幽門螺桿菌感染對胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態及胃癌組織hOGG1 mRNA表達水平的影響

黃衛紅，陳　亮，宋海娟（啟東市第三人民醫院內科，江蘇南通226200）

幽門螺桿菌感染對胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態及胃癌組織hOGG1 mRNA表達水平的影響

黃衛紅，陳亮，宋海娟
（啟東市第三人民醫院內科，江蘇南通226200）

目的研究幽門螺桿菌（Hp）感染對胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態的影響。方法將2013年9月至2015年6月確診為胃癌的168例患者按是否感染Hp分為感染組（98例）和非感染組（70例），分別測定血漿氧化抗氧化指標及8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）水平，以及胃癌組織人8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1（hOGG1）mRNA的表達。結果感染組患者血漿髓過氧化物酶、黃嘌呤氧化酶、丙二醛、8-OHdG水平及hOGG1 mRNA相對表達量均高于非感染組，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽還原酶、總抗氧化能力水平均低于非感染組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論Hp感染能導致胃癌患者氧化抗氧化平衡失調更加明顯，且可能因此加重了DNA損傷。

螺桿菌，幽門；胃腫瘤；氧化；抗氧化；8-羥基鳥嘌呤糖苷酶

胃癌是我國高發的消化系統腫瘤之一，目前有研究表明，幽門螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）感染是胃癌的主要發病因素之一［1］。李一鑫等［2］研究表明，伴Hp感染的胃癌患者預后往往較無Hp感染者差，5年生存率明顯下降。此外近年來研究還發現，由于體內氧化抗氧化平衡失調，引發體內氧自由基大量增加，氧自由基能夠對體內DNA造成損傷，導致DNA發生突變，進而導致腫瘤的發生［3］。李玨等［4］研究表明，胃癌患者氧化應激水平明顯上調而氧自由基清除能力則明顯下降。本研究觀察了伴Hp感染的胃癌患者氧化抗氧化狀態變化，旨在探討Hp感染對胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態的影響，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年9月至2015年6月本院普外科收治的且術后病理檢查確診為胃癌患者168例，其中男100例，女68例；年齡35～71歲，平均（49.88± 8.87）歲。168例患者病理類型均為腺癌，術后胃癌標本均經改良吉姆薩染色和快速尿素酶試驗進行Hp鑒定。按是否伴Hp感染分為感染組（98例）和非感染組（70例）。感染組患者中男64例，女34例；平均年齡（50.67± 8.88）歲。非感染組患者中男36例，女34例；平均年齡（48.77±8.87）歲。兩組患者年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1血漿氧化指標檢測采集患者靜脈血5 mL，3000r/min離心10min，分離1～2mL血漿，-80℃低溫保存。應用紫外分光光度法測定血漿髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平。試劑盒為南京建成生物研究所生產。

1.2.2血漿抗氧化指標檢測應用黃嘌呤氧化酶法測定血漿超氧化物歧化酶（super oxide dismutase，SOD）水平，應用谷胱甘肽氧化酶法測定血漿谷胱甘肽還原酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）水平，應用紫外分光光度法測定血漿總抗氧化能力（total antioxidation competence，T-AOC）。試劑盒均為南京建成生物研究所生產。

1.2.3血漿 8-羥基脫氧鳥苷（8-oxodeoxyguanosine，8-OHdG）檢測應用酶聯免疫吸附法檢測血漿8-OHdG水平，試劑盒為美國ADL公司生產，空白孔加樣品稀釋液100 μL，其余分別加標準品或待測樣品100 μL，37℃反應120 min。棄液體并甩干后每孔加生物素標記抗體工作液100 μL，37℃孵育60 min，棄孔內液體并甩干，洗板3次，每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μL，37℃孵育60 min，依序每孔加底物溶液90 μL，37℃避光顯色，終止反應，用酶聯儀在450 nm波長依序測量各孔光密度值在加終止液后15 min內進行檢測。

1.2.4實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測人8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1（human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1，hOGG1）mRNA應用異硫氰酸胍一步法提取胃癌組織RNA后進行逆轉錄反應，使用Primer 5引物設計軟件設計引物，hOGG1正向引物序列為5′-GCACTGTGTACCGAGGAGAC-3，反向引物序列為5′-CAGCAGTCGCACACCTTGG-3′；產物長度為176 bp。內參甘油醛-3-磷酸脫氫酶正向引物序列為5′-CCTTCATTGACCTCAACTACATG-3′，反向引物序列為5′-CTTCTCCATGGTGGTGAAGAC-3′，產物長度為215 bp。上述引物均由日本TAKARA公司合成。PCR反應參數：94℃預變性5 min，94℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，合計35個循環，采用美國應用生物系統公司生產Step OneTM實時PCR儀進行PCR反應并計算每個反應管內的熒光信號到達設定的閾值時所經歷的循環數，即Ct值，并計算hOGG1 mRNA相對表達量。

1.3統計學處理應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1兩組患者血漿氧化指標比較感染組患者MPO、XOD、MDA水平均高于非感染組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2兩組患者血漿抗氧化指標比較感染組患者血漿SOD及GSH-PX、T-AOC水平均低于非感染組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1　兩組患者血漿氧化指標比較（±s）

表1　兩組患者血漿氧化指標比較（±s）

注：-表示無此項。

組別感染組非感染組n 　M P O （U / L）　X O D （U / L）　M D A （n m o l / m L ）9 8 7 0 t P --2 8 . 3 4 ± 1 3 . 5 8 2 2 . 6 2 ± 1 1 . 5 3 2 . 8 6 ＜0 . 0 5 1 2 . 4 5 ± 6 . 7 8 9 . 5 8 ± 4 . 9 1 3 . 0 2 ＜0 . 0 5 2 0 . 7 5 ± 4 . 2 1 1 7 . 6 3 ± 3 . 5 8 5 . 0 8 ＜0 . 0 5

表2　兩組患者血漿抗氧化指標比較（±s）

表2　兩組患者血漿抗氧化指標比較（±s）

注：-表示無此項。

組別感染組非感染組n S O D （U / m L）　G S H -P X （U / m L）　T -A O C （U / m L ）9 8 7 0 t P --6 5 . 3 8 ± 2 5 . 7 6 7 9 . 6 4 ± 2 3 . 3 8 3 . 6 7 ＜0 . 0 5 7 2 3 . 5 6 ± 2 3 1 . 4 8 8 9 6 . 3 9 ± 1 9 8 . 3 2 5 . 0 6 ＜0 . 0 5 6 . 2 3 ± 3 . 3 2 7 . 9 5 ± 3 . 6 5 3 . 1 3 ＜0 . 0 5

2.3兩組患者血漿8-OHdG水平比較感染組患者血漿8-OHdG水平［（13.38±4.21）ng/mL］高于非感染組［（10.52± 3.19）ng/mL］，差異有統計學意義（t=4.79，P＜0.05）。

2.4兩組患者胃癌組織hOGG1 mRNA表達情況比較感染組患者胃癌組織hOGG1 mRNA相對表達量（3.14±0.43）高于非感染組（1.03±0.21），差異有統計學意義（t=37.93，P＜0.05）。

3　討　論

以往研究表明，胃癌患者血漿氧化指標，如MPO、XOD、MDA均明顯高于健康者，血漿抗氧化指標則明顯低于健康者，因此，胃癌的發生可能與氧化抗氧化平衡失調有關［5］。本研究測定了Hp感染胃癌患者血漿氧化抗氧化指標，結果發現，Hp感染胃癌患者血漿氧化指標，如MPO、XOD、MDA均明顯高于無Hp感染胃癌患者；而抗氧化指標，如SOD、GSH-PX、T-AOC則均低于無Hp感染胃癌患者，表明Hp感染胃癌患者氧化抗氧化平衡失調更加明顯。

SOD能及時清除體內超氧自由基，阻止其損傷脂類形成危害更大的羥自由基［6］。GSH-PX能將有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，從而保護細胞膜結構及功能不受過氧化物的干擾及損害［7］。此外有研究表明，急性白血病患者抗氧化指標也明顯下調［8］，與本研究結果基本一致。導致Hp感染胃癌患者氧化抗氧化平衡紊亂的主要原因可能是Hp長期慢性感染導致局部組織長期慢性炎癥，導致局部組織大量炎癥細胞浸潤［2］，從而導致氧化指標明顯升高，而抗氧化指標則明顯降低。

本研究還測定了血漿8-OHdG水平，結果表明，Hp感染胃癌患者血漿8-OHdG水平明顯高于無Hp感染胃癌患者，且差異有統計學意義（P＜0.05）；hOGG1 mRNA相對表達水平也明顯高于無Hp感染胃癌患者。目前有研究表明，氧自由基能直接與DNA發生作用，從而導致DNA損傷和突變，其中最主要致突變性損傷反應為C-8上鳥嘌呤與胸腺嘧啶堿基顛換性突變，產生8-OHdG，而8-OHdG被認為具有突變傾向，因此，8-OHdG也被認為是DNA氧化損傷的生物標志［9］。同時有研究表明，hOGG1 是DNA氧化損傷修復途徑中清除8-OHdG的關鍵酶，hOGG1能特異性識別并切除8-OHdG［10］。Xiong等［11］對結腸癌的研究結果顯示，結腸癌患者血漿8-OHdG水平較健康者明顯升高，hOGG1蛋白表達和mRNA表達水平也明顯升高，表明其活性也明顯升高。

總之，本研究結果表明，Hp感染能導致胃癌患者氧化抗氧化平衡失調更加明顯，且可能加重了DNA損傷。

［1］李斌，李玉民，郭繼武，等.幽門螺桿菌與胃癌相關機制的研究進展［J］.世界華人消化雜志，2015，23（7）：1083-1089.

［2］李一鑫，李秀明，張楠，等.幽門螺桿菌感染與胃癌發生發展及預后的相關性研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2015，22（2）：91-94.

［3］吳佩群，白嵐.晚期氧化蛋白產物與胃腸道癌的相關性研究進展［J］.現代消化及介入診療，2015，20（1）：76-78.

［4］李玨，陳立新，張沛峰，等.胃癌患者血清活性氧、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化酶水平觀察［J］.右江民族醫學院學報，2013，35（4）：460-461.

［5］涂宏蕾，魏永長，孫海兵，等.胃癌患者血漿氧化抗氧化狀態及組織8-羥基鳥嘌呤糖苷酶mRNA表達水平［J］.細胞與分子免疫學雜志，2011，27（7）：793-794.

［6］Riboldi G，Nizzardo M，Simone C，et al.ALS genetic modifiers that increase survival of SOD1 mice and are suitable for therapeutic development［J］. Prog Neurobiol，2011，95（2）：133-148.

［7］Peng CH，Huang CN，Wang CJ.The anti-tumor effect and mechanisms of action of penta-acetyl geniposide［J］.Curr Cancer Drug Targets，2005，5（4）：299-305.

［8］Zhou F，Zhang W，Wei Y，et al.The changes of oxidative stress and human 8-hydroxyguanine glycosylase1 gene expression in depressive patients with acute leukemia［J］.Leuk Res，2007，31（3）：387-393.

［9］Valavanidis A，Vlachogianni T，Fiotakis C.8-hydroxy-2'-deoxyguanosine （8-OHdG）：A critical biomarker of oxidative stress and carcinogenesis［J］. J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev，2009，27（2）：120-139.

［10］Kuznetsov NA，Koval VV，Fedorova OS.Mechanism of recognition and repair of damaged DNA by human 8-oxoguanine DNA glycosylase hOGG1［J］. Biochemistry（Mosc），2011，76（1）：118-130.

［11］Xiong Y，Wu X，Rao L.Tetrastigma hemsleyanum（Sanyeqing）root tuber extracts induces apoptosis in human cervical carcinoma HeLa cells［J］.J Ethnopharmacol，2015，165：46-53.

Influence of Helicobacter pylori infection on plasma oxidation and antioxidant status and gastric cancer tissue hOGG1 mRNAexpression level in gastric cancer patients

Huang Weihong，Chen Liang，Song Haijuan（Department of Internal Medicine，Qidong Municipal Third People′s Hospital，Nantong，Jiangsu 226200，China）

ObjectiveTo study the influence of Helicobacter pylori（Hp）infection on the plasma oxidation and antioxidant status in the patients with gastric cancer.MethodsTotally 168 cases of definitely diagnosed gastric cancer from September 2013 to June 2015 were divided into the infection group（98 cases）and non-infection group（70 cases）according to whether having Hp infection.The levels of plasma oxidant and antioxidant indexes，8-hydroxydeoxyguanosine（8-OHdG）and gastric cancer tissue human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1（hOGG1）mRNA expression were detected.ResultsThe levels of plasma myeloperoxidase（MPO），xanthine oxidase（XOD），malondialdehyde（MDA）and 8-OHdG，and hOGG1 mRNA relative expression amount in the infection group were higher than those in the non-infection group，while the levels of super oxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-PX）and total antioxidation capacity（T-AOC）in the infection group were lower than those in the non-infection group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionHp infection could lead to the oxidant and antioxidant dysequilibrium more obvious，moreover aggravates the DNA damage.

Helicobacter pylori；Stomach neoplasm；Oxidant；Antioxidant；Human 8-hydroxyguanine DNA-glycosylase 1

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.06.015

A

1009-5519（2016）06-0845-02

黃衛紅（1979-），主治醫師，主要從事普內科臨床和研究工作。

（2015-12-01）