吲哚美辛口服自微乳化給藥系統的大鼠體內藥動學研究

滕希峰，李鐘，方壬德，李國全，黃詩瑩，何洋，何琳（廣東藥科大學.國家中醫藥管理局嶺南藥材生產與開發重點研究室，廣東廣州50006；.醫藥化工學院，廣東中山58458；.廣州市醫療救助服務中心，廣東廣州5060）

吲哚美辛口服自微乳化給藥系統的大鼠體內藥動學研究

滕希峰1，李鐘1，方壬德1，李國全3，黃詩瑩1，何洋2，何琳2
（廣東藥科大學1.國家中醫藥管理局嶺南藥材生產與開發重點研究室，廣東廣州510006；2.醫藥化工學院，廣東中山528458；3.廣州市醫療救助服務中心，廣東廣州510630）

目的研究吲哚美辛口服自微乳化給藥系統（IDM-SMEDDS）在大鼠體內的藥動學特征。方法大鼠灌胃給予IDM-SMEDDS（給藥劑量按IDM計為8.0 mg/kg），采用HPLC法測定IDM在大鼠血漿中的藥物濃度，以IDM原料藥制備混懸液作為參比，繪制兩者血藥濃度-時間曲線，DAS Ver2.0藥動學軟件計算藥動學參數。結果IDM-SMEDDS的藥動學過程符合二室模型，權重因子為1/C2，IDM混懸液的藥動學過程符合一室模型，權重因子為1/C2；大鼠口服IDM-SMEDDS的Cmax為42.56 μg/mL、Tmax為1 h、AUC0-48 h為814.25（μg·h）/mL，口服IDM混懸液的Cmax為9.72 μg/mL、Tmax為6 h、AUC0-48 h為134.57 （μg·h）/mL。結論自微乳化給藥系統可以提高吲哚美辛的口服生物利用度。

吲哚美辛；自微乳化給藥系統；藥動學參數

口服制劑具有給藥方便、患者依從性高的特點，是最方便的給藥方式。由高通量篩選獲得的候選藥物中，40%的化合物屬于難溶性藥物［1］。難溶性藥物在體內消化道的溶出是吸收的限速步驟，因溶解度小、吸收不好、生物利用度低，因此很難獲得較好的治療效果。研究發現，自微乳化給藥系統是一種能夠很好地改善口服藥物生物利用度的新劑型［2］。自微乳化給藥系統 （self-microemulsifying drug delivery systems，SMEDDS）是由藥物、油相、一種（或多種）乳化劑和一種（或多種）助乳化劑組成均相混合物，可以在水溶液中自發形成透明或輕微淺藍色乳光的O/W型乳滴，具有熱力學及動力學穩定性的性質，粒徑范圍為10～300 nm。只需要輕微攪拌，或經口服后在胃腸道內蠕動，即可自發形成微乳。由于形成的微乳具有大的表面積、滲透性好及避免藥物代謝酶及糖蛋白p-GP的破壞等優勢，可為提高水難溶性藥物的口服吸收提供一種新的劑型。吲哚美辛在水中溶解度為0.004 g/L［3］，pH為7.4時的油水分配系數為1.49［4］。在生物藥劑分類系統（biopharmaceutical classification system，BCS）中屬第Ⅱ類，滲透性高但溶解度低［5-6］。本課題組前期已制備了IDM-SMEDDS［7］，本文主要考察IDM-SMEDDS在大鼠體內的藥動學行為，以自制IDM混懸液為參比，為SMEDDS的體內研究提供依據。

1　儀器與材料

1.1儀器

BP211D型十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯）；JB-2型恒溫磁力攪拌器（上海智光儀器儀表有限公司）；IKI磁力攪拌器（無錫市宇壽醫療器械有限公司）；ZH-2型自動漩渦混合器（天津藥典標準儀器廠）；HH-2型數顯恒溫水浴鍋（金壇市富華儀器有限公司）；KQ-100DE型數控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；800型電動離心機（廣州富城儀器廠）；TGL-16B型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；激光粒度散射儀（英國馬爾文）；依利特230高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；UV230+紫外-可見檢測器（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2000色譜工作站（大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2試劑

吲哚美辛對照品（供含量測定用，批號:100258-200403，中國藥品生物制品檢定所）；吲哚美辛原料藥［阿拉丁試劑（上海）有限公司，質量分數＞99%，批號:060619］；自制 IDM-SMEDDS（規格:30 mg/ 0.45 g，批號:20140519）；萘普生鈉對照品（批號: 100330-200101，中國藥品生物制品檢定所）；油酸乙酯（上海飛祥化工廠）、吐溫-80（批號:10200319，上海申宇醫藥化工有限公司）、聚乙二醇400（進口分裝，批號:20090419，廣東光華化學廠有限公司）、無水乙醚（廣州化學試劑廠）、冰醋酸均為市售分析純；制劑所用水為純化水（pH=6.0）；甲醇（色譜純，天津四友精細化學品有限公司）；高效液相色譜分析所用水為雙蒸水（阻值＞16）。

1.3動物

SD大鼠12只，雌雄各半，體質量200～250 g，SPF級，購自南方醫科大學實驗動物中心，許可證號為 SCXK（粵）2011-0015。飼養條件:溫度18～29℃，日溫差≤3℃，相對濕度40%～70%。水為純化水，飼料購于南方醫科大學實驗動物中心。

2　方法與結果

2.1對照品溶液的配制

2.1.1吲哚美辛對照品溶液的配制 精密稱取吲哚美辛對照品10.08 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇適量振搖溶解并稀釋至刻度，即得質量濃度為100.8 μg/mL的吲哚美辛甲醇儲備液。另取該溶液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得質量濃度為10.08 μg/mL的吲哚美辛對照品溶液。

2.1.2內標溶液配制 精密稱取內標物萘普生鈉對照品10.50 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解，搖勻稀釋至刻度，制得質量濃度為105.0 μg/mL的萘普生鈉對照品溶液。另取該溶液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得質量濃度為10.50 μg/mL的內標溶液。

2.2血漿樣品處理

精密移取血漿150 μL于5 mL帶塞EP管中，依次加內標物萘普生鈉對照品溶液50 μL及10%乙酸溶液 100 μL，渦旋振蕩 2 min，加入無水乙醚3 mL，渦旋振蕩5 min，10 000 r/min離心10 min，吸取上層無水乙醚提取液，向管內下層液再加入無水乙醚3 mL重復萃取1次。合并2次的無水乙醚提取液，置40℃水浴蒸干，蒸干后，用無水乙醚1 mL潤洗管壁，再次蒸干，將管內殘留物用甲醇-水-冰醋酸（體積比58∶22∶0.05）150 μL溶解，10 000 r/min離心10 min，取上清液20 μL，HPLC測定。

2.3IDM-SMEDDS生物樣品分析方法的建立

2.3.1色譜條件 色譜柱為島津VP-ODS C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱溫:25℃；流動相為甲醇-水-冰醋酸（體積比 58∶22∶0.05）；流速: 1.0 mL/min；檢測波長:254 nm；進樣量:20 μL。

2.3.2專屬性試驗 分別取空白血漿、血漿+吲哚美辛對照品（質量濃度為10.08 μg/mL）+內標物（質量濃度為10.50 μg/mL）、IDM-SMEDDS給藥1 h血漿樣品，按“2.3.1”項下色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，各峰分離度符合要求，理論塔板數按吲哚美辛計算不低于5 000，吲哚美辛的保留時間在13 min左右，內標物萘普生鈉的保留時間在6 min左右，與雜質峰可實現基線分離，內源性物質對樣品測定無干擾，方法專屬性好。

圖1　大鼠血漿中IDM-SMEDDS的HPLC圖譜Figure 1 HPLC chromatograms of IDM-SMEDDS in rats plasma

2.3.3標準曲線與定量下限 精密稱取吲哚美辛對照品40.16 mg，置100 mL容量瓶中，甲醇適量振搖溶解并稀釋至刻度，即得質量濃度為 401.6 μg/mL的吲哚美辛甲醇儲備液，分別移取 0.10、0.50、1.00、1.50、6.00、8.00、10.00 mL，用甲醇分別配制成質量濃度為4.016、20.08、40.16、60.24、241.0、321.3、401.6μg/mL的系列吲哚美辛溶液。精密移取空白大鼠血漿150 μL，分別加入上述系列質量濃度的吲哚美辛溶液50 μL，再加入“2.1.2”項下內標物萘普生鈉對照品溶液 50 μL，渦旋混合2 min，得1.004、5.020、10.04、15.06、60.25、80.32、100.4 μg/mL的血漿吲哚美辛質量濃度樣品。標準曲線方程以藥物峰面積（Ai）與內標物峰面積（As）的比值（A）對質量濃度（ρ）進行線性回歸，得線性回歸方程A=0.129 ρ-0.280，r=0.999 4。結果表明血漿吲哚美辛質量濃度在1.004～100.4 μg/mL范圍內與峰面積比值線性關系良好。血漿樣品最低定量限為1.004 μg/mL。

2.3.4精密度試驗 取大鼠空白血漿150 μL，加入質量濃度分別為4.016、241.0、401.6 μg/mL的吲哚美辛溶液各50 μL，再加入內標物萘普生鈉對照品溶液50 μL，制備成低、中、高3個質量濃度的血樣各6份，按“2.2”項下操作，于同1天重復測定，記錄峰面積，根據隨行標準曲線方程計算各樣品中吲哚美辛的質量濃度，計算日內精密度，RSD結果分別為1.1%、1.8%、1.9%。同法操作，連續測定3天，計算日間精密度，RSD結果分別為3.3%、2.6%、1.3%，符合生物分析方法指導原則要求［8］。

2.3.5樣品穩定性試驗 配制低、中、高3種質量濃度（1.004、60.25、100.4 μg/mL）的吲哚美辛血漿標準溶液，每種濃度3份，經歷3次冰凍-解凍循環后，按“2.2”項下操作處理血漿樣品，考察其穩定性。結果低、中、高3個質量濃度RSD分別為3.8%、4.2%、2.9%，表明凍融條件對血漿樣品的檢測結果沒有明顯的影響。

2.3.6絕對回收率試驗 配制質量濃度分別為1.004、60.25、100.4 μg/mL的吲哚美辛溶液，直接進樣20 μL，其峰面積作為對照組的峰面積，另取大鼠空白血漿150 μL，分別加不同濃度的吲哚美辛溶液，使成質量濃度為1.004、60.25、100.4 μg/mL的樣品溶液，按“2.2”項下操作處理血漿樣品，分別記錄對照組的峰面積及樣品的峰面積，絕對回收率分別為（78.42±2.1）%、（71.41±1.6）%、（78.53±3.1）%。

2.4IDM-SMEDDS和IDM混懸液大鼠體內血藥濃度的測定

2.4.1給藥與血樣采集 取健康SD大鼠12只，體質量200～250 g，隨機分成2組，每組6只，給藥前禁食12 h，自由飲水。分別灌胃給予IDM-SMEDDS與自制IDM混懸液，給藥劑量按IDM計均為8.0 mg/kg。分別于給藥前取空白血漿，給藥后0.5、1、2、3、4、6、8、10、24、36、48 h大鼠眼眶靜脈叢取血0.5 mL，置于肝素化離心管中，3 000 r/min離心15 min，分離并吸取上層血漿（約0.2 mL），備用。

2.4.2血藥濃度的測定 將待測樣品不同時間點的峰面積與內標物峰面積的比值代入標準曲線分別計算灌胃給藥后IDM-SMEDDS與IDM混懸液在大鼠體內的血藥濃度，繪制血藥濃度-時間曲線（n= 6），結果見圖2。從圖中可見IDM-SMEDDS的血藥濃度明顯高于IDM混懸液。

圖2　血漿中IDM-SMEDDS和IDM混懸液的血藥濃度-時間曲線Figure 2 The plasma concentration-time curves of IDMSMEDDS and IDM suspension in rats after oral administration（s，n=6）

2.5藥動學參數計算

用DAS 2.0軟件處理IDM-SMEDDS和IDM混懸液的血藥濃度數據，對IDM-SMEDDS和IDM混懸液的平均血藥濃度-時間曲線分別進行房室模型擬合，根據AIC（Akaike′s information criterion）值和R2（擬合值與實測值之間的相關系數）進行綜合比較，AIC值越小，R2值越大，則擬合效果越好。根據AIC最小原則判斷IDM-SMEDDS和IDM混懸液的隔室模型，結果表明，IDM-SMEDDS的藥動學符合二室模型，IDM混懸液的藥動學符合一室模型。權重因子均為1/C2。用統計矩法估算二者的藥動學參數，并用t檢驗對藥動學參數間進行統計學分析，結果見表1。

可見，灌胃給予IDM-SMEDDS后，大鼠血漿中的Cmax為42.56 μg/mL，自制IDM混懸液的Cmax為9.72 μg/mL，前者是后者的4.38倍；灌胃給予IDMSMEDDS后，大鼠血漿中的Tmax為1 h，自制IDM混懸液的Tmax為6 h，前者比后者達峰時間減少；灌胃給予IDM-SMEDDS后，大鼠血漿中的 AUC0-48 h為814.25（μg·h）/mL，而 IDM 混懸液 AUC0-48 h為134.57（μg·h）/mL，前者是后者的6.05倍。

表1　IDM-SMEDDS和IDM混懸液的大鼠血漿中部分藥動學參數Table 1 The pharmacokinetic parameters of IDM-PMC and IDM suspension in rats plasma after oral administration，n=6）

表1　IDM-SMEDDS和IDM混懸液的大鼠血漿中部分藥動學參數Table 1 The pharmacokinetic parameters of IDM-PMC and IDM suspension in rats plasma after oral administration，n=6）

與IDM混懸液比較:*P＜0.05；**P＜0.005。

藥動學參數　IDM-SMEDDS　IDM混懸液Tmax/h　1.0　6.0 Cmax/（μg·mL-1）　42.56±2.82**　9.72±1.58 AUC0-48 h/（μg·h·mL-1）　814.25±234.69*　134.57±62.24 AUC0-∞/（μg·h·mL-1）　936.50±122.04**　135.72±62.27 AUM0-48 h/（μg·h·mL-1）　14 177.26±3 918.04*1 976.28±1 061.73 MRT0-48 h/h　17.45±0.21*　14.26±1.44

3　討論

本文采用HPLC法測定大鼠體內IDM的血藥濃度，預試驗時分別以甲醇、三氯甲烷、正己烷、無水乙醚、丙酮等為萃取試劑萃取血液中的吲哚美辛，結果顯示甲醇沉淀蛋白質的能力佳，但是甲醇揮發后有大量蛋白析出，影響血藥濃度的測定，比較上述試劑以無水乙醚萃取的效果最好，故本法選取無水乙醚為萃取溶劑。方法學考察結果顯示，內源性雜質與吲哚美辛能得到較好分離，空白血漿吲哚美辛的回收率大于70%，且結果準確、重復性良好，符合生物樣品分析的要求。

吲哚美辛在水中溶解度為0.004 g/L，幾乎不溶，制成IDM-SMEDDS后溶解度增加。因吲哚美辛為非甾體抗炎藥，市售口服片劑、膠囊規格為25 mg/片，本文未考察其最大載藥量，直接制成30 mg 的IDM-SMEDDS。從大鼠灌胃給予IDM混懸液和IDM-SMEDDS來看，IDM的Cmax為9.72 μg/mL，制成IDM-SMEDDS后Cmax為42.56 μg/mL，而且達峰時間提前，提示將難溶性藥物制成自微乳化給藥系統可以提高生物利用度及起效快。藥動學結果表明，IDM-SMEDDS符合二室模型，IDM混懸液符合一室模型，原因可能是IDM-SMEDDS吸收很快或者存在獨特的吸收機理，抑或是選擇采樣的時間點的問題，在體內的藥-時過程為二室模型，更準確深入研究需要增加吸收相的時間點。

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（責任編輯：陳翔）

Study on the pharmacokinetics of indomethacin oral self-microemulifying drug delivery system（SMEDDS）in rats

TENG Xifeng1，LI Zhong1，FANG Rende1，LI Guoquan3，HUANG Shiying1，HE Yang2，HE Lin2
（1.Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine for Production&Development of Cantonese Medicinal Materials，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2.School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangdong Pharmaceutical University，Zhongshan 528458，China；3.Guangzhou Medical Assistance Service Center，Guangzhou 510630，China）

Objective To study the pharmacokinetics of indomethacin oral self-microemulsifying drug delivery system（IDM-SMEDDS）in rats.Methods IDM-SMEDDS was given to rats by oral administration （8.0 mg/kg）.HPLC method was used to determine the plasma concentration of IDM.The plasma concentration-time profiles were obtained in contrast with indomethacin suspension.The pharmacokinetic parameters were calculated by using DAS ver2.0 as pharmacokinetic software.Results Pharmacokinetics of IDM-SMEDDS was accord with two-compartment model with the weight factor of 1/C2.IDM suspension was accord with one-compartment model with the weight factor of 1/C2.After given IDM-SMEDDS，the Cmaxwas 42.56 μg/mL，Tmaxwas 1 h，and AUC0-48 hwas 814.25（μg·h）/mL.After given self-made IDM suspension，the Cmaxwas 9.72 μg/mL，Tmaxwas 6 h，and AUC0-48 hwas 134.57（μg·h）/mL.Conclusion The self-microemulsifying drug delivery system can increase the oral bioavailability of indomethacin.

indomethacin；self-microemulsifying drug delivery system；pharmacokinetics

天然藥物化學

R965.5

A

1006-8783（2016）04-0406-04

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016062708

2016-06-27

廣東藥學院“創新強校工程”醫藥化工省級實驗教學示范中心資助項目；廣東省醫學科學技術研究基金項目（A2015345）；廣東省科技計劃項目（2016A020226018）

滕希峰（1977—），男，講師，主要從事中藥資源與新藥研發，電話:020-39352176，Email:xfteng78@163.com；通信作者:何洋，女，高級實驗師，主要從事新藥研究與開發工作，電話:0760-88207977，Email:heyang626@163.com；何琳，女，高級實驗師，主要從事藥劑新劑型與新技術，電話:0760-88207977，Email:helin721@163.com。

網絡出版時間:2016-07-011 10:09 網絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160711.1009.001.html