濕疹洗劑冷濕敷對小鼠急性濕疹皮損組織降鈣素相關基因肽含量及組織炎癥的影響

鄧瑾　劉愛民

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濕疹洗劑冷濕敷對小鼠急性濕疹皮損組織降鈣素相關基因肽含量及組織炎癥的影響

鄧瑾1，2劉愛民3

目的 觀察不同濃度的濕疹洗劑對小鼠急性濕疹模型降鈣素相關基因肽（CGRP）及皮膚組織炎癥等指標數值影響。方法 采取2，4二硝基氟苯法建立小鼠急性濕疹模型，采用濕疹洗劑20%，10%，5%高，中，低濃度溶液冷濕敷，以3%硼酸溶液對照，10 d后檢測真皮炎癥細胞數及降鈣素相關基因肽等數值。結果 真皮炎性細胞細胞浸潤實驗，降鈣素相關基因肽含量變化定量實驗中單核細胞數及多核細胞數，小鼠耳降鈣素相關基因肽濃度數據分別表明在抑制小鼠真皮炎性細胞細胞浸潤的作用和定量觀察局部組織CGRP的增加作用上高濃度組、中濃度組的治療效果均比模型對照組的治療效果顯著，差異具有統計學意義（P＜0.01）；高濃度組的治療效果與中濃度組的治療效果對比，差異具有統計學意義（P＜0.05）；低濃度組的治療效果與陽性對照組的治療效果對比，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 濕疹洗劑具有顯著抑制炎性細胞浸潤和提高降鈣素相關基因肽的作用，高、中濃度濕疹洗劑濕敷治療急性濕疹的療效更加顯著。

洗劑；急性濕疹；動物實驗；炎性細胞；降鈣素相關基因肽

濕疹是一種較難徹底治愈的皮膚病，因其病因不詳治愈后易復發，遷延反復而不愈，給患者帶來很大痛苦?！皾裾钕磩睘槲以憾嗄陙砼R床療效較佳的外洗方劑，我們通過其不同濃度濕敷對小鼠急性濕疹模型的真皮炎性細胞侵潤及降鈣素相關基因肽（CGRP）影響的實驗研究，探討其治療急性濕疹的機理及不同濃度“濕疹洗劑”治療濕疹的療效差異。現報道如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物

昆明種小白鼠60只，體重（20±2）g，雌雄比1：1，室溫下喂養，由西安交大醫學院實驗動物中心提供，生產許可證號SCXK（陜）2014-001。

1.2實驗藥物及試劑

濕疹洗劑：苦參、黃柏、野菊花、馬齒莧各30 g，防風、芒硝、訶子各20 g（三九免煎制劑）.分別以蒸餾水900 ml，1 800 ml，3 600 ml配制成20%，10%，5%的高，中，低濃度溶液。

小鼠降鈣素相關基因肽定量測試（ELISA試劑盒）：R&D公司產品；

1.3實驗方案

1.3.1造模 采用2，4二硝基氟苯（DNFB）的方法造模［1］，肉眼觀察可見小鼠耳部皮膚表現為不同程度的彌漫性水腫性紅斑，邊界不清，皮膚浸潤明顯，可見散在少許丘疹，伴抓痕、血痂、鱗屑，提示小鼠急性濕疹樣模型造模成功［2］。

1.3.2實驗分組與給藥 標本的采集：隨機分為6組，分別為空白組（A組）、模型對照組（B組）、陽性對照組（C組）、高濃度組（D組），中濃度組（E組），低濃度組（F組）。B組不予治療，C組使用3%硼酸溶液治療，D組、E組、F組分別使用20%、10%、5%濕疹洗劑治療。各組治療液浸濕無菌紗布，膠帶固定濕敷小鼠皮損處，每天2次，每次30 min，連續10 d冷濕敷，于停藥后24 h用頸椎脫臼法處死小鼠，剪下左右耳殼，檢測各項指標。

1.4觀察指標

用8 mm打孔器取小鼠左耳中部同部位組織塊，石蠟包埋切片，制成常規蘇木素—伊紅（HE）染色，在光鏡下用網形目鏡測微尺以單盲法計數每平方毫米單核和多形核白細胞數，計算出各組平均值。

用8 mm打孔器取小鼠右耳中部同部位組織塊，天平測量質量，按比例加入冷冰醋酸液0.5ml，100℃水浴中煮10 min后，入組織勻漿機勻漿3 min，至見不到顆粒狀物，將勻漿液移入離心管中，離心機3 000轉/min，離心3 min，取上清液移入潔凈瓶內，滴入ELISA試劑盒，移入酶標儀測定降鈣素相關基因肽含量。

1.5統計學方法

本實驗使用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2　結果

2.1真皮炎性細胞計數

表1　各組小鼠耳真皮炎性細胞計數（）

表1　各組小鼠耳真皮炎性細胞計數（）

注：與陽性對照組比較，·P＜0.01；與陽性對照組比較，▲P＜0.05

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表2　各組小鼠耳降鈣素相關基因肽濃度（）

表2　各組小鼠耳降鈣素相關基因肽濃度（）

注：與陽性對照組比較，·P＜0.01；與陽性對照組比較，▲P＜0.05

組別　　n　　　降鈣素相關基因鈣（NG/L）A組　　10　　　　245.79±11.29 B組　　10　　　　142.32±6.87 C組　　10　　　　164.17±6.28·▲D組　　10　　　　236.53±5.71·E組　　10　　　　200.45±4.23·F組　　10　　　　173.12±5.45▲

實驗顯示抑制小鼠真皮炎性細胞細胞浸潤的作用中，單核細胞數及多核細胞數均降低，炎癥減輕，高濃度組、中濃度組作用明顯優于陽性對照組（P＜0.01）；低濃度組與陽性對照組的作用有差異（P＜0.05）。見表1。

2.2降鈣素相關基因肽含量變化

定量觀察局部組織CGRP的增加作用，小鼠耳降鈣素相關基因肽濃度指標均回升，高濃度組、中濃度組明顯優于陽性對照組 （P＜0.01）；低濃度組與陽性對照組的作用有差異（P＜0.05）。見表2。

3　討論

中醫認為急性濕疹［3］多由稟賦不耐，風、濕、熱邪浸淫肌膚，三邪客于皮膚肌表，引起皮肉間氣血不和，郁而生微熱則作癢，即所謂“熱微則癢”；濕熱蘊蒸則皮損處浸淫流滋。遵循《理瀹駢文》“外治之理，即內治之理，外治之藥，即內治之藥?！敝?，我院按照濕疹病因病機以清熱燥濕、解毒收斂、祛風止癢為外治治療原則，擬“濕疹洗劑”冷濕敷，方中苦參、黃柏苦寒清熱燥濕重用以為君藥；臣藥使用野菊花、馬齒莧苦辛而涼，具散風清熱 、解毒消腫之功；佐以防風祛風止癢，訶子、芒硝收斂固澀。該方除使用經統計數據顯示濕疹外用處方使用頻率較高的苦參、黃柏［4］，還加入了具有清熱、祛風、收濕、斂瘡功效的藥物，用于滲出較多階段的治療，加快皮損的消退。

CGRP［5］作為一種生物活性多肽，在體內分布十分廣泛，具有強大生理活性，在疾病的診斷與治療中具有重要意義。有研究表明［6］，T淋巴細胞上有CGRP受體存在，CGRP可通過增加細胞內CAMP的水平而抑制自然殺傷細胞（NK cel1）的活性。CGRP在調節巨噬細胞對激活因子的反應以及傳遞抗原的功能方面也發揮重要作用。Salomon［7］等的研究顯示AD患者血漿中CGRP的表達水平低于正常人的表達，在疾病加重期明顯低于正常人的表達水平，而在疾病緩解期有所升高，與正常人的表達無明顯差異。這些發現均表明在體內，CGRP均具有潛在的免疫調控作用。

綜上所述，“濕疹洗劑”臨床治療濕疹，效果明顯，無毒副作用，使用安全，且不易耐藥，具有顯著抑制炎性細胞浸潤和提高降鈣素相關基因肽的作用，對急性濕疹的治療作用顯著。臨床亦可用于急性皮炎、濕疹、藥疹、接觸性皮炎、感染性皮膚病等治療。

［1］宋智琦，林熙然.某些炎癥介質拮抗劑抗過敏作用的實驗研究［J］.中國皮膚性病學雜志，1998，12（5）:266-267.

［2］張學軍.皮膚性病學［M］.7版.北京:人民衛生出版社，2008:107.

［3］武李莉，閆英.濕疹的中醫臨床研究進展綜述［J］.現代中醫臨床，2014，21（3）:57-60.

［4］王金英，蔡琳，楊洪軍，等.《中醫方劑大辭典》中濕疹外用方劑用藥規律分析［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（19）:12-15.

［5］鄔元平.降鈣素基因相關肽研究進展［J］.國際檢驗醫學雜志，1999，20（5）:201-202.

［6］張萬江，盛樹力.降鈣素基因相關肽研究進展［J］.首都醫科大學學報，1990，11（4）:314-325.

［6］Scholzen T，Armstrong CA，Bunnett NW，et a1.Neuropep—tides in the skin: interactions between the neuroendocrine and the skin immune systems［J］.Exp Dermatol，1998，7（2-3）:81-96.

［7］Salomon J，Baran E.The role of selected neuropeptides in pathogenesis of atopic dermatitis ［J］.J Eur Acad Dermatol Venereol，2008，22（2）:223-228.

The Application of Eczema Lotion Cold Wet in Mice With Acute Eczema Skin Tissue on the Influence of CGRP Content and Tissue Inflammation

DENG Jin1，2LIU Aimin31 Clinical Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，He'nan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou He'nan 450046，China，2 Department of Dermatologica，Traditional Chinese Medicine Hospital of Sanmenxia City，Sanmenxia He'nan 472000，China，3 Department of Dermatological，He'nan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou He'nan 450000，China

Objective To observe the different concentrations of eczema lotion on the mice model of acute eczema calcitonin gene related peptide（CGRP） and skin tissue inflammation index number.Methods 2，4 dinitrodiphenyl fluorine benzene method to establish a mouse model of acute eczema，the eczema lotion 20%，10%，5%，high，cold wet apply low concentration solution，compared with 3% boric acid solution，10 days after detection of dermal inflammatory cells and calcitonin gene related peptide （CGRP） and so on.Results Dermal cells，inflammatory cell infltrate experiment，the changes of calcitonin gene related peptide content quantitative experiment showed that the treatment of high concentration group，the concentration of treatment than the model control group with significant difference （P＜0.01）； The high concentration group there are differences between the treatment group than in the concentration （P＜0.05）；The treatment of low concentration groups than there are differences in the treatment of positive control group （P＜0.05）.Conclusion eczema lotion has signifcant inhibition of infammatory cell infltration，and improve the effect of calcitonin gene related peptide，high，medium concentration eczema lotion the curative effect of treating acute eczema is more signifcant.

Lotion，Acute eczema，Animal experiments，Inflammatory cells，Calcitonin related gene peptide

R275

A

1674-9308（2016）21-0192-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.119

1 河南中醫藥大學中西醫結合臨床系，河南 鄭州 450046；2河南省三門峽市中醫院皮膚科，河南 三門峽 472000；3 河南省中醫院皮膚科，河南 鄭州 450000

劉愛民，E-mail:13592603226@163.com