尿通卡克乃其片大鼠長期毒性實驗的血液指標變化

熱比姑麗·伊斯拉木，阿布都吉力力·阿布都艾尼，冷英莉，王　靜

(1. 新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所，烏魯木齊，新疆　830049；2. 新疆銀朵蘭維藥股份有限公司，烏魯木齊，新疆　830013)

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尿通卡克乃其片大鼠長期毒性實驗的血液指標變化

熱比姑麗·伊斯拉木1，阿布都吉力力·阿布都艾尼1，冷英莉2，王靜2

(1. 新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所，烏魯木齊，新疆830049；2. 新疆銀朵蘭維藥股份有限公司，烏魯木齊，新疆830013)

目的探討尿通卡克乃其片大鼠長期毒性試驗血液學指標變化。方法SD大鼠120只，雌雄各半，隨機分為對照組，尿通卡克乃其片低、中、高劑量組。對照組為灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉混懸液，低、中、高劑量組分別灌胃給予尿通卡克乃其片0.32g、1.6g、3.2g(生藥)/kg·d，每周6 d，連續180 d，分別觀察大鼠在給藥90 d、180 d及停藥后30 d一般狀況、血液細胞變化、血生化變化，電解質及血凝指標變化。結果在實驗期間大鼠未見死亡或無明顯毒性反應。與對照組比較，在實驗期間大鼠紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(HGB)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(PLT)、白細胞計數(WBC)、淋巴細胞百分含量(LYMP%)；丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(Crea)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)；鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)、氯離子濃度(Cl-)、凝血酶原時間(PT)，具有統計學差異(P<0.05～P<0.01)，但未見時間、劑量規律性，無病理意義。結論0.32 g、1.6 g、3.2 g(生藥)/kg·d 劑量下灌胃尿通卡克乃其片原料粉180 d對大鼠血液指標無明顯異常，該藥在臨床劑量下長期使用是安全的。

尿通卡克乃其片；大鼠；長期毒性；血液指標

尿通卡克乃其片是在古代維醫秘方的基礎上采用現代科學技術研制而成的片劑，由酸漿、黃瓜子、血竭、西黃耆膠、阿拉伯膠、巴旦仁等10味維吾爾藥材組成，具有鎮痛、利尿的功效。臨床上用于治療尿痛、尿不盡、尿血、尿道流膿等[1]。本文初步探討尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)的大鼠灌胃長期毒性試驗血液學指標變化，對其臨床應用安全性進行再評價。

1　材料和方法

1.1實驗動物及實驗環境

SD大鼠140只，SPF級，雌雄各半，體重60～90 g，由新疆醫科大學醫學實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK (新) 2003-0001。實驗動物使用許可證號：SYXK(新)2003-0002。動物實驗經新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所藥物安全性評價中心(GLP)審核，符合動物倫理委員會的管理準則。實驗開始前檢疫，經一般行為觀察，選用符合要求的120只大鼠(♀、♂各半)進行長期毒性試驗。

1.2儀器與試劑

PM4000/3全自動生化分析儀，意大利·羅馬；BC300全血細胞分析儀，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；HK2003電解質分析儀，鄭州市匯科電子有限公司；SZZ血凝分析儀，深圳市鵬瑞佳電子有限公司；高速冷凍離心機，TGL-16G，金壇市華峰儀器有限公司。

尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)由新疆華康藥業有限責任公司(現新疆銀朵蘭維藥股份有限公司)提供，批號：080601。紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞容積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(PLT)、白細胞計數(WBC)、淋巴細胞百分含量(LYM%)、中間細胞百分含量(MID%)、粒細胞百分含量(GRA%)、網織紅細胞數(Ret)；丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(Crea)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)；鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)、氯離子濃度(Cl-)、凝血酶原時間(PT)，上述試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3動物實驗[2-4]

1.3.1動物分組及給藥方法:取120只大鼠，雌雄分別按體質量隨機分為4組，分別為對照組、尿通卡克乃其片(原藥粉)低、中、高3個劑量組。每組30只，雌雄各半。對照組0.5% CMC-Na混懸液；尿通卡克乃其片低劑量組為0.32 g(生藥)/kg，中劑量組為1.6 g(生藥)/kg，高劑量組為3.2 g(生藥)/kg(即分別相當于臨床成人每日每公斤用的5、25、50倍)。本實驗采用與臨床一致的給藥途徑，灌胃給藥(1 mL/100 g·bw)。每天給藥1次，每周給藥6 d，連續給藥180 d。分別在給藥90 d結束時、給藥180d結束時和停藥30 d結束時，每組各處死10只(雌雄各半)。

1.3.2觀察指標:

1.3.2.1一般狀況觀察:每日觀察大鼠一般形態外觀、行為活動、飲食情況、分泌物、排泄物等，同時觀察動物中毒反應的癥狀，起始時間，嚴重程度，持續時間，是否可逆，填寫籠旁觀察記錄表肉眼觀察動物。

1.3.2.2血細胞指標檢測:分別在給藥90 d結束時(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結束時(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結束時(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠血細胞指標(RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、WBC、LYM%、MID%、GRA%、Ret)1次，總共3次。

1.3.2.3血生化指標檢測:分別在給藥90 d結束時(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結束時(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結束時(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠血生化指標(ALT、AST、ALP、GLU、BUN、TP、ALB、TBIL、Crea、TCHO、TG、CK)1次，總共3次。

1.3.2.4電解質及血凝檢測:分別在給藥90 d結束時(處死40只，雌雄各半)、給藥180 d結束時(處死40只，雌雄各半)和停藥30 d結束時(處死40只，雌雄各半)，檢查各組大鼠電解質指標(K+、Na+、Cl-)及血凝指標(PT)1次，總共3次。

2　結果

2.1一般觀察

與對照組比較，尿通卡克乃其片組(低、中、高劑量)分別在給藥90 d結束時、給藥180 d結束時和停藥30 d結束時，大鼠未見動物死亡或無明顯毒性反應。

2.2血細胞指標檢測

與對照組比較，給藥180 d RBC(♀：M)、HGB(♀：M、H)降低(P<0.05)，分別在給藥90 d和停藥后30 d均差異無統計學意義(P>0.05)；給藥90 d MCH(♂：L、H)升高(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥后30 d均差異無統計學意義(P>0.05)；MCHC在給藥90 d(♂♀：L、M、H)，給藥180 d(♂：L、M，♀：H)，停藥30 d(♀：L、M)差異有統計學意義(P<0.05)；給藥90 d WBC(♀：M、H)、LYMP%(♀：L)、PLT(♂：M)升高(P<0.05)，給藥180 d均差異無統計學(P>0.05)，但停藥30 d PLT(♂：M)升高(P<0.05)。結果見表1。

2.3血生化指標檢測

與對照組比較，AST(♂)在給藥90 d(L)、給藥180 d(H)、停藥30 d(H)降低(P<0.05)；給藥180 d ALT(♂：M、H)降低、BUN(♀：H)升高(P<0.01)，停藥30 d ALT(♂：M)、BUN(♂：M)均升高(P<0.05)；分別在給藥180 d和停藥30 d ALP(♂，H)降低，GLU(♀，H)升高(P<0.05～P<0.01)；給藥90 d CK(♂：L)、ALB(♀：H)、TCHO(♀：L)降低(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥30 d除TCHO，♂M外均差異無統計學意義(P>0.05)；停藥30 d TBIL(♂：H)降低(P<0.01)，分別在給藥90 d、180 d均差異無統計學意義(P>0.05)；給藥180 d Crea(♂：M)、TG(♂：L，M，H)降低，分別在給藥90 d、停藥30 d均差異無統計學意義(P>0.05)。結果見表2。

2.4電解質及血凝檢查

與對照組比較，給藥90 d，K+(♂♀：L、M、H)、Na+(♂：L，♀：L、M、H)差異有統計學意義(P<0.05～P<0.01),分別在給藥180 d、停藥30 d差異沒有統計學意義(P>0.05)。給藥90 d Cl-(♂：L，♀：L、M、H)，停藥30 d(♂：L，H)差異有統計學意義(P<0.05～P<0.01)。給藥180 d PT(♂：L)升高，給藥90 d、停藥30 d差異沒有統計學意義(P>0.05)。結果見表3。

3　討論

尿通卡克乃其片是維吾爾醫經典方劑。藥性干寒，具有生干生寒，清熱消炎，除腐排膿，利尿通阻等功效[5]。同時可作為異常粘液質清除劑，具有清除異常黏液質，恢復黏液質的正常狀態，平衡體液，調整氣質，用于治療疾病[6-8]。本文初步探討尿通卡克乃其片(100%處方原藥粉)的大鼠灌胃長期毒性試驗血液學指標變化，對其臨床應用安全性進行再評價。

血細胞結果表明，給藥180 d RBC(♀：M)、HGB(♀：M、H)降低(P<0.05)，分別在給藥90 d和停藥后30 d均差異無統計學意義(P>0.05)；說明RBC、HGB變動在正常范圍內(一般雌性大鼠正常范圍比雄性低)。給藥90 d MCH(♂：L、H)升高(P<0.05)，分別在給藥180 d和停藥后30 d均差異無統計學意義(P>0.05)；說明MCH變化無時間和劑量規律性。MCHC在給藥90 d(♂♀：L、M、H)，給藥180 d(♂：L、M，♀：H)，停藥30d(♀：L、M)差異有統計學意義(P<0.05)；此變化無規律性。給藥90 d WBC(♀：M、H)、LYMP%(♀：L)、PLT(♂：M)升高(P<0.05)，給藥180 d均差異無統計學意義(P>0.05)，但停藥30 d PLT(♂：M)升高(P<0.05)；說明此變化無時間、劑量規律性，且變動量在正常范圍內。

血生化結果表明，AST(♂)在給藥90 d(L)、給藥180 d(H)、停藥30 d(H)降低(P<0.05)；給藥90 d CK(♂：L)、TCHO(♀：L)降低；給藥180 d Crea(♂：M)、TG(♂：L，M，H)降低；停藥30 d TBIL(♂：H)降低(P<0.01)；給藥180 d和停藥30 d ALP(♂：H)降低；均無病理意義。給藥180 d ALT(♂：M、H)降低，BUN(♀：H)、GLU(♀：H)升高(P<0.05～P<0.01)；停藥30 d ALT(♂：M)、BUN(♂：M)、GLU(♀，H)均升高(P<0.05～P<0.01)；說明升高作用無明顯劑量規律性，且變動量在正常范圍內。給藥90 d ALB(♀：H)降低(P<0.05)，給藥180 d和停藥30 d均差異無統計學意義(P>0.05)，說明降低作用無時間規律性，且變動在正常范圍內。

電解質與血凝結果表明，給藥90 d，K+(♂♀：L、M、H)、Na+(♂：L，♀：L、M、H)，給藥90 d Cl-(♂：L，♀：L、M、H)、停藥30 d Cl-(♂：L，H)，給藥180 d PT(♂：L)均有差異統計學意義(P<0.05～P<0.01)，說明變動在正常范圍之內，無病理意義。

總而言之，0.32 g、1.6 g、3.2 g(生藥)/kg·d(相當于擬推薦成人臨床劑量的5、25、50倍) 劑量下的尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠180 d，雖大鼠個別劑量組、血液個別指標差異有統計學意義(P<0.05～P<0.01)，但無劑量、時間規律性，均無病理意義。因此，尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠180 d對大鼠血液指標無明顯異常，在臨床用劑量下長期使用是安全的。

[1]中華人民共和國衛生部藥品標準—維吾爾藥分冊(維文)[M]. 烏魯木齊：新疆科技衛生出版社, 1999: 169.

[2]袁伯俊, 廖明陽. 藥物毒理學實驗方法與技術 [M]. 北京：化學工業出版社, 2007: 141-146, 200-231.

[3]魏偉, 吳希美, 李元建.藥理實驗方法學(第4版)[M]. 北京: 人民衛生出版社，2010: 393-406.

[4]熱比姑麗·伊斯拉木, 尤力都孜·買買提，阿布都吉力力·阿布都艾尼, 等.疆曼陀羅子及其代表制劑鎮痛艾比西帕丸的大鼠長期毒性試驗 [J]. 中國藥理學通報,2011, 27(10): 1479-1480.

[5]艾力阿吉·庫爾班尼亞孜艾米琪。維吾爾醫成藥寶庫(維文)[M]. 烏魯木齊：新疆人民衛生出版社. 2007: 169-170.

[6]熱比姑麗·伊斯拉木, 阿娜古麗·買合木提, 冷英莉,等. 異常黏液質清除劑尿通卡克乃其片的藥效學實驗研究 [J]. 中國醫藥導報, 2010, 7(15): 52-54.

[7]阿不都熱依木·卡德爾·阿塔哥. 中國新疆維吾爾醫藥學 [M]. 烏魯木齊：新疆人民衛生出版社. 2013: 100-104.

[8]哈木拉提·吾甫爾, 阿不都熱依木·玉素甫. 維吾爾醫氣質、體液論及其現代研究 [M]. 烏魯木齊：新疆科學技術出版社, 2003: 46-49.

A long-term study of the toxicity of an Uyghur medicine,Kursi Kaknaq, on hematological parameters in rats

Rabigul·Islam1, Abdujilil·abdugheny1, LENG Ying-li2, WANG Jing2

(1. Institute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine, Urumqi 830049, China;2. Xinjiang Yinduolan Uyghur Medicine Co. Ltd., Urumqi 830013)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the long-term toxicity of an Uyhgur medicine, Kursi Kaknaq, on hematological parameters in the rats. Methods A total of 120 healthy Sprague-Dawley rats were randomly divided into the control, low dose (0.32 g/kg·d ), moderate dose (1.6 g/kg·d) and high dose (3.2g/kg·d) Kursi Kaknaq groups.The drug was given orally, 6 days per week for 180 days. The control group was given 0.5% sodium carboxymethyl cellulose suspension. ResultsNo death was recorded in the rats and no obvious toxic events were observed during the experiment. Hematological parameters including RBC,HGB, MCH, MCHC, LYMP%, WBC, and PLT; biochemical parameters including ALT,AST, ALP, GLU, BUN, ALB ,TBIL, Crea, TCHO, TG, and CK; electrolyte time parameters such as K+, Na+, Cl- and prothrombin time(PT) showed statistically significant differences (P<0.05 andP<0.01), but did not show time and dose effect regularity, and no pathological significance. ConclusionsNo obvious toxic effects on hematological parameters are observed in the SD rats treated with Kursi Kaknaq at doses of 0.32 g, 1.6 g, or 3.2 g (crude drug)/ kg·d orally administered for 180 days, indicating that this drug is safe for long-term clinical use.

Kursi Kaknaq, Uyghur medicine; Rats; Chronic Toxicity, Blood parameters

新疆維吾爾自治區專利實施計劃項目基金(編號2009002)；新疆維吾爾自治區烏魯木齊市科學技術計劃項目基金(編號C111110002)。

熱比姑麗·伊斯拉木(1970-)，女，研究方向：維藥藥理毒理學研究。E-mail：rabiya272@126.com。

冷英莉(1976-)，女，研究方向：新藥開發。E-mail：719803232@qq.com。

研究報告

R-33

A

1671-7856(2016) 08-0059-07

10.3969.j.issn.1671-7856.2016.08.009

2016-03-30