莪術對甲氨蝶呤在正常和氣滯血瘀大鼠體內藥動學的影響

徐雨靜，趙瑞芝，胡巧紅（.廣東藥科大學藥學院，廣東廣州50006；2.廣州中醫藥大學第二臨床醫學院，廣東廣州50405；3.廣東省中醫藥科學院，廣東廣州50006）

莪術對甲氨蝶呤在正常和氣滯血瘀大鼠體內藥動學的影響

徐雨靜1，趙瑞芝2，3，胡巧紅1
（1.廣東藥科大學藥學院，廣東廣州510006；2.廣州中醫藥大學第二臨床醫學院，廣東廣州510405；3.廣東省中醫藥科學院，廣東廣州510006）

目的探討莪術對正常和氣滯血瘀大鼠體內甲氨蝶呤（MTX）藥動學的影響，為臨床合理用藥提供依據。方法采用束縛和冰水浴2周構建大鼠氣滯血瘀模型。將正常大鼠和氣滯血瘀大鼠各分成單用組（MTX 5.17 mg/kg）和聯合用藥組（MTX 5.17 mg/kg，醋莪術0.93 g/kg），灌胃給藥，于不同時間點進行眼眶靜脈叢采血500 μL/次，固相萃?。⊿PE）法處理血漿后用HPLC法進行分析，DAS2.0軟件非隔室模型估算藥動學參數。結果除Tmax外，正常組與模型組主要藥動學參數差異均無統計學意義；聯合用藥組與單用組比較，AUC0-t、AUC0-∞、Cmax均表現出增大趨勢。結論 血瘀模型對甲氨蝶呤藥動學無顯著影響；模型和正常情況下，莪術均可促進MTX吸收，兩者合用時應減少MTX劑量并關注MTX毒副反應。

甲氨蝶呤；莪術；藥動學；氣滯血瘀

甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）是一種抗葉酸類抗腫瘤藥物，可抑制滋養細胞增生，破壞絨毛，使胚胎停止發育、壞死脫落最終吸收，被認為是治療異位妊娠最常用和有效的藥物［1］。中醫理論認為妊娠屬于少腹瘀血證。莪術性溫味辛，具有破血行氣、消積止痛的功能。近幾年來，臨床有應用莪術結合MTX治療異位妊娠的報道［2］，而莪術對MTX體內過程的影響尚不清楚。研究表明，疾病狀態會改變藥物在體內吸收、分布、代謝和排泄過程，進而影響藥效和毒性［3］。本文擬考察莪術對MTX在正常和氣滯血瘀大鼠體內藥動學參數的影響，探討其藥效增強作用機制，為臨床合理用藥提供參考。

1　儀器與材料

1.1儀器

Agilent1200高效液相色譜儀，配VWB檢測器（美國安捷倫公司）；VG3渦旋震蕩儀（德國IKA公司）；G20型臺式離心機（河北省安新縣白洋離心機廠）；Milli-Q型純水機（美國Millipore公司）；LBYXC40全自動動態血沉測定儀（廣州中利醫療儀器科技有限公司）；SPE萃取柱（Waters公司Sep-Pak Vac 1cc，批號:039035127A）。

1.2試藥

醋莪術（廣西，批號:150200561，康美藥業有限公司）；MTX對照品（廣州綠百草生物科技有限公司，批號:10038-201104）；甲氨蝶呤片（上海信誼藥廠有限公司，批號:120306）；NaHCO3（國藥集團化學試劑有限公司，批號:20120327，分析純）；甲酸、甲醇均為色譜純，水為超純水。

1.3動物

健康雄性SD大鼠24只，SPF級，體質量（300± 20）g，購自南方醫科大學實驗動物中心，生產許可證號:00115397。

2　方法

2.1莪術提取液的制備

將醋莪術飲片搗碎，用水浸泡1 h后，加熱回流煎煮3次，濾過，合并濾液，將藥液濃縮后得莪術水煎液。

2.2樣品的處理

將血漿100 μL加到活化后的SPE萃取柱上，靜置吸附后，以水1.0 mL洗脫，棄去洗脫液，再以含質量分數0.2%甲酸的甲醇1.0 mL洗脫，EP管收集洗脫液。將收集的樣品置氮吹儀下吹干，用甲醇-0.1%（質量分數，下同）甲酸水 100 μL復溶，過0.22 μm濾膜后，取10 μL進樣分析。

2.3樣品中MTX的測定

參照本實驗室前期方法，應用HPLC法測定樣品中的MTX［4］，色譜條件:Diamonsil C18（2）色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，迪馬公司）；流動相為甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脫（0～8 min，10∶90；8～10 min，60∶40；10 min，100∶0）；流速為1 mL/min；檢測波長為302 nm；柱溫為27℃；進樣量為10 μL。在上述色譜條件下，血漿中內源性物質不干擾MTX的測定。MTX在0.052～5.006 mg/L線性關系良好（r= 0.999 6），檢測限為0.052 mg/L，提取回收率68%～74%，日間、日內精密度均小于5.9%，提取回收率為68%～74%。

2.4氣滯血瘀模型的建立

參照文獻［5］方法進行建模:每日冰水浴8 min，大鼠固定器束縛2 h。隨著造模時間延長，模型組出現爪尾部紫暗、大便稀、體質量減輕、被毛無光澤等癥狀。造模2周后測定血黏度，模型組血黏度顯著升高，提示模型成功。

2.5藥動學研究

將正常大鼠和模型大鼠各分為單用組和聯用組，每組6只。實驗前禁食12 h，自由飲水。單用組灌胃給予MTX（以質量分數5%的NaHCO3溶液溶解）5.17 mg/kg，聯用組灌胃MTX 5.17 mg/kg和莪術提取液0.93 g/kg，灌胃容積為10 mL/kg。灌胃后用乙醚麻醉，于給藥后0.17、0.33、0.67、1、2、4、6、8、9 h眼眶靜脈叢采血500 μL，置于抗凝管中，所得血樣靜置1 h后，3 500 r/min離心10 min，吸取上清液，按“2.2”項下方法處理血漿樣品，按“2.3”項下方法分析。

3　結果

各組MTX的平均血藥質量濃度-時間曲線見圖1。用DAS2.1.1藥動學軟件，非隔室模型估算藥動學參數，見表 1。組間比較用獨立樣本 t檢驗（SPSS19統計軟件）。由表1可見，MTX藥動學參數與Kuroda等［6］所描述的一致，表現為吸收迅速，并迅速分布、消除。正常組中，與單用組相比，聯用組血漿 MTX的 AUC0-t、Cmax顯著升高（P＜0.05），Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分別增加 64.8%、28.1%、30.4%，CL降低16.4%。模型組中，聯合用藥組顯示與正常組相同的趨勢，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分別比單用組增加21.3%、22.0%、33.2%，CL則降低34.7%，Tmax提前79.9%。模型組與正常組比較，達峰時間明顯提前，其他藥動學參數與正常組差異無統計學意義。無論是正常組還是模型組，聯合用藥組均表現出AUC0-t、AUC0-∞、Cmax增加，Tmax推遲的趨勢，提示莪術可提高甲氨蝶呤的生物利用度。

圖1　大鼠體內MTX的平均血藥質量濃度-時間曲線Figure 1 Drug concentration-time profiles of methotrexate after oral administration with methotrexate alone or combined with Curcumae Rhizoma（n=6）

表1　MTX的藥動學參數Table 1 Pharmacokinetic parameters of methotrexate，n=6）

表1　MTX的藥動學參數Table 1 Pharmacokinetic parameters of methotrexate，n=6）

單用組中，模型組與正常組比較:*P＜0.05；正常組中，聯用組與單用組比較:#P＜0.05。

參數　　正常-單用　　正常-聯用　　模型-單用　　模型-聯用AUC0-t/（mg·h·L-1）　0.654±0.182　0.838±0.099#　0.691±0.044　0.843±0.110 AUC0-∞/（mg·h·L-1）　1.887±0.826　2.460±1.240　2.413±1.847　3.213±1.488 MRT0-t/h　4.132±0.140　3.902±0.409　4.163±0.292　4.04±0.398 t1/2/h　14.317±12.59　13.705±7.245　15.932±13.349　16.4392±7.304 Cmax/（mg·L-1）　0.126±0.037　0.201±0.043#　0.150±0.050　0.182±0.057 CL/（L·h·kg-1）　3.104±1.025　2.500±1.051　3.001±1.462　1.958±0.986 Tmax/h　0.417±0.037　0.639±0.267　0.278±0.0857*　0.5±0.183

4　討論

臨床研究顯示，MTX聯用活血化瘀中藥治療異位妊娠的療效與MTX聯用米非司酮相當，但在包塊吸收、縮短住院時間、減小毒副反應等方面更優［7］，然而其作用機制尚不清楚。莪術為破血藥，中醫理論認為破血藥具有破積堅攻的效果，為婦科常用藥。本文考察了莪術對MTX在正常和氣滯血瘀大鼠體內藥動學參數的影響，結果顯示莪術可提高MTX的生物利用度，從而提高療效，這可能是縮短住院時間的原因。MTX毒性較大，生物利用度提高的同時有可能導致毒性增強，提示臨床活血化瘀中藥聯合應用MTX時應密切觀察其毒副反應。

據文獻［8］報道，機體微環境的改變常通過影響藥物代謝酶及轉運蛋白進而影響藥物的體內過程。本文中血瘀模型對MTX藥動學影響主要表現為Tmax提前，AUC0-t、Cmax均有升高趨勢，但無統計學意義，提示血瘀狀態對MTX藥動學影響不明顯。然而，血液中的藥動學行為是機體不同臟器總體處理結果的綜合，尚不能反映MTX在臟器分布的變化，因此血瘀模型是否影響MTX臟器分布并進而影響其藥效和毒性，還有待進一步探討。

［1］曹澤毅.中華婦產科學［M］.2版.北京:人民衛生出版社，2007:1447.

［2］王風梅，王宏霞，王桂忠.活血化瘀消癥湯結合MTX治療異位妊娠的護理與療效觀察［J］.中國醫藥指南，2012，10（23）:317-318.

［3］鞏仔鵬，陳穎，張瑞杰，等.疾病狀態下的中藥藥代動力學研究進展［J］.中國中藥雜志，2015，40（2）:169-173.

［4］李楊，趙亞，盧傳堅，等.銀屑靈2號方對甲氨蝶呤大鼠體內藥物動力學的影響［J］.中藥新藥與臨床藥理，2015，26（5）:655-657.

［5］王婷婷，賈乘，陳宇，等.大鼠氣滯血瘀證模型的建立及影響因素分析［J］.中國中藥雜志，2012，37（11）:1629-1633.

［6］KURODA T，NAMBA K，TORIMARU T，et al.Species differences in oral bioavailability of methotrexate between rats and monkeys［J］.Biol Pharm Bull，2000，23（3）:334-338.

［7］張季青，陳月玲，高麗萍，等.甲氨蝶呤聯合活血化瘀中藥治療異位妊娠40例［J］.福建中醫藥，2009，40（2）: 11-12.

［8］薛春苗，張冰，李連珍，等.虛寒狀態下藥物代謝酶CYP3A和轉運蛋白P-gp變化的體內外實驗研究［J］.北京中醫藥大學學報，2014，37（9）:602-605.

（責任編輯：陳翔）

Effect of Curcumae Rhizoma on the pharmacokinetics of methotrexate in normal and blood stasis rats.

XU Yujing1，ZHAO Ruizhi2，3，HU Qiaohong1
（1.School of Parmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2.The Second Clinical College，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China；3.GuangdongProvincial Academy of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

Objective To study the effect of Curcumae Rhizoma on the pharmacokinetics of methotrexate in normal and blood stasis rats to provide a basis for clinical rational use of drugs.Methods The method of bondage and ice water bath were applied to establish the blood stasis rat model.The normal and blood stasis rats were divided into methotrexate group（5.17 mg/kg）and combination group（methotrexate 5.17 mg/kg combined with Curcumae Rhizoma 0.93 g/kg）respectively.After intragastric administration，the blood was collected from orbit venousplexus at different interval.Serum samples were prepared by solid phase extraction（SPE）method，and the drug concentration was determined by HPLC method.The data were analyzed by pharmacokinetic software DAS（2.1）with non-compartment modal.Results Except for Tmax，other pharmacokinetic parameters of the normal groups had no statistical difference with model groups. Compared with the methotrexate groups，AUC0-t、AUC0-∞、Cmaxwas increased in combination groups. Conclusion Blood stasis model had no significant effects on the pharmacokinetics parameter of methotrexate.Curcumae Rhizoma could promote the absorption of methotrexate both in normal and model state，indicating that the dose of methotrexate should be reduced when combined with Curcumae Rhizoma. Key words:methotrexate；Curcumae Rhizoma；pharmacokinetics；blood stasis

R969.5

A

1006-8783（2016）04-0403-04

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016052401

2016-05-24

廣東省中醫院資助項目（YK2013B1N11）

徐雨靜（1992—），女，2014級碩士研究生，Email:yujing0715@126.com；通信作者:胡巧紅（1969—），女，博士，教授，從事微粒給藥系統、藥物新劑型與新技術研究，Email:hu_qiaohong@163.com

網絡出版時間:2016-07-08 9:24 網絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160708.0924.002.html