努比亞山羊巴氏桿菌羊創傷球菌混合感染的診治

李潤成,楊宇,湯起武(湖南農業大學動物醫學院,湖南長沙410128)

努比亞山羊巴氏桿菌羊創傷球菌混合感染的診治

李潤成,楊宇,湯起武
(湖南農業大學動物醫學院,湖南長沙410128)

巴氏桿菌屬為無芽孢,不運動,兼性厭氧,菌體兩端常染色濃重的革蘭陰性小桿菌.本屬已確定的種有多殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和鴨疫巴氏桿菌等.在豬、牛[1]、羊[2]等動物常有巴氏桿菌感染的報道.創傷球菌屬是1993年Collins等提議設立的一個菌屬,目前該屬的主要成員有孔茲創傷球菌、羊創傷球菌、瑞典創傷球菌和化膿創傷球菌.只有羊創傷球菌分離自動物,其他均分離自人的臨床樣品.羊創傷球菌為革蘭陽性球菌,成雙或短鏈狀排列,在血平板上形成針尖大小,無色素,不溶血的菌落.該菌作為條件致病菌存在于自然界,常在創傷部位分離到, 2012年周偉等從肺炎患牛的肺臟分離到該菌,并進行了PCR鑒定和藥物敏感性分析[3].2014年3月2號湖南衡陽某努比亞山羊養殖場羊群發生了巴氏桿菌和羊創傷球菌混合感染,本文就該病例進行了細菌分離和PCR測序鑒定,并用分離菌分別進行了藥物敏感檢測,養殖場根據藥物敏感性檢測結果控制了疾病的發生和發展.報告如下.

1　發病情況

2014年3月2號湖南衡陽某努比亞山羊養殖場羊群發病,首先是從外地引進不久的羊群表現發病,羊場內共210只羊,15 d內死亡120只.發病羊體溫升高,水樣腹瀉,食欲絕廢,大多數流黏膿性鼻液,咳嗽,發病2～5 d即出現死亡.用恩諾沙星、慶大霉素、阿莫西林、青霉素等藥物治療,效果不理想.

2　剖檢變化

將病死羊剖開胸腔可見淡黃色滲出物,肺腫大、淤血、出血,有紅色肝變區,肝腫大、淤血,胃黏膜呈出血性炎癥,腸黏膜呈彌漫性出血,其他臟器病變不明顯.

3　實驗室診斷

3.1細菌分離培養取病死羊肺臟組織接種于血瓊脂平板,37℃培養48 h,結果長出了大量2種菌落

形態的細菌,且兩種菌落形態的細菌數量相當.將兩種形態的細菌分別進行劃線純培養,可見,較大菌落細菌培養12 h即可呈灰白色、發亮的露滴狀,較小菌落的細菌在劃線培養48 h才可看到針尖大小、透明小菌落.將純培養的細菌進行涂片與革蘭染色鏡檢,較大菌落細菌為革蘭陰性、兩極著色的桿菌,而較小菌落的細菌為革蘭陽性的球菌.

3.2分離菌的PCR擴增與測序鑒定取兩種形態的分離菌作為模版,用細菌通用引物[4](引物資料見文獻1)進行PCR擴增,擴增結果見圖1,由圖1可見從分離的兩株細菌均擴增出了約1 142 bp的目的條帶.將擴增的PCR產物送長沙鉑尚生物科技有限公司進行測序(序列已登錄到Gen?Bank,登錄號為KJ676643、KJ676644)和Blast分析.結果證明較大菌落形態的分離菌為巴氏桿菌,而較小菌落形態的分離菌為羊創傷球菌.

圖1　分離菌16S rRNA基因擴增結果

3.3細菌藥物敏感性檢測及臨床治療效果將分離菌進行液體增菌培養后,按藥敏試驗要求將菌液濃度調至0.5個麥氏單位后,根據不同細菌特性選擇檢測藥物,采用紙片法進行藥物敏感性檢測.結果見表1.

表1　分離菌藥物敏感性檢測結果

由表1可見,分離的巴氏桿菌除對阿米卡星、頭孢曲松、強力霉素、恩諾沙星、環丙沙星比較敏感外,對阿莫西林、青霉素、慶大霉素、鏈霉素、磺胺類藥不敏感;羊創傷球菌對頭孢類藥、青霉素、阿莫西林、阿米卡星、強力霉素、氟苯尼考等均比較敏感,但對恩諾沙星、環丙沙星不敏感.根據藥物敏感性檢測結果,羊場采用注射阿米卡星,口服強力霉素的治療方案.2 d后控制了羊的死亡情況,連用4 d后所有發病羊均恢復了食欲,沒有再出現發病情況.

4　討論與分析

本文從病死羊肺臟深部組織分離到兩種形態的細菌,并進行了16S rRNA基因的PCR擴增和測序.通過序列的Blast分析,發現分離菌分別為巴氏桿菌和羊創傷球菌.通過藥物敏感性檢測,發現巴氏桿菌敏感的藥物有阿米卡星、頭孢曲松、強力霉素、恩諾沙星、環丙沙星;羊創傷球菌敏感的藥物有頭孢類藥、青霉素、阿莫西林、阿米卡星、強力霉素、氟苯尼考.兩種菌共同敏感的藥物只有頭孢曲松、阿米卡星、強力霉素.這可能是養殖場使用恩諾沙星、慶大霉素、阿莫西林、青霉素治療效果不理想的原因.從細菌分離鑒定結果以及臨床用藥情況可見該養殖場努比亞山羊發病應該是由巴氏桿菌和羊創傷球菌混合感染引起.

[2]何成偉,田生花.牛巴氏桿菌病的診治[J].中國獸醫雜志, 2010,46(9):71.

[3]趙恒亮.山羊巴氏桿菌病的診斷及治療[J].中國獸醫雜志, 2007,43(6):35-36.

[4]周偉,李能章,魏學良,等.牛源羊創傷球菌的分離鑒定[J].中國預防獸醫學報,2012,34(7):584-586.

[5]Run-Cheng Li,Chao-Ting Xiao,Xing Qian,et al.Occurrence of Streptococcus dysgalactiae subsp.Equisimilis in Masked Palm Civet(Paguma larvata)[J].Journal of Animal and Veterinary Ad?vances,2012.11(12):2020-2023.

S852.61+2文獻標志碼:B

0529-6005(2016)02-0048-02

2014-09-16

李潤成(1979-),男,實驗師,碩士,從事動物傳染病的教學與科研工作,E-mail:lixuesheng99@126.com