引起各主要淋巴細胞亞型的下降，但化療對NK細胞和CD8+T細胞的影響時間較短，化療9個月后基本可恢復至化療前水平；這和既往的研究結果相同，但類似研究中均缺乏B細胞的觀察［7］，本研究發現對于B細胞和CD4+T細胞，即使在末次化療9個月后仍受到抑制，而且以B細胞尤為嚴重。結合本研究結果，我們認為化療可能會對患者的免疫系統產生較為長期的抑制作用，在臨床化療后需要長期對T細胞亞群等指標進行檢測。

非小細胞肺癌患者化療后免疫功能改變的情況較為復雜，各淋巴細胞亞群表現出不同的表型［8］。為了明確不同化療藥物對研究結果是否有影響，本研究進行了亞組分析。我們發現多西他賽聯合順鉑方案對B細胞和CD4+T細胞，在化療后短時間內的抑制作用均明顯嚴重于培美曲賽聯合順鉑方案，而且使用多西他賽聯合方案后，B細胞水平在長時間后仍然不能恢復至化療前水平。我們推測，原因可能主要與化療藥物本身的細胞毒特性有關，因為多西他賽與培美曲賽相比，骨髓抑制的不良反應更為嚴重。那么我們推測，對于同時進行化療和免疫治療的非小細胞肺癌患者，似乎培美曲賽的聯合鉑類方案優于多西他賽聯合鉑類方案。通過亞組分析的結果，我們認為使用多西他賽聯合方案是影響機體免疫系統恢復的不良因素，在臨床上應避免合并這種不良因素的情況。綜合本研究的結果，我們認為化療對非小細胞肺癌患者的免疫系統可能存在較長的影響，因此在化療后需要定期進行檢測；在制定化療方案時，需要綜合多方面因素考慮。

圖1　淋巴細胞各亞型在化療前后不同時間點的數目（個/ul，n=87，*表示P＜0.05，差異具有統計學意義；ns表示P＞0.05，差異無統計學意義）

圖2　不同方案化療后B細胞和CD4+T細胞水平的變化（個/ul，細胞數%，n=87，*表示P＜0.05，差異具有統計學意義；ns表示P＞0.05，差異無統計學意義）

［1］石遠凱，孫燕，于金明，等.中國晚期原發性肺癌診治專家共識（2016年版）［J］.中國肺癌雜志，2016，16（1）:33-38.

［2］Lin J，Carter CA，McGlynn KA，et al.A Prognostic Model to Predict Mortality among Non-Small-Cell Lung Cancer Patients in the U.S.Military Health System［J］.J Thorac Oncol，2015，10（12）: 1694-1702.

［3］鄒靜，劉斌，陳雪華，等.肺癌患者化療后外周血T淋巴細胞亞群變化特點及臨床意義［J］.中國免疫學雜志，2010，26（11）: 1016-1020.

［4］吳建忠，陳琳，劉曉安，等.腫瘤浸潤性淋巴細胞比例在乳腺癌新輔助化療中的意義［J］.腫瘤防治研究，2015，42（11）:1114-1118.

［5］Ozeki N，Kawaguchi K，Fukui T，Fukumoto K，et al.Which variables should be considered in patients with stage II and III nonsmall cell lung cancer after neoadjuvant therapy？［J］.Nagoya journal of medical science，2015，77（3）:475-480.

［6］Stewart EL，Mascaux C，Pham NA，et al.Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma［J］.Journal of clinical oncology，2015，33（22）: 2472-2480.

［7］Zhao Z，Liao H，Ju Y.Effect of compound Kushen injection on T-cell subgroups and natural killer cells in patients with locally advanced non-small-cell lung cancer treated with concomitant radiochemotherapy［J］.Journal of Traditional Chinese Medicine，2016，36（1）:14-18.

［8］Verma R，Foster RE，Horgan K.Lymphocyte depletion and repopulation after chemotherapy for primary breast cancer［J］.Breast Cancer Res，2015，18（1）:1-12.

The Influence Factor of Lymphocyte Recovery After Chemotherapy in Patients With Non-small Cell Lung Cancer

YUAN Qi LIN Yong Department of Pulmonary Disease，Nanjing Chest Hospital，Nanjing Jiangsu 210029，China

Objective To investigate change of lymphocyte subsets before and after chemotherapy in patients with NSCLC，to explore the infuences of current regimens and clinic-pathological factors on circulating lymphocyte levels and phenotypes.Methods We used fow-cytometry to assess circulating lymphocyte levels and phenotypes in 87 NSCLC patients before chemotherapy and at time-points from 2 weeks to 9 months after chemotherapy completion.Results Levels of B，T and NK cells were signifcantly reduced 2 weeks after chemotherapy （P＜0.01），levels of all cells recovered to some extent，although B and CD4+T cells remained signifcantly depleted even 9 months post chemotherapy differences in chemotherapy regimen were associated with significant differences in depletion extent or repopulation dynamics （P＜0.05）.Conclusion Chemotherapy of NSCLC is associated with long-term changes in immune parameters that should be considered during clinical management.

NSCLC，Chemotheraphy，T Lymphocyte，B Lymphocyte

R453

A

1674-9308（2016）21-0029-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.016

南京市胸科醫院呼吸內科，江蘇 南京 210029

林勇，E-mail:linyong63@163.com