抱莖獐牙菜體外抗氧化作用研究

馬占花

自由基是指可以單獨存在的一個或幾個不配對電子的分子和原子。自由基對生物膜和其他組織都有損傷作用，也會引起一系列的病理過程?，F代醫學研究證明，衰老、癌癥、炎癥等疾病與體內脂質過氧化反應和自由基有著直接關系?？寡趸瘎┠芤种聘鞣N物質的氧化性變質，能降低自由基連鎖反應的效率，降低活潑自由基的濃度，如何通過抗氧化劑減少自由基的產生已成為研究熱點。有報道表明，某些天然植物具有明顯的抗氧化活性，因此，尋找天然抗氧化劑變成了研究重點。

抱莖獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）系龍膽科（Gentianaceae）獐牙菜屬（Swertia.L）植物，主要分布于青藏高原和云貴高原，是一種一年生草本植物，為常用藏藥，藏名“蒂達”，俗稱“藏茵陳”，全草入藥，具有清熱解毒，舒肝利膽之功效，主治各種肝膽疾病[3]。獐牙菜屬的植物主要含有環烯醚萜類、三萜類、黃酮類等成分，而黃酮類化合物具有消炎，改善微循環、抑菌、抗肝炎病毒、抗腫瘤等生理功能，該物質具有一定的開發利用價值。本文通過測定抱莖獐牙菜的總黃酮含量，測定其體外對DPPH自由基清除作用，為進一步開發利用抱莖獐牙菜提供一定的理論依據。

材料

原料。抱莖獐牙菜，采于西寧市西山。

儀器。分光光度計（UV-9100）：北京瑞利分析儀器公司；電子天平：上海方瑞儀器有限公司；恒溫水浴鍋：北京醫療設備總廠。

試劑。①蘆丁標準液。用電子天平精確稱取蘆丁標準品5mg置于10ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容，搖勻，得到0.5mg/ml的標準溶液。②DPPH母液。準確稱取50mgDPPH，用無水乙醇溶解并定容于250ml容量瓶中，DPPH濃度為0.5mmol/l，避光保存。0.2mmol/lDPPH溶液：取0.5mmol/lDPPH母液40ml，用無水乙醇定容至100ml容量瓶。③其它試劑。70%的乙醇，5%亞硝酸鈉溶液，10%硝酸鋁溶液，5%氫氧化鈉溶液，雙蒸水，無水乙醇（天津市富宇精細化工有限公司，分析純）。

方法

蘆丁標準曲線的制作。精確吸取蘆丁標準溶液0.00ml，0.40ml，0.80ml，1.20ml，1.60ml，2.00ml分別置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亞硝酸鈉溶液0.4ml，搖勻，放置6分鐘；加入10%硝酸鋁溶液0.4ml搖勻，放置6分鐘；加入5%氫氧化鈉溶液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度，得到橫坐標濃度Y與縱坐標吸光度X的標準曲線。線性回歸方程：Y=0.8277X-0.0242（相關系數r=0.9921）

提取物的制備。①醇提物的制備。將干燥的樣品在研缽中研碎，精確稱取樣品5.0g，置于100ml容量瓶中，加入70%乙醇30ml，浸泡24h，封口水浴加熱30分鐘，用紗布過濾，在70℃下將其濃縮至10ml，濃度為500mg/ml。將濃度為500mg/ml的黃酮提取液稀釋10倍，待用。②水提物的制備。稱取粉碎后的樣品5g加入50ml蒸餾水，沸水浴煎煮1h，用紗布過濾，傾出濾液后重復提取一次，合并2次煎煮的過濾清液，將其濃縮至10ml，得到黃酮提取液濃度為500mg/ml。將濃度為500mg/ml的黃酮提取液稀釋10倍，待用。

總黃酮含量的測定。吸取稀釋后的黃酮提取液5份各1.00ml置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亞硝酸鈉溶液0.4ml，搖勻，放置6分鐘；加入10%硝酸鋁溶液0.4ml搖勻，放置6分鐘；加入5%氫氧化鈉溶液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘。測吸光度值，用回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

對DPPH自由基清除率的測定。取植物提取液1ml，0.5mmol/l的DPPH溶液0.25ml先后加入同一具塞試管中，搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測定其吸光度Ai。取0.25ml0.5mmol/l的DPPH溶液與1ml甲醇混合搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測定其吸光度Ao。取植物提取液1ml與0.25ml甲醇混合，搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測定其吸光度Aj。根據下列公式計算出提取液對DPPH的抑制率，即DPPH自由基清除率：K%=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%。

數據處理。所得數據用Excel進行數據處理。

結果

總黃酮含量的測定。抱莖獐牙菜不同提取物總黃酮含量測定結果見表1

由表1結果可知，抱莖獐牙菜水提和醇提取物中均有大量黃酮類化合物的存在，而水提取物總黃酮含量顯著高于與醇提取物。

對DPPH清除率的測定結果。抱莖獐牙菜不同提取物對DPPH清除率測定結果見表1

由表2可知，抱莖獐牙菜不同提取物對DPPH自由基有明顯的清除作用，而水提物比醇提物抗氧化作用好，和表1說明，抱莖獐牙菜中黃酮類化合物含量越高，抗氧化作用越明顯。

結論

通過測定抱莖獐牙菜中總黃酮的含量，水提的和醇提的總黃酮含量具有明顯的差異。而且水提和醇提的總黃酮的抗氧化活性也有明顯的差異。抱莖獐牙菜的藥理作用很多，總黃酮含量也較高，其抗氧化作用較好，這種抗氧化作用可以阻止細胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發生。黃酮類化合物具有消炎，改善微循環、抑菌、抗肝炎病毒、抗腫瘤等生理功能，還可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進傷口愈合和止痛，該物質具有一定的開發利用價值，從這些可知，對抱莖獐牙菜的抗氧化作用的研究具有廣闊的開發前景。

（作者單位：青海省食品檢驗檢測院）