齊齊哈爾市無償獻血者血液HBV、HCV、HIV酶免檢測聯合核酸檢測結果分析

李微　溫馨娜　鄭慧麗

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齊齊哈爾市無償獻血者血液HBV、HCV、HIV酶免檢測聯合核酸檢測結果分析

李微溫馨娜鄭慧麗

目的 探討酶免檢測聯合核酸擴增檢測2016年齊齊哈爾地區無償獻血人群HBV、HCV、HIV-I和HIV-2感染的收益情況。方法 對2016年齊齊哈爾地區無償獻血者血液標本進行HBV、HCV、HIV（1+2型）感染性標志物的篩查。結果EIA檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV均為陰性的合格血液共13 716份/14 097份。NAT檢測呈反應性19份/13 716份，反應性率為1.39‰。19例NAT檢測反應性標本中11例為NAT拆分檢測病毒核酸反應性且11例均為HBV DNA反應性。結論 應用核酸擴增檢測能有效提高輸血安全，降低輸血傳播相關病毒的風險；而獻血人群中檢出核酸反應性的標本主要為HBV DNA反應性而HBsAg無反應性。

ELISA檢測；核酸檢測；血液篩查；血液安全

輸血相關傳染病的預防和控制已經成為全社會關注的焦點［1］。酶免檢測（EIA）技術已經廣泛運用于血液篩檢，該方法的靈敏度和特異性也在不斷地改進和提高，但每年仍有少數新發輸血后肝炎病例報道［2-3］。相比EIA檢測，血液病毒核酸檢測（NAT）技術可以大大降低經輸血傳播病毒的風險。盡管NAT從理論上并不能完全消除病毒感染的“窗口期”，但可以有效地預防經輸血傳播病毒性疾病［4-5］。本血站從2016年1月已在ELISA檢測的基礎上正式開展核酸檢測，現將核酸與ELISA聯合檢測的結果報告。分析如下。

1　材料與方法

1.1標本來源

標本來自2016年齊齊哈爾中心血站的無償獻血者，包括全血獻血者和單采獻血者，獻血者年齡為18～55歲。嚴格按照獻血者健康檢查要求對獻血者進行健康征詢和體檢，并經過HBsAS、丙氨酸氨基轉移酶篩查合格才允許捐獻，所有標本經過獻血者知情同意后留取。

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑 HBsAg、抗HCV、抗HIV檢測均采用2個不同廠家的ELISA試劑。以上所有試劑均為中國藥品生物鑒定所批批檢合格產品，并嚴格按照試劑盒說明書的要求進行操作。其中抗HIV反應性標本送疾病預防控制中心進行確認。

NAT檢測試劑采用蘇州華益美生物科技有限公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1+2型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）（國藥準字S20130011，批號：MA20150805、MA20160101）

1.2.2儀器 （1）酶免設備：澳斯邦的前加樣和后處理；（2）華益美全自動核酸檢測系統，包括：BACME全自動核酸提取系統（瑞士Hamilton）、ABI7500熒光PCR儀（美國ABI）。以上儀器均在校驗合格期內使用。

1.3檢測方法及判定標準

1.3.1常規檢測 所有血液標本均按照我國《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2011）進行常規的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的2次ELISA檢測和ALT項目的2次速率法檢測，由不同人員用不同廠家的試劑嚴格按試劑說明書的要求進行檢測。

任一種試劑檢測為反應性的，重取血樣雙孔復試，復試任一孔為反應性的判定為不合格，其中2例抗HIV反應性標本送疾病預防控制中心確認。所有試驗結果均按試劑盒說明書在實驗室管理軟件自動判讀。

1.3.2核酸檢測 對常規檢測合格的標本進行核酸（NAT）檢測，首先由全自動核酸提取儀自動混樣，每8份標本（150 μl/份）混合成1份（1.2 ml）匯集池（pool）標本，由全自動核酸提取儀和熒光核酸擴增檢測儀采用核酸定性篩查試劑進行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸檢測。每批檢測均設置1個陰性質控和1個陽性質控，1個外部陽性質控，每個pool均含DNA內對照（DNA IC）和RNA內對照（RNA IC）。

匯集檢測為核酸非反應性，匯集池中的8份標本合格；匯集檢測為核酸反應性，對該匯集池子中的8份標本進行拆分檢測，拆分檢測無核酸反應性判定為NAT檢測陰性，拆分檢測為核酸反應性判定為NAT檢測陽性。所有試驗結果均按試劑盒說明書的要求用華益美實驗室管理軟件自動判讀。

表1　EIA檢測結果（份）

表2　NAT檢測結果（份）

2　結果

2.1酶聯免疫檢測結果

14 097份血液標本中，經血清學檢測，ELISA單項陽性97份（6.88‰），其中HBsAg單項陽性25份（1.77‰）；抗-HCV單項陽性70份（4.97‰）；抗-HIV單項陽性2份（0.14‰），經疾病預防控制中心確認1例為HIV陽性；另有284份血樣其他指標不合格?？蛇M行核酸檢測的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV ELISA合格血液樣本共13 716份。見表1。

2.2核酸檢測結果

經血清學檢測合格的13 716例獻血者標本中，19個NAT匯集檢測呈反應性，反應性率為1.39‰。19例NAT匯集檢測反應性標本中，11例為NAT拆分檢測病毒核酸反應性、8例為NAT拆分檢測病毒核酸無反應性。在拆分檢測病毒核酸反應性標本中，HBV DNA反應性為11例（0.8‰）、HCV RNA反應性為0例（0%）和HIV（1+2型）RNA反應性為0例（0%）。見表2。

3　結論

實驗結果表明各月間NAT反應性率存在差異，NAT反應性率1月0.91‰，2月0.72‰，3月0.25‰，4月1.57‰，有研究表明HBV輸血殘余風險高于HIV或HCV［6-8］，本實驗結果中NAT核酸反應性標本均為HBV DNA反應性，也證實HBV輸血傳播的殘余風險相對較高，這可能與我國的HBV高感染率有關。

［1］張妍，朱海峰，孫波，等.核酸檢測技術在血液篩查中的應用及分析［J］.中國輸血雜志，2012，25（12）:1298-1300.

［2］孫波.輸血前血液篩查中新型HBV基因突變及抗原分析的研究［D］.濟南:山東大學，2013:14-18.

［3］張哲，杜勇，周建霖.核酸檢測技術在血液篩查中的應用進展［J］.現代實用醫學，2011，23（10）:1088-1090，1093.

［4］葉賢林，鄭欣，熊文，等.核酸檢測技術在血液篩查中的應用研究［J］.熱帶醫學雜志，2011，11（S1）:1138-1140.

［5］鄭優榮，梁浩堅，李仲平，等.核酸檢測技術在廣州地區獻血者血液篩查中的應用［J］.中國輸血雜志，2013，26（12）:1211-1214.

［6］王芳，金釗，林松峰，等.核酸檢測在血液HBV篩查中的應用研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2010（4）:795-796，851.

［7］段勇，郭逸，葉世輝.病毒核酸檢測技術在西安地區血液篩查中的應用分析［J］.中國輸血雜志，2014，27（8）:842-844.

［8］鐘涵.核酸擴增技術在血液篩查中的應用研究［D］.重慶:重慶醫科大學，2011:13-17.

Analysis of the Effect of EIA and NAT on HBV，HCV，HIV in Volunteer-donators in Qiqihar

LI Wei WEN Xinna ZHENG Huili Department of Clinical Laboratory，The Central Red Cross Blood Stations in Qiqihar，Qiqihar Heilongjiang 161006，China

Objective To investigate the effect of EIA and NAT on screening HBV，HCV，HIV-1 and HIV-2 in volunteer-donators in Qiqihar in 2016.Methods The HBV，HCV and HIV （1+2 type） were screened in volunteer-donators in Qiqihar in 2016.Results The results of EIA showed that the negative of HBsAg，anti-HCV and anti-HIV were 13 716 samples in 14 097.The results of NAT showed that the reactivity rate of HBsAg，anti-HCV and anti-HIV were 19 samples in 13 716，the reactivity rate was 1.39‰.11 in 19 NAT reactivity samples were NAT split testing reactivity of the viral nucleic acid，and all were HBV DNA reactivity.Conclusion NAT can improve the blood transfusion safety and reduce the risk of transfusion related viruses，the nucleic acid reactivity was HBV DNA，no was HBsAg.

ELISA，Nucleic acid testing，Blood screening，Blood safety

R512

A

1674-9308（2016）21-0035-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.019

齊齊哈爾市紅十字中心血站檢驗科，黑龍江 齊齊哈爾 161006

鄭慧麗，E-mail:ahui66@sina.com