琥乙紅霉素與二甲酚橙荷移反應及其測定*

王曉玲，張　萍，王　歡

(咸陽師范學院化學與化工學院，陜西　咸陽　712000)

?

琥乙紅霉素與二甲酚橙荷移反應及其測定*

王曉玲，張萍，王歡

(咸陽師范學院化學與化工學院，陜西咸陽712000)

研究了在無水乙醇-鹽水介質中，琥乙紅霉素與二甲酚橙能發生電荷轉移反應，生成電荷轉移型絡合物，據此建立了琥乙紅霉素荷移光度分析的新方法。實驗最大吸收波長為580 nm，表觀摩爾吸光系數為9.82×103L·mol-1·cm-1線性回歸方程為y=1.245x-0.0598，相關系數r=0.9997，琥乙紅霉素的量在200～600 μg/10 mL范圍內服從比爾定律。方法靈敏度較高、選擇性和重現性好，用于琥乙紅霉素片及琥乙紅霉素膠囊中琥乙紅霉素含量的測定，其相對標準偏差為0.23%～0.75%，加標回收率為99.0%～101%。

分光光度法；琥乙紅霉素；荷移反應；二甲酚橙

電荷轉移反應是由電子相對豐富的分子-電子給予體和電子相對缺乏的分子-電子接受體之間通過電荷轉移而形成新的絡合分子的過程，若反應過程吸收的是可見光的能量，則該物質就會是因電荷轉移而顯色。琥乙紅霉素分子中叔氨基上的氮原子有孤對電子，可作為電子給予體; 二甲酚橙是一平面缺電子體系，其中心碳原子和兩個氮原子上都帶有正電荷，顯正電性，可作為電子接受體，二者在無水乙醇-鹽水介質中，能發生電荷轉移反應而顯色，據此建立了電荷轉移光度法測定琥乙紅霉素的新方法，目前測定琥乙紅霉素的方法主要有色譜法[1-2]、藥典學[3]、流動注射化學發光法[4-5]、差示旋光法[6]、分光光度法[7-10]等。而利用二甲酚橙和琥乙紅霉素的荷移反應測定琥乙紅霉素的方法未見報道。該方法利用氯化鈉作為增敏劑和增溫劑，靈敏度較高，體系穩定，成功測定了藥劑中琥乙紅霉素的含量。

1　實　驗

1.1主要儀器及試劑

722S可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)UPK-11-40型優普超純水機(上海優普實驗有限公司)；PHS-2C型精密酸度計。

1 mg/mL琥乙紅霉素標準液：在分析天平上準確稱取琥乙紅霉素的標準樣品0.1000 g于小燒杯中，加少量無水乙醇使之完全溶解，用無水乙醇定溶到100 mL；2.63×10-3mol/L 二甲酚橙溶液：準確稱量二甲酚橙0.5000 g在燒杯中，用水溶解溶解后定容至250 mL。

1.2實驗方法

在兩只25 mL比色管中，分別加入二甲酚橙溶液0.3 mL，向其中一支加入0.2 mL琥乙紅霉素標準溶液，另一支不加，再分別加入飽和食鹽水2.5 mL、無水乙醇0.2 mL，加水定容至10 mL，搖勻。以試劑空白為參比，用1 cm比色皿在分光光度計上，測定580 nm處吸光度值 A。

2　結果與討論

2.1吸收曲線

根據實驗方法配制空白和試劑溶液，在400～650 nm波長范圍內測定吸光度A0和A，作出吸收曲線圖。如圖1所示，曲線1為二甲酚橙的吸收曲線，其最大波長在440 nm,曲線2為琥乙紅霉與二甲酚橙反應生成荷移絡合物的曲線圖，其最大吸收波長為580 nm，荷移絡合物的最大吸收波長比試劑空白的最大吸收波長紅移了140 nm。選擇580 nm為實驗波長。

圖1　吸收曲線圖

2.2反應條件探索

2.2.1介質的選擇及用量

按實驗方法，試驗了HCl、H2SO4、H3PO4、KCl-HCl、鄰苯-HCl、KH2PO4-NaOH(pH=7.2)、H3BO3-KCl-NaOH(pH=8.53)、硼砂-NaOH(pH=11.04)、KCl-NaOH(pH=13.0)無水乙醇等溶液對反應體系的影響。實驗顯示在無水乙醇介質中顯色反應效果較好。實驗選用無水乙醇為介質。

2.2.2無水乙醇的用量

試驗設4個處理，采取隨機區組排列，3次重復，小區面積為1m×50m=50m2，播種量為15 g/m2。4個處理播種期：T1：4月 10 日，T2：5月 10 日，T3：6 月9日，T4：8月9日。選用120 cm寬的黑地膜，對試驗地進行一致處理，微起壟，壟高10 cm，壟面100 cm，壟間距20 cm。地膜覆好后，2 m一個土腰帶（寬10 cm），在膜面上用點播器打穴眼，穴眼深0.5 cm，穴距9 cm，行距3 cm，打眼器直徑為9 cm，播種行數為8行，全部鋪設噴灌在干旱時及時補水，種植密度40 穴 /m2。

實驗顯示，無水乙醇的用量在0.1～0.3 mL 范圍內A趨于穩定，此后吸光度A雖然在慢慢增大，但反應體系不夠穩定，綜合考慮以0.2 mL為無水乙醇的最佳用量

圖2　無水乙醇用量

2.2.3二甲酚橙的用量

隨著二甲酚橙用量的增加，吸光度在A在慢慢增大，當二甲酚橙的量為0.3 mL時A值達到最大且穩定，此后隨著其用量的增大A值漫漫減小，以0.3 mL作為二甲酚橙的最佳用量。

圖3　二甲酚橙的用量

2.2.4離子強度的影響

按照實驗方法，試驗了可溶性的硝酸鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽等，發現加入飽和氯化鈉后，反應體系的穩定性和靈敏度都有明顯提高，當飽和氯化鈉用量在1.5 mL～3.0 mL時，ΔA大且穩定。實驗選用飽和氯化鈉的最佳用量為2.5 mL。

圖4　飽和氯化鈉用量

琥乙紅霉素V/mL不加飽和鹽水A加飽和鹽水AΔA靈敏度0.30.2510.3180.067提高26.8%

2.2.5反應溫度和時間影響

在常溫下，顯色反應迅速發生，在不同的反應時間下，測定A值的變化。結果發現A值基本沒有變化。故此反應在常溫下進行，與反應時間無關。

2.2.6反應順序的影響

表2　反應順序1

表3　反應順序2

表4　反應順序3

2.2.7工作曲線

配制琥乙紅霉素的系列標準溶液，在最大吸收波長580 nm處，測定其不同的吸光度A值，以標準溶液的量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制工作曲線，其線性回歸方程為y=1.245x-0.0598，相關系數r=0.9997，表觀摩爾吸光系數為9.82×103L·mol-1·cm-1，琥乙紅霉素的量在200～600 μg/10 mL范圍內與A呈良好的線性關系。

圖5　工作曲線圖

2.2.8干擾離子

對0.3 mg/10 mL琥乙紅霉素進行測定，當相對誤差≤±5%時，考察了常見離子和藥物賦形劑的干擾情況。實驗表明，200倍的淀粉；60倍的精氨酸；40倍的葡萄糖均不干擾測定。

2.3琥乙紅霉素與二甲酚橙反應機理探討

按試驗方法，應用等摩爾連續變化法和斜率比法測得琥乙紅霉素與二甲酚橙絡合比為1:1。琥乙紅霉素分子中叔氨基上的氮原子有孤對電子，可作為電子給予體; 二甲酚橙是一平面缺電子體系，其中心碳原子和兩個氮原子上都帶有正電荷，顯正電性，可作為電子接受體，二者反應可以生成1:1的電荷轉移絡合物。荷移反應可表示如下：

3　樣品分析

3.1琥乙紅霉素片

取琥乙紅霉素片四片于50 mL的小燒杯中，加無水乙醇攪拌溶解、過濾，用無水乙醇定容到250 mL的容量瓶中。測定時每次取0.2 mL。

3.2琥乙紅霉素膠囊

取琥乙紅霉素膠囊一粒，將內容物倒入小燒杯，加適量乙醇溶解、過濾、濾液用無水乙醇定容至50 mL容量瓶中，,再取該液10 mL稀釋到25 mL作為樣品測定液。測定時取0.2 mL。

表5　樣品測定結果

4　結　論

研究了在無水乙醇—鹽水介質中，琥乙紅霉素與二甲酚橙能發生電荷轉移反應，生成電荷轉移型絡合物，據此建立了琥乙紅霉素荷移光度分析的新方法。方法靈敏度較高、選擇性和重現性好，用于琥乙紅霉素片及琥乙紅霉素膠囊中琥乙紅霉素含量的測定，其相對標準偏差為0.23%～0.75%，加標回收率為99.0%～101%。

[1]關日晴. 高效液相色譜法測定琥乙紅霉素[J].中國藥品標準，2002, 3(3): 161-162.

[2]黃榕珍, 修虹, 陳水專. 高效液相色譜法測定琥乙紅霉素膠囊的含量[J]. 海峽藥學, 2000, 12(4): 26-27.

[3]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典.二部[M]. 北京: 化學工業出版社, 2000: 801.

[4]王建國, 汪敬武. 流動注射化學發光測定琥乙紅霉素[J]. 南昌大學學報, 2007, 31(4): 370-373.

[5]張社增, 馬紅艷. 流動注射電化學發光分析法測定琥乙紅霉素[J]. 理化檢驗(化學分冊), 2007,.43(5): 345-347.

[6]胡德放, 黃澤蘭, 殷美蘭. 差示旋光法測定琥乙紅霉素的含量[J]. 安徽醫藥, 2005, 9(10): 750-751.

[7]李華侃, 榮玉梅, 徐大慶. 紅霉素琥珀酸乙酯與茜素磺酸鈉的荷移反應研究[J]. 光譜實驗室, 2005, 22(1): 76-79.

[8]王曉玲, 李東, 李玉蘭. 紫外分光光度法測定琥乙紅霉素膠囊中琥乙紅霉的含量[J]. 中國藥業, 2003, 12(12): 42-43.

[9]李華侃，肖井坤.琥乙紅霉素與紫色素的荷移反應及其測定[J] 理化檢驗(化學分冊), 2006, 42(9): 735-755.

[10]孫曙光.茜素紅的荷轉移反應測定琥乙紅霉素[J] 數理醫藥學雜志2005, 18(1): 56-57.

Determination of Erythromycin Ethylsuccinate Based on Charge Transfer Reaction between Erythromycin Ethylsuccinate and Xylenol Orange*

WANGXiao-ling,ZHANGPing,WANGHuan

(School of Vhemistry & Vhemical Engineering, Xianyang Normal University, Shaanxi Xianyang 712000, China)

A novel spectrophotometric method for the determination of erythromycin ethylsuccinate was established based on the charge transfer reaction between ethylsuccinate and xylenolorange in ethanol-salt water. The apparent molar absorptivity of the color compleex was 9.82×103L·mol-1·cm-1at 580 nm. The linear regression equation was y=1.245x-0.0598. Beers law was obeyed in the range of 200～600 μg/10 mL of erythromycin ethylsuccinate correlation coefficient was 0.9997. The method has high sensitivity, good selectivity and reproducibility for the determination of erythromycin ethylsuccinate in erythromycin ethylsuccinate tablets with RSD of 0.23%～0.75%, and recoveries between 99.0%～101%.

spectrophotometry; erythromycin ethylsuccinate; charge-transfer reaction; xylenol orange

陜西省科技廳科研項目(2012JQ2014)。

王曉玲(1964-)，女，高級工程師，大學本科，主要研究方向為光度分析和催化動力學分析。

O657.32

A

1001-9677(2016)07-0125-04