中國野生葡萄葉綠體分離及葉綠體DNA提取的研究

謝海坤，焦　健，樊秀彩，張　穎，姜建福，孫海生，劉崇懷

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所，鄭州450009)

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中國野生葡萄葉綠體分離及葉綠體DNA提取的研究

謝海坤，焦健，樊秀彩，張穎，姜建福，孫海生，劉崇懷*

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所，鄭州450009)

以中國野生刺葡萄、山葡萄、桑葉葡萄和東南葡萄的成熟葉片為材料，比較柱式植物葉綠體DNAout試劑盒和改良的高鹽-低pH法分離葉綠體及提取cpDNA效果。結(jié)果顯示：(1)2種方法均分離得到了中國野生葡萄的葉綠體，但與柱式植物葉綠體DNAout試劑盒相比，改良的高鹽-低pH法得到的葉綠體濃度高、雜質(zhì)少，更適合中國野生葡萄葉綠體分離。(2)柱式植物葉綠體DNAout試劑盒提取的cpDNA，其OD260/OD280在1.28～1.36之間，質(zhì)量濃度為4.2～7.8 ng·μL-1，質(zhì)量低，不能滿足后續(xù)測(cè)序要求；而改良的高鹽-低pH法提取的cpDNA，其OD260/OD280值在1.84～1.90之間，質(zhì)量濃度為2 514.4～4 133.7 ng·μL-1，質(zhì)量高，純度好，能滿足后續(xù)測(cè)序要求。研究表明，改良的高鹽-低pH法能簡(jiǎn)便、快速獲得中國野生葡萄完整葉綠體及高質(zhì)量cpDNA，并且提取的cpDNA可滿足后續(xù)測(cè)序要求，為葡萄屬植物葉綠體基因組的深入研究奠定了基礎(chǔ)。

中國野生葡萄；葉綠體分離；cpDNA提取；柱式植物葉綠體DNAout；改良的高鹽-低pH法

葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的重要細(xì)胞器，具有相對(duì)獨(dú)立的遺傳物質(zhì)(cpDNA)。cpDNA一般長120 160 kb[1]，多數(shù)是共價(jià)閉合雙鏈分子，少數(shù)為線狀分子。葉綠體基因組由4部分組成，大單拷貝區(qū)(LSC)、小單拷貝區(qū)(SSC)和2個(gè)反向重復(fù)序列(IRs)。葉綠體基因組序列高度保守，且屬于母系遺傳，后代遺傳穩(wěn)定，已在遺傳結(jié)構(gòu)分析[2]、分子標(biāo)記[3]、核質(zhì)互作和葉綠體基因工程[4]、起源演化[5]等領(lǐng)域開展了廣泛研究。……