抗神經元抗體對神經系統副腫瘤綜合征診斷的意義

呂　虹　吳　淵　王利娟　張國軍*

(1.首都醫科大學附屬北京天壇醫院檢驗科，北京 100050；2.北京市免疫試劑臨床工程技術研究中心，北京 100050；3.北京市順義區醫院檢驗科，北京 101300)

?

· 檢驗醫學與臨床 ·

抗神經元抗體對神經系統副腫瘤綜合征診斷的意義

呂虹1，2吳淵3王利娟1，2張國軍1，2*

(1.首都醫科大學附屬北京天壇醫院檢驗科，北京 100050；2.北京市免疫試劑臨床工程技術研究中心，北京 100050；3.北京市順義區醫院檢驗科，北京 101300)

目的探討抗神經元抗體譜對神經系統副腫瘤綜合征(paraneoplastic syndrome of nervous system，PNSNS)臨床診斷的價值。方法本研究采用神經元抗原譜抗體IgG試劑盒(歐蒙醫學實驗診斷股份公司)對68份血清樣本的抗Hu抗體、抗Yo抗體、抗Ri抗體、抗Ma2/ta抗體、抗CV2抗體、抗Amp抗體進行檢測。結果48例PNSNS中陽性6例(6/48，12.5%)，其中A組中樞神經脫髓鞘病陽性率為23.5%(4/17)、B組運動神經元病陽性率為0% (0/11)、C組格林巴利綜合征陽性率為10.0%(2/20)；健康體檢者陽性率為0 (0/20)。PNSNS疾病組中中樞神經脫髓鞘病與格林巴利綜合征疾病的陽性率和健康對照組相比，差異無統計學意義(P>0.05)，但PNSNS疾病組抗神經元抗體的陽性率有高于健康對照組的趨勢。結論血清中神經元特異性抗體譜的測定有助于神經系統副腫瘤性綜合征中的一些疾病的診斷。

神經系統副腫瘤綜合征；抗神經元抗體譜；中樞神經系統脫髓鞘病

神經系統副腫瘤性綜合征(paraneoplastic syndrome of nervous system，PNSNS)是在某些惡性腫瘤患者體內，腫瘤未發生轉移的情況下引起的神經系統功能異常改變，發病機制主要是由于機體對腫瘤表達的神經元抗原發生免疫作用產生抗體，這些抗體對正常的組織也會發生交叉反應，破壞正常神經及相關組織[1]。PNSNS可影響神經系統的任何一個部位，大腦皮質、小腦、脊髓、周圍神經、神經肌肉接頭及肌肉均可受累，可導致臨床常見疾病的發生，如腦干、小腦以及大腦邊緣系統腦炎、眼肌陣攣性運動失調、肌無力綜合征[2-4]。近年來，相繼報道[5-8]在 PNSNS 患者的血清 、腦脊液及尿液中均發現特異性抗神經元抗體，

其中以抗-Hu抗體 、抗-Yo抗體 、抗-Ri 抗體最為多見。本研究對48例PNSNS血清及20例健康體檢者進行了神經元特異性抗體譜的檢測，旨在探討抗神經元抗體在不同PNSNS中出現的頻率以及與臨床癥狀的相關性，從而期望抗神經元抗體成為鑒別各種PNSNS的血清學指標。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集首都醫科大學附屬北京天壇醫院2013年3月至2015年4月門診及住院患者的血清48例，所有患者診斷均符合副腫瘤綜合征的診斷標準。

1.2標本準備及分組

所有PNSNS患者及健康對照均清晨空腹采靜脈血，抽取3～5 mL于EDTA-K2抗凝血管，靜置30 min后，以3 500 r/min 離心10 min，吸取血清于EP管中，-80 ℃保存。實驗共分為4組，其中A組中樞神經脫髓鞘病(n=17)、B組運動神經元病(n=11)、C組格林巴利綜合征(n=20)、D組健康體檢者(n=20)。

1.3實驗試劑

神經元抗原譜抗體IgG試劑盒由歐蒙醫學實驗診斷股份公司提供，采用免疫印跡方法進行檢測。

1.4實驗方法

實驗前將-80 ℃保存的血清提前12 h置于4 ℃冰箱復融，隨后進行抗神經元抗體IgG抗體譜的檢測。具體步驟如下：(1)加樣溫育：將檢測膜條放入溫育槽中，在每個槽中加入1.5 mL已稀釋通用緩沖液，按加樣方案向相應槽中加入30 μL樣本，搖擺床上室溫反應60 min；(2)清洗：吸去槽內液體，用1.5 mL已稀釋通用緩沖液清洗3次，每次5 min；(3)酶結合物溫育：吸去槽內液體，在每個槽中加入1.5 mL已稀釋的酶結合物；(4)再清洗：吸去槽內液體，用1.5 mL已稀釋通用緩沖液清洗3次，每次5 min；(5)底物溫育 吸去槽內液體，在每個槽中加入1.5 mL底物液，搖擺床上室溫反應10 min；(6)終止反應：吸去槽內液體，用1.5 mL蒸餾水清洗3次，每次1 min，將已溫育的濕的檢測膜條置于綠色紙上結果判定模板中的黏膜上，待膜條干透后，判讀結果；(7)結果判讀：用Euroimmun AG掃描儀掃描膜條，用EUROLineScan軟件進行結果判讀(表1)。

1.5 統計學方法

統計數據采用SPSS17.0 統計軟件完成，健康對照組和PNSNS兩組抗Hu抗體、抗Yo抗體、抗Ri抗體、抗Ma2/Ta抗體、抗Amphiphysin抗體水平顯著性檢驗用χ2檢驗， 以P<0.05為差異有統計學意義。同時采用診斷試驗的評價指標，計算敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值。

表1　EUROLineScan結果判讀

Weakly positive，positive and heavy positive equal to positive.

2　結果

48例PNSNS中檢測到抗神經元抗體陽性樣本6例，總陽性率12.5%，其中4例是中樞脫髓鞘疾病，陽性率為23.5%，2例是格林巴利綜合征，陽性率為10.0%；4例中樞脫髓鞘疾病存在的神經元特異性抗體分別是抗Hu、抗Yo、抗Ri、抗Ma2/Ta、抗CV2、抗Amphiphysin；格林巴利組檢測出抗Ma2/Ta、抗Amphiphysin各一例，健康對照組和運動神經元病組沒有檢測到抗神經元抗體(表2)。PNSNS疾病組與健康對照組相比，抗體陽性率差異無統計學意義(P=0.169)，詳見表3。此方法敏感度為100%，特異度為32.3%，陽性預測值為12.5%，陰性預測值為100%。

表2　PNSNS組和健康對照組抗體陽性比較

PNSNS: paraneoplastic syndrome of nervous system.

3　討論

PNSNS發病機制現在普遍認同的觀點是腫瘤細胞與人體神經元存在共同表位，腫瘤細胞作為始動抗原誘發機體產生特異性抗體，該抗體抑制腫瘤生長的同時也會導致神經系統損傷[9]。PNSNS的發生率約為1%[10]，但臨床上應引起高度重視，因為PNSNS的臨床表現非常多，神經系統癥狀在數周至數月內迅速發展，產生嚴重后果甚至死亡，且約60%患者出現PNSNS癥狀時，原發癌尚處于可根治階段，及時認識PNSNS不但有助于惡性腫瘤的早期診斷和治療，更重要的是使神經系統損害得到改善，甚至挽救患者生命。有研究[11]表明抗神經元抗體的種類與PNS所屬疾病種類相關。抗Hu抗體最常見于小細胞肺癌患者，抗Yo抗體多見于女性伴婦科腫瘤或乳腺癌的患者，抗Ri抗體與眼肌陣攣性運動失調癥高度相關，抗Amphiphysin抗體與肌無力綜合征感覺性運動神經元病高度相關[12]。當然，缺乏腫瘤神經抗體也可發生PNS，沒有神經綜合征也可存在抗體[13]。楊愛景[14]的研究顯示686例疑似PNSNS患者采用免疫印跡技術檢測神經元抗體中，抗Hu抗體陽性81例，抗Yo抗體陽性3例，抗Ri抗體陽性4例，總陽性率12.8%，其中Hu、Yo、Ri陽性抗體分別占11.8%、0.4%、0.6%。崔桂云等[15]對31例PNSNS患者血清中抗神經元抗體進行檢測，有25例存在特異性抗體，神經元抗體的陽性率達80.6%。本研究結果與崔桂云等[15]的研究結果相差過大，筆者認為這可能與標本選取以及標本量有關，需要選取同類型疾病增加標本量繼續深入研究。

表3　PNSNS患者及健康對照血清神經元抗體檢測陽性率

本實驗中，在48例PNSNS中檢測到抗神經元抗體陽性6例，總陽性率12.5%，其中4例是中樞脫髓鞘疾病，陽性率為23.5%，2例是格林巴利綜合征，陽性率為10.0%；4例中樞脫髓鞘疾病存在的神經元特異性抗體分別是抗Hu、抗Yo、抗Ri、抗Ma2/Ta、抗CV2、抗Amphiphysin，值得指出的是1例同時存在抗Hu、抗CV2、抗Amphiphysin 3種抗體；格林巴利組檢測出抗Ma2/Ta、抗Amphiphysin各1例，健康對照組和運動神經元病組沒有檢測到抗神經元抗體。雖然PNSNS疾病組與健康對照組相比，抗體陽性率差異無統計學意義(P=0.169)，但是PNSNS疾病組抗神經元抗體的陽性率有高于健康對照組的趨勢，與之前的報道不符的原因可能是由于樣本量不足，而且檢測方法為定性檢測，方法學還有待探討。本試驗方法檢測敏感度和陰性預測值都達到了100%，對臨床排除診斷提供了一定的參考價值。本實驗的創新之處是將PNSNS細分為中樞脫髓鞘、運動神經元以及格林巴利3組，進行對神經元特異性抗體的檢測以及比對。

總之，本課題組將在本實驗的基礎繼續上擴大樣本量探討抗神經元抗體與各種PNSNS的關系，期望抗神經元抗體能夠成為鑒別各種PNSNS的血清學指標。另外，可以摸索一種定性檢測神經元特異性抗體的方法，從而研究神經元特異性抗體效價的變化對PNSNS診斷、治療檢測。

[1]Zuliani L， Graus F， Giometto B, et al. Central nervous system neuronal surface antibody associated syndromes： review and guidelines for recognition[J].Neurol Neurosurg Psychiatry， 2012，83(6)：638-645.

[2]Yu Z，Kryzer T J， Griesmann G E， et al.CRMP-5 Neuronal autoantibody： marker of lung cancer and thymoma-related autoimmunity[J]. Ann Neurol，2001，49(2)：146-154.

[3]Bataller L，Graus F，Saiz A， et al. Clinical outcome in adult onset idiopathic or paraneoplastic opsoclonus-myoclonus[J].Brain，2001，124(Pt2)：437-443.

[4]Tojo K， Nitta K， Ishii W，et al. A young man with anti-NMDAR encephalitis following guillain-Barré syndrome[J]. Case Rep Neurol，2011，3(1)：7-13.

[5] Furneaux H M，Rosenblum M K， Dalmau J，et al. Selective expression of Purkinje-cell antigens in tumor tissue from patients with paraneoplastic cerebellar degeneration[J].N Engl J Med，1990，322(26)：1844-1851.

[6] Lucchinetti C F，Kimmel D W， Lennon V A. Paraneoplastic and oncologic profiles of patients seropositive for type 1 antineuronal nuclear autoantibodies[J]. Neurology，1998，50(3)：652-657.

[7] 陳齊鳴，宋文英，溫偉，等.特異性神經元抗核抗體-Hu抗體的研究[J].中華神經科雜志，1996，29(3)：156-159.

[8] 陳齊鳴，溫偉.不同類型副腫瘤性小腦變性的免疫學研究[J].臨床神經病雜志，1996，9(6)：342-344.

[9] Martin-Moutot N，de Haro L，Seagar M.Dosage and specificity of anti-calcium channel antibodies in Lambert-Eaton myasthenic syndrome[J]. Rev Neurol： Paris， 2004，160(5 Pt2)：S28-S34.

[10]Lancaster E， Dalmau J. Neuronal autoantigens—pathogenesis， associated disorders and antibody testing[J].Nat Rev Neurol,2012， 8(7)： 380-390.

[11]宗廣鑫.小細胞肺癌副腫瘤綜合征16例臨床報道[D]. 濟南：山東大學，2012.

[12]Bataller L，Dalmau J.Neuro-ophthalmology and paraneoplastic syndromes[J].Curr Opin Neurol，2004，17(1)：3-8.

[13]李陳渝. 副腫瘤神經綜合征[J].重慶醫學，2007，36(13)：1273-1274.

[14]楊愛景.神經系統副腫瘤性綜合征患者體內特異性神經元抗體的研究[J].實用預防醫學，2005，12(5)：1062-1064.

[15]崔桂云，安曉雷，趙輝，等.抗神經元抗體對神經系統副腫瘤綜合征早期診斷的意義[J].徐州醫學院學報，2006，26(5)：430-432.

[16]趙雁,劉麗霞,張雪艷,等. 抗神經元自身抗體在神經系統疾病診斷中的作用[J]. 解放軍醫藥雜志， 2013，25(6):97-99.

編輯慕萌

Significance of the detection of anti-neuronal antibodies in the diagnosis of paraneoplastic syndrome of nervous system

Lyu Hong1，2， Wu Yuan3， Wang Lijuan1,2， Zhang Guojun1，2*

(1.DepartmentofCentralLaboratory，BeijingTiantanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100050，China； 2.EngineeringResearchCenterofImmunologicalReagentsClinicalResearch，Beijing100050，China； 3.DepartmentofLaboratory，BeijingShunyiHospital，Beijing101300，China)

ObjectiveTo evaluate the significance of the detection of anti-neuronal antibodies in the early diagnosis of paraneoplastic syndrome (PNS) of nervous system (PNSNS). MethodsWe detected anti-Hu, anti-Yo, anti-Ri, anti-Ma2/ta, anti-CV2, anti-Amphiphysin antibodies of 68 sera by neuronal antigen spectrum of IgG antibody kit (amount medical laboratory diagnostics ag); ResultsOf the 48 PNS samples, 6 (6/48,12.5%) were positive for anti-neuronal autoantibodies, among which, 4(23.5%)positive samples were from Group A (demyelinating diseases), 2 (10.0%) positive samples were from Group C (Guillain-Barre syndrome); samples from Group B (motor neuron diseasse) and D (Healthy control) were all negative. There was a trend of higher ratio of anti-neuronal antibodies positive rate in PNSNS group than healthy control group, although the data failed to reach a statistical significance. ConclusionThe detection of anti-neuronal antibodies might be a credible method in the early diagnosis of PNSNS.

paraneoplastic syndrome of nervous system (PNSNS)；anti-neuronal antibodies; demyelinating disease

北京市衛生系統高層次衛生技術人才培養項目(2013-3-052)。This study was supported by High Level Technical Talent Development of Beijing Health System(2013-3-052).

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.015]

R 446.1

2016-04-30)

*Corresponding author， E-mail：tiantanzgj@163.com

網絡出版時間：2016-07-2021∶12網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2112.012.html