南北疆部分地區(qū)馬駑巴貝斯蟲病血清學(xué)調(diào)查

李永暢,恩克博力德,哈西巴特,劉進(jìn),鄧海峰,巴音查汗

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,新疆烏魯木齊830052;2.巴音郭楞蒙古自治州和靜縣獸醫(yī)站,新疆和靜841300;3.新疆伊犁昭蘇種馬場(chǎng)/軍馬場(chǎng),新疆伊犁835500)

南北疆部分地區(qū)馬駑巴貝斯蟲病血清學(xué)調(diào)查

李永暢1,恩克博力德2,哈西巴特2,劉進(jìn)3,鄧海峰3,巴音查汗1

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,新疆烏魯木齊830052;2.巴音郭楞蒙古自治州和靜縣獸醫(yī)站,新疆和靜841300;3.新疆伊犁昭蘇種馬場(chǎng)/軍馬場(chǎng),新疆伊犁835500)

為了解南北疆養(yǎng)殖馬區(qū)域馬匹感染駑巴貝斯蟲情況,筆者采用競(jìng)爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(cELISA)與血涂片鏡檢法相結(jié)合的試驗(yàn)法,對(duì)伊犁和巴州兩地區(qū)馬匹隨機(jī)抽樣(N=454),進(jìn)行駑巴貝斯蟲病血清學(xué)調(diào)查.經(jīng)c-Elisa調(diào)查發(fā)現(xiàn),駑巴貝斯蟲狀況(呈抗體陽性)總感染率為33.2%;其中北疆4縣馬駑巴貝斯蟲感染率分別15.8%、7.9%、5.7%和2.6%;南疆和靜縣感染率為0.4%.經(jīng)血液涂片檢查發(fā)現(xiàn)極少部分抗體陽性全血發(fā)現(xiàn)蟲體,其總陽性率6.6%.無臨床癥狀的馬匹血清抗體陽性率高說明該地區(qū)存在'傳染源'、傳播蜱蟲,故加以防范.

馬駑巴貝斯蟲病;補(bǔ)體-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定;血清學(xué)調(diào)查

駑巴貝斯蟲(Babeisia caballi)病是一種蜱傳性疾病,對(duì)中國乃至世界馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)有著嚴(yán)重危害(Avarzed等,1997)[1];臨床主要以發(fā)熱、貧血、黃疸為主要癥狀(DeWaal,1990);廣泛分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)(Pres-ton,2001)[2].本病由蜱傳播,呈全世界分布狀態(tài),如未進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷和及時(shí)有效的治療,往往可造成發(fā)病馬屬動(dòng)物的死亡.一直以來,我國北方地區(qū)[3-5]關(guān)于新疆地區(qū)

馬駑巴貝斯病的研究報(bào)道較少.為調(diào)查了解本地馬屬動(dòng)物疫病區(qū)和馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖主要地區(qū)的馬駑巴貝斯蟲病流行和分布情況,對(duì)馬駑巴貝斯蟲病(采集的均是無臨床癥狀的馬匹血液樣品)調(diào)查,此次運(yùn)用了競(jìng)爭ELISA(c-ELISA)試劑盒,對(duì)伊犁新源縣、尼勒克縣、昭蘇縣、特克斯縣和巴州和靜縣疫區(qū)馬匹進(jìn)行了血清學(xué)抽樣調(diào)查,為當(dāng)?shù)伛R屬動(dòng)物梨形蟲的綜合防治奠定基礎(chǔ).

1　材料與方法

1.1調(diào)查時(shí)間和對(duì)象2013年5月至2014年4月,分別對(duì)伊犁新源、尼勒克、昭蘇、特克斯和巴州和靜5個(gè)地方的放牧馬匹(N=454)進(jìn)行了抽樣調(diào)查,并采集其樣品進(jìn)行馬駑巴貝斯蟲cELISA檢測(cè).

1.2血液樣品來源血清:按常規(guī)方法,共采集454份血液樣品(N=454),-20℃保存待用.

全血和血液涂片:對(duì)所有被檢馬匹(N=454)進(jìn)行頸靜脈采血,現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行血液涂片、固定后帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行涂片染色,鏡檢.

1.3檢測(cè)試劑和儀器馬駑巴貝斯蟲抗體c-ELISA試劑盒,均購自美國VMRD公司,P130111-001;KHB ST-360酶標(biāo)儀.

1.4調(diào)查方法主要以臨床觀察和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為主,其中實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)以全血涂片鏡檢結(jié)合cELI?SA檢測(cè)為主(均參照試劑盒說明書進(jìn)行);涂片鏡檢步驟參考世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》[6]有關(guān)步驟進(jìn)行.

2　試驗(yàn)結(jié)果

2.1馬駑巴貝斯蟲病抗體血清學(xué)(cELISA)檢測(cè)結(jié)果

2.1.1北疆4縣馬駑巴貝斯蟲病cELISA檢查結(jié)果

采自于伊犁地區(qū)新源縣、尼勒克、昭蘇和特克斯,其采樣馬匹數(shù)分別為109匹、72匹、43匹,以及40匹.進(jìn)行cELISA試驗(yàn),其結(jié)果顯示,新源、尼勒克、昭蘇和特克斯,分別檢出陽性率為66.1% (72/109)、50.0%(36/72)、60.5%(26/43)、37.5% (15/40),詳見表1;本試驗(yàn)結(jié)果表明,駑巴貝斯蟲病在伊犁地區(qū)感染較為嚴(yán)重.

表1　北疆伊犁部分地區(qū)馬駑巴貝斯蟲病血清學(xué)感染情況

2.1.2南疆和靜縣馬駑巴貝斯蟲病cELISA檢查結(jié)果采自于南疆和靜縣,巴音郭楞鄉(xiāng)、額勒再特烏魯鄉(xiāng)、巴倫臺(tái)鎮(zhèn)、鞏乃斯鄉(xiāng)和巴音布魯克草原共190匹馬匹,進(jìn)行cELISA試驗(yàn),其結(jié)果顯示, 2份陽性血清,陽性率為1.1%(2/190),見表2.

表2　南疆巴州和靜縣馬駑巴貝斯蟲病血清學(xué)感染情況

經(jīng)SPPS20.0軟件分析所采樣區(qū)域駑巴貝斯蟲感染率發(fā)現(xiàn),巴州和靜縣、伊犁新源縣和尼勒克縣所采集的樣品駑巴貝斯蟲陽性率差異極顯著(P≤0.01),特克斯縣呈差異顯著(P≤0.05);而伊犁新源縣,尼勒克縣,昭蘇縣、特克斯縣樣品駑巴貝斯蟲陽性率差異不顯著(P>0.05).分析說明南北疆地區(qū)馬駑巴貝斯蟲感染存在差異性.

2.1.3馬駑巴貝斯蟲抗體陽性率強(qiáng)度分析根據(jù)c-ELISA試劑盒說明書,運(yùn)用SPPS20.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),計(jì)算其陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn);其陰性平均值為0.421,即OD值小于0.421為駑巴貝斯蟲病陽性, OD值大于0.421則為駑巴貝斯蟲病陰性.

2.1.4不同馬場(chǎng)(群)B.caballi感染情況調(diào)查結(jié)果

通過cELISA方法對(duì)采集的33個(gè)不同放牧馬群進(jìn)行馬駑巴貝斯蟲病流行病學(xué)調(diào)查分析.結(jié)果表明,馬駑巴貝斯蟲感染率最高達(dá)100%,感染率最低為0%,不同馬群B.caballi感染率差異極顯著(P<0.01).按照感染率的范圍將馬群分為5組,馬群B.caballi感染率X≥40的為51.1%,未感染馬群的為24.2%(表3).

表3　不同馬群B.caba lli陽性率分布情況

2.1.5不同年齡馬匹(群)B.caballi感染情況此次對(duì)巴州和伊犁部分地區(qū)不同年齡的馬匹進(jìn)行了駑巴貝斯蟲抗體的感染情況,結(jié)果表明,各年齡段中4-6歲馬感染較為嚴(yán)重,均高于其他3個(gè)年齡段的馬匹.詳見表4.

2.2馬駑巴貝斯蟲病cELISA檢查結(jié)果與血液涂片檢測(cè)結(jié)果對(duì)比經(jīng)血液涂片檢查發(fā)現(xiàn)極少部分抗體陽性全血發(fā)現(xiàn)血液型蟲體,其總陽性率6.61%(30/454),伊犁新源、尼勒克、昭蘇、特克斯以及巴州和靜縣,其平均感染率分別為12.8%(14/ 109)、5.56%(4/72)、18.6%(8/43)、12.5%(3/24)以及0(0/190),其結(jié)果與cELISA方法對(duì)比,發(fā)現(xiàn)其陽性感染率遠(yuǎn)低于血清學(xué)調(diào)查結(jié)果.

表4　不同年齡段馬駑巴貝斯蟲病感染情況

3　討論與小結(jié)

有關(guān)馬梨形蟲病的傳播媒介,兩種巴貝斯蟲分別在1901年和1903年被Theiler和Laveran命名為馬巴貝斯蟲(B.equi)和弩巴貝斯蟲(B.caballi).我國已查明草原革蜱、森林革蜱和銀盾革蜱等[6],駑巴貝斯蟲一般從每年的2月下旬開始出現(xiàn),3～ 4月達(dá)到高峰,5月下旬以后逐漸停止流行,病馬體溫升高,有黃疸現(xiàn)象,心力衰竭,嚴(yán)重者可死亡,該病嚴(yán)重地影響?zhàn)B馬業(yè)和馬術(shù)比賽的發(fā)展,因此,美國、加拿大、澳大利亞、日本等世界上許多國家都十分重視本病的防控工作,新疆伊犁河谷地區(qū)以及巴州地區(qū)等主要養(yǎng)馬區(qū)域防治本病刻不容緩.

2013年至2014年分別對(duì)新疆巴州和伊犁部分地區(qū)進(jìn)行了駑巴貝斯蟲病血清學(xué)調(diào)查.結(jié)果表明,駑巴貝斯蟲病在伊犁地區(qū)感染較為嚴(yán)重,經(jīng)SPPS20.0軟件分析,巴州和靜縣駑巴貝斯蟲感染與伊犁新源縣,尼勒克縣差異極顯著(P≤0.01),與特克斯縣差異顯著(P≤0.05).而伊犁4縣之間駑巴貝斯蟲感染率差異并不顯著(P>0.05).分析說明南北疆地區(qū)馬駑巴貝斯蟲感染存在差異性,而伊犁各地方之間差異不顯著.在對(duì)不同年齡馬匹馬駑巴貝斯蟲感染情況調(diào)查中發(fā)現(xiàn),被檢1-3歲馬駒中感染率為27.3%、均低于4-6歲、7-9歲以及10歲以上年齡馬匹,這可能與幼駒的母源抗體或未接觸傳播蜱等原因有關(guān);經(jīng)SPPS20.0軟件分析,各年齡階段差異不顯著(P>0.05).血液涂片檢查其結(jié)果與cELISA方法對(duì)比,發(fā)現(xiàn)其陽性感染率遠(yuǎn)低于血清學(xué)調(diào)查結(jié)果.這可能與馬匹感染駑巴貝斯蟲后,大多呈隱性感染或慢性攜帶蟲體產(chǎn)生相應(yīng)抗體,從而其血清學(xué)檢測(cè)為陽性,而大多血液涂片為陰性.本次檢測(cè)抗體陽性馬的血涂片中未發(fā)現(xiàn)蟲體和未出現(xiàn)任何臨床癥狀,這結(jié)論與Avarzed A[1]的"馬耐過馬駑巴貝斯蟲病后帶蟲免疫可長達(dá)7年之久"相一致.可以初步認(rèn)為上述抗體陽性馬屬動(dòng)物可能曾經(jīng)感染過馬駑巴貝斯蟲.

[1]Avarzed A,De Waal D T,Igarashi I,et al.Prevalence of equine piroplasmosis in central Mongolia[J].Vet Res,1997,64:141-145.

[2]Preston P M.Theileriosis.In:Service MW(ed)Encyclopedia of ar?thopod-transmitted infections of man and domestic animals[M]. CABI Wallingford,2001:487-502.

[3]許應(yīng)天,梁晚?xiàng)?宋建臣,等.用EMA-1基因重組蛋自對(duì)馬巴貝斯蟲病的血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2003,24(6): 108-109.

[4]Andv Alhassan,Wilawan Ptnnidontning,Masashi Okatnttra,et al.Developtnent of a single-round and multiplex PCR method for the simultaneous detection of Babesia caballi and Babesia equi in horse blood[J].VetParasi,2005,129(1-2):43-49.

[5]沈丹,薛紅,張海明,等.廣州及其周邊地區(qū)馬梨形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技,2012,37(5):17-19.

[6]李德昌,陳啟軍.我國馬梨形蟲病及其傳播者一蜱的地理分布[J].中國人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1994,6(14):202-206.

The Serological survey of Babesia caballi in part Southern and Northern of Xinjiang

LI Yong-chang1,Enkebolide2,Haxibate2,LIU Jin3,DENG Hai-feng3,Bayinchahan1
(1.Xinjiang Agricultural University School of Medicine,Urumqi 830052,China;2.Bayinguoleng Mongol Autonomous Prefecture and static County Veterinary Station,Hejing 841300,China;3.Yili Zhaosu stud farm/horse farm,Yili 835500,China)

In the present study,the authors used the Combination of competitive enzyme-linked immunosorbent assay(cELI?SA)test and blood smear to analyze the horses that might be infected with Babesia caballi in the southern and northern regions, Xinjiang.A total of 454 samples were random ly collected in those areas.The total infection rate confirmed by cElisa was 33.2%,and the Babesia caballi infection rates were 15.8%,7.9%,5.7%and 2.6%in 4 counties in the northern state,respectively,and thein?fection rate was 0.4%in Hejing county from the southern region.The total positive blood smear rate was 6.6%.Some horses were an?tibody-positive,but had no clinical symptoms,suggesting that there exists'source of infection'.

Babesia caballi;cElisa;antibody detection

Bayinchahan

S852.71

A

0529-6005(2016)02-0006-03

2014-10-31

國家自然科學(xué)基金委-NSFC-新疆聯(lián)合基金(U14 03282)

李永暢(1991-),男,碩士生,主要從事動(dòng)物寄生蟲病研究,E-mail:1121434514@qq.com

巴音查汗,E-mail:bynch@hotmail.com