不同培養(yǎng)條件對(duì)秦皇島地區(qū)葡萄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

白曉蒙，靜大鵬，李雙民，齊慧霞*

(1 河北科技師范學(xué)院生命科技學(xué)院，河北 秦皇島，066600；2 河北省懷來(lái)縣職業(yè)技術(shù)教育中心；3 河北省昌黎縣職業(yè)技術(shù)教育中心)

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不同培養(yǎng)條件對(duì)秦皇島地區(qū)葡萄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

白曉蒙1,2，靜大鵬1，李雙民3，齊慧霞1*

(1 河北科技師范學(xué)院生命科技學(xué)院，河北 秦皇島，066600；2 河北省懷來(lái)縣職業(yè)技術(shù)教育中心；3 河北省昌黎縣職業(yè)技術(shù)教育中心)

為明確秦皇島地區(qū)葡萄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的適宜環(huán)境，采用不同溫度、光照、培養(yǎng)基、氮源和碳源對(duì)葡萄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)進(jìn)行了試驗(yàn)研究。結(jié)果表明：秦皇島地區(qū)葡萄灰霉病菌絲生長(zhǎng)的最適宜溫度是20～25 ℃，全光條件下最適宜于菌絲的生長(zhǎng)；葡萄灰霉菌在供試的各種營(yíng)養(yǎng)條件的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，最適宜于其生長(zhǎng)的培養(yǎng)基是脅本哲氏培養(yǎng)基；碳源和氮源試驗(yàn)中，以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基和以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基最適于菌絲的生長(zhǎng)。

葡萄；灰霉病；菌絲生長(zhǎng)；秦皇島地區(qū)

葡萄灰霉病是由灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)引起的一種世界性的重要病害[1]，近年來(lái)在我國(guó)葡萄生產(chǎn)上的危害日漸加重。此外，灰霉菌還能危害番茄、草莓、黃瓜等多種植物，引起果實(shí)腐爛[2～4]。葡萄灰霉病菌以分生孢子及菌核在被害部位越冬，次年春季隨氣溫升高，病菌分生孢子及菌核萌發(fā)產(chǎn)生的分生孢子，借氣流傳播到花穗及幼果穗上進(jìn)行侵染[5]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)灰霉病的研究多集中于番茄、草莓及其他作物的生物學(xué)特性、抗逆性和防控上[6～8]，而對(duì)葡萄上灰霉病病原菌的鑒定[1]、病菌的致病性[9]以及病菌的抗藥性[10]等方面鮮有研究。而秦皇島地區(qū)是我國(guó)釀酒葡萄種植的主產(chǎn)區(qū)之一，每年因葡萄灰霉病的發(fā)生給當(dāng)?shù)仄咸焉a(chǎn)帶來(lái)了的損失有逐年加重的趨勢(shì)，特別是對(duì)該地區(qū)葡萄灰霉病的病菌生物學(xué)特性的研究未見(jiàn)報(bào)道。為此，筆者通過(guò)對(duì)葡萄灰霉病菌與溫度、光照、營(yíng)養(yǎng)源等因素的關(guān)系進(jìn)行試驗(yàn)研究，以明確當(dāng)?shù)仄咸鸦颐共【纳飳W(xué)特性，期望對(duì)于當(dāng)?shù)仄咸鸦颐共〉奶镩g防控工作提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試菌株：從秦皇島市昌黎縣中糧華夏長(zhǎng)城葡萄酒有限公司的葡萄基地，選取葡萄為樹(shù)齡為10年、籬架勢(shì)、株行距1.5 m×2.0 m且栽培管理一致的赤霞珠(Cabernet Sauvignon)釀酒品種，從上采集帶有灰霉病菌的果實(shí)，用無(wú)菌水將葡萄表面清洗后，將果實(shí)置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至大量菌絲出現(xiàn)。然后從果實(shí)上取少量菌絲于無(wú)菌水中配置成孢懸液，接種在PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，直至出現(xiàn)大量菌絲。再?gòu)男律L(zhǎng)的菌絲中取少量配置成孢懸液，再次接種培養(yǎng)。如此重復(fù)直至生長(zhǎng)出單菌落后，鏡檢確定所生長(zhǎng)出的菌是為灰霉病菌[11]。鑒定結(jié)束后，再次用接種環(huán)挑取灰霉病菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并依據(jù)柯赫氏反接種法鑒定[12]，對(duì)培養(yǎng)出的病菌進(jìn)行鑒定，明確為灰霉菌后，將純化的病原菌轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)基中保存?zhèn)溆谩?/p>

供試培養(yǎng)基品種：燕麥片培養(yǎng)基、玉米粒培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、PSA培養(yǎng)基、脅本哲氏培養(yǎng)基、Czapek培養(yǎng)基和大米汁培養(yǎng)基，共7種培養(yǎng)基備用；此外，以改良后的理查德培養(yǎng)基 (Richard medium)為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，根據(jù)試驗(yàn)需求進(jìn)行使用，其主要成分為：KNO310 g，KH2PO45 g，MgSO42.5 g，F(xiàn)eCl30.02 g，蔗糖30 g和蒸餾水1 000 mL。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1溫度對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響將病原菌打成直徑4 mm的菌餅，接種于PDA平板培養(yǎng)基上，分別置于5，10，15，20，25，30，35，40 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，每處理3皿，3次重復(fù)，用十字交叉法逐日測(cè)量菌落直徑。

2.2.2不同光照條件對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響在PDA平板上移入直徑4 mm的菌餅，分別置于全光，12 h光暗交替，全暗等3組光照條件下，置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)7 d，用十字交叉法逐日測(cè)量菌落直徑，每處理3皿，3次重復(fù)。

2.2.3不同培養(yǎng)基對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的影響將直徑為4 mm的病菌菌餅接種到燕麥片，玉米粒，PDA，PSA，脅本哲氏，Czapek，大米粒等7種培養(yǎng)基上，培養(yǎng)及測(cè)量方法同2.2.2。

2.2.4不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)病菌生長(zhǎng)的影響以改良的Richard培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以30 g蔗糖的含碳量為標(biāo)準(zhǔn)，以分子量計(jì)算，分別用相同含碳量的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、果糖和可溶性淀粉替換蔗糖，配制成含有不同碳源的培養(yǎng)基。以10 g KNO3的含氮量為標(biāo)準(zhǔn)，以分子量計(jì)算，分別用相同含氮量的NH4NO3，(NH4)2SO4，尿素，蛋白胨替換KNO3，配制成含有不同氮源的培養(yǎng)基。接種、培養(yǎng)及測(cè)量方法同2.2.2。

1.3數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel 2003版和DPS 7.05版分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并用字母標(biāo)記法進(jìn)行Duncan新復(fù)極差法分析。

2　結(jié)果與分析

2.1不同溫度對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)的影響

葡萄灰霉病菌在5～30 ℃的范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)(表1)。其中，溫度在5～10 ℃范圍內(nèi)菌絲生長(zhǎng)緩慢，隨著溫度的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)迅速加快。當(dāng)葡萄灰霉菌培養(yǎng)到第3天時(shí)，在15 ℃與20 ℃下培養(yǎng)的菌絲之間無(wú)顯著差異，其他培養(yǎng)溫度下各處理間差異就已經(jīng)達(dá)到極顯著水平；第4天時(shí)，15 ℃下培養(yǎng)的菌絲與20 ℃，25 ℃下培養(yǎng)的菌絲之間差異極顯著，且20 ℃和25 ℃下培養(yǎng)的菌落直徑已經(jīng)達(dá)到7.35 cm和7.77 cm，基本已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿，而15 ℃下培養(yǎng)的菌落直徑僅為3.67 cm；在30 ℃下培養(yǎng)的菌絲則又生長(zhǎng)緩慢，第4天時(shí)菌落直徑僅為3.75 cm，與在20 ℃和25 ℃下培養(yǎng)的菌絲相比差異達(dá)極顯著。由此可見(jiàn)，最適宜菌絲生長(zhǎng)的溫度是20～25 ℃。

表1　不同溫度對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)(菌落直徑)的影響 　 cm

注：大寫(xiě)字母代表0.01水平的差異情況，小寫(xiě)字母代表0.05水平的差異情況。下同。

2.2不同光照條件對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)的影響

葡萄灰霉菌在全暗、光暗交替和全光的光照條件下均可生長(zhǎng)，但不同光照處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響比較大(表2)。其中葡萄灰霉病菌在培養(yǎng)的第2天時(shí)，不同光照處理下菌落生長(zhǎng)直徑就已經(jīng)表現(xiàn)出了顯著差異。在培養(yǎng)的第3天時(shí)，菌落生長(zhǎng)直徑差異均達(dá)到極顯著水平。以在全光條件下菌絲生長(zhǎng)最快，其次為在光暗交替環(huán)境下。在此二者環(huán)境條件下，菌絲在培養(yǎng)第4天時(shí)，菌落直徑達(dá)到8.40 cm；全暗的環(huán)境下菌絲生長(zhǎng)最慢，但在第6天時(shí)菌落直徑也達(dá)到了7.10 cm。

表2　不同光照條件對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)(菌落直徑)的影響 　 cm

2.3不同培養(yǎng)基對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)的影響

脅本哲氏培養(yǎng)基最適宜葡萄灰病霉菌生長(zhǎng)，其次是PDA，PSA，大米汁培養(yǎng)基，最不適宜的是燕麥片培養(yǎng)基(表3)。葡萄灰霉病菌在培養(yǎng)的第3天時(shí)，在玉米汁培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落與在脅本哲氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落相比，菌落直徑無(wú)顯著差異；在該2種培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落與在其他各培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落之間存在極顯著差異。第4天時(shí)，在PDA和Cazpek培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落，菌落直徑無(wú)顯著差異；燕麥片和玉米汁培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落，菌落直徑也無(wú)顯著差異；但與其他各培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落之間，菌落直徑存在極顯著差異。

表3　不同培養(yǎng)基對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)(菌落直徑)的影響 　 cm

2.4不同碳源培養(yǎng)對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)的影響

碳源中以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基最適合葡萄灰霉病病原菌菌絲的生長(zhǎng)，其次是以乳糖為碳源的培養(yǎng)基，最不適合葡萄灰霉病菌的生長(zhǎng)的是以可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基(表4)。各種碳源的培養(yǎng)基中，菌絲生長(zhǎng)速度由快到慢依次為：蔗糖，乳糖，葡萄糖，麥芽糖，可溶性淀粉。在培養(yǎng)第3天時(shí)，以乳糖和葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基上菌落直徑無(wú)顯著差異；其他各碳源的培養(yǎng)基間，菌落直徑差異均達(dá)到極顯著水平。第4天時(shí)，以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基菌落生長(zhǎng)最快，直徑達(dá)到7.83 cm，且與其他各處理間達(dá)到了極顯著差異。

表4　不同碳源培養(yǎng)基對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)(菌落直徑)的影響 　 cm

2.5不同氮源培養(yǎng)基對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)的影響

蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基最適合葡萄灰霉病原菌菌絲的生長(zhǎng)，其次是以KNO3為氮源的培養(yǎng)基，最不適合葡萄灰霉病原菌菌絲生長(zhǎng)的是以尿素為氮源的培養(yǎng)基(表5)。各種氮源的培養(yǎng)基中，菌絲生長(zhǎng)速度由快到慢依次為：蛋白胨，KNO3，NH4NO3，(NH4)2SO4，尿素。培養(yǎng)的第3天時(shí)，除以NH4NO3與(NH4)2SO4為氮源的培養(yǎng)基和以KNO3與(NH4)2SO4為氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落之間差異不顯著外，與其他氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落生長(zhǎng)相比均達(dá)到了差異極顯著水平；培養(yǎng)的第4天時(shí)，在以尿素為氮源的培養(yǎng)基和以NH4NO3為氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落之間無(wú)顯著差異，在以(NH4)2SO4和KNO3為氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落之間無(wú)顯著差異，但以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落生長(zhǎng)最快，與它們之間差異達(dá)到極顯著水平。

表5　不同氮源培養(yǎng)基對(duì)葡萄灰霉病病菌生長(zhǎng)(菌落直徑)的影響 　 cm

3　結(jié)論與討論

葡萄灰霉病菌在5～30 ℃下均可正常生長(zhǎng)，其中溫度在20～25 ℃菌絲生長(zhǎng)速度最快，35 ℃及以上菌絲均不能生長(zhǎng)。這一結(jié)果與張鵬[13]葡萄灰霉病菌的研究結(jié)果基本一致，還與劉福平等[14]和徐明等[15]報(bào)道的番茄灰霉病病菌的適宜生長(zhǎng)溫度基本一致，說(shuō)明該病菌在葡萄和番茄上生長(zhǎng)對(duì)溫度的要求并無(wú)差異。

光照對(duì)葡萄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)有一定的影響。本次試驗(yàn)結(jié)果表明：全光照最適宜于葡萄灰霉病菌菌絲的生長(zhǎng)，其次是光暗交替較適宜于菌絲生長(zhǎng)。這一結(jié)果與雷百戰(zhàn)等[16]報(bào)道光照對(duì)灰霉菌菌絲生長(zhǎng)不大的結(jié)果存有差異；與徐明等[15]報(bào)道的番茄灰霉病病菌在黑暗條件下生長(zhǎng)最好也存在差異的結(jié)果也存在差異，說(shuō)明不同地區(qū)、不同作物上的灰霉病病菌生長(zhǎng)對(duì)光照需求存在差異。

此外，不同的營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)葡萄灰霉病菌的生長(zhǎng)影響不同。在供試的7個(gè)培養(yǎng)基中，脅本哲氏培養(yǎng)基最適合菌絲的生長(zhǎng)；在碳源和氮源試驗(yàn)中，以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基最適合葡萄灰霉病菌的生長(zhǎng)，最適合的氮源培養(yǎng)基是蛋白胨。但張鵬[13]的研究結(jié)果認(rèn)為病菌在硝酸鈉、硫酸按作為氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度要大于在蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基，這可能是由于不同地區(qū)生態(tài)條件、栽培條件等諸多因素對(duì)葡萄灰霉病菌菌株的生長(zhǎng)特性有所影響。因此，不同地區(qū)葡萄灰霉病菌的特性與差異還待進(jìn)一步探究。

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(責(zé)任編輯：朱寶昌，陳于和)

Effects of Different Culture Conditions on Mycelium Growth of Grape Gray Mould in Qinhuangdao

BAI Xiaomeng1,2,JING Dapeng1,LI Shuangmin3,QI Huixia1

(1 College of Life Science & Technology,Hebei Normal University of Science & Technology,Qinhuangdao Hebei,066600;2 Vocational Education Center of Huailai County,Hualai Hebei;3 Vocational Education Center of Changli County,Changli Hebei;China)

In order to determine the suitable environment for the growth of grape gray mould in Qinhuangdao area, the different temperatures, lights, culture media, as well as nitrogen and carbon sources were used to study in this paper. The results showed that in Qinhuangdao area, the most suitable temperature ofBotrytiscinereamycelial growth ranged from 20 ℃ to 25 ℃while all-light conditions tended to be suitable for the mycelium growth. Grape gray mould could grow in all tested culture media, the most of them seemed to beWakimotoTetsujimedium. In the C- and N-source tests, both media using sucrose as carbon source and peptone as nitrogen source were better for mycelium growth.

grape;gray mould;mycelium growth;Qinhuangdao area

10.3969/J.ISSN.1672-7983.2016.01.006

，女，碩士，教授。主要研究方向：植物病害流行及防治。E-mail: qihuix@163.com。

2016-01-11; 修改稿收到日期: 2016-02-21

S436.631.1+9

A

1672-7983(2016)01-0030-05

白曉蒙，碩士研究生。主要研究方向：葡萄病害及其防治。