腎茶對急性痛風性關節炎大鼠的抗炎作用研究

陳珠　楊彩霞　倪婉曄　毛曉健　趙榮華

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腎茶對急性痛風性關節炎大鼠的抗炎作用研究

陳珠楊彩霞倪婉曄毛曉健趙榮華

目的觀察腎茶水煎劑對大鼠急性痛風性關節炎的抗炎作用。 方法采用微晶型尿酸鈉分別誘導大鼠急性踝關節腫脹和急性痛風性關節炎模型，以苯溴馬隆為陽性對照，觀察腎茶水煎劑對大鼠腫脹度的影響，并測定大鼠血清尿酸值(serum uric acid, SUA)及黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)活性，ELISA試劑盒檢測血清白細胞介素-1β(interleukin-1，IL-1β)、白細胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。 結果模型組關節腫脹度、IL-1β及IL-8水平明顯高于正常對照組(P<0.05)，腎茶水煎劑高、中、低劑量能不同程度抑制大鼠踝關節腫脹度，降低血清IL-1β、IL-8水平(P<0.05)；TNF-α水平與模型組比較無顯著性差異。同時腎茶水煎劑可顯著降低大鼠血清SUA水平及XOD活性(P<0.05或P<0.01)。 結論腎茶水煎劑對大鼠急性踝關節腫脹和急性痛風性關節炎有很好的控制作用，可能與其抑制尿酸生成、利尿以促進尿酸排泄、抑制炎癥細胞因子IL-1β、IL-8表達有關。

腎茶；急性痛風性關節炎；抗炎

腎茶為唇形科植物腎茶Clerodendranthusspicatus(thunb.) C. Y. Wu ex H. W. Li的全草，具有清熱、利尿、排石作用，主要用于急慢性腎炎、膀胱炎、尿路結石和膽結石等[1],產于廣東、海南、廣西、云南、臺灣等地。腎茶全草含黃酮類、三萜類、甾醇類、揮發油、多酚酸類及其它成分(有機酸、多糖、肌醇等)[2]；其中黃酮在抗炎、降尿酸和保護腎臟方面均起主要作用；在尿酸鈉所致炎癥模型中，有機酸起主要抗炎作用；大量研究表明[3],腎茶水提物所得的肌醇有使尿液堿化及增加尿酸排泄量而達到排石的作用；同時腎茶50%乙醇提取物也顯示出相對較高的降尿酸的效果，可能與其含有豐富的多酚有關。

痛風是一種由于嘌呤代謝紊亂產生過多尿酸或(及)尿酸排泄減少，并在體內蓄積沉淀所致的一組代謝性疾病，臨床主要表現為一系列綜合征，例如：高尿酸血癥、痛風性關節炎、痛風石、痛風腎病、尿酸性結石，均屬尿酸鹽所致的不同臨床表現。中醫將其歸屬于“痹證” “尿濁” “厲節”等范疇，多與現代人飲食無度、酗酒和高嘌呤飲食、家族遺傳史及肥胖、創傷和手術及一些藥物的誘發有關。目前現代醫學對痛風的治療，雖然能有效控制痛風性關節炎及降尿酸，但毒副作用較大，易復發。因而，尋找療效獨特、綠色安全的中藥是治療痛風的必然趨勢。本文基于對腎茶的藥效研究，按照Mc Carty DJ[4]經典造模方法采用微晶型尿酸鈉(monosodium urate,MSU)誘導大鼠痛風性關節炎模型，初步探索其對急性痛風性關節炎的藥效學作用，以期為臨床應用提供實驗依據。

1　材料和方法

1.1藥物和試劑

腎茶植株購自云南西雙版納州，經云南中醫學院中藥學院俞捷副教授鑒定為唇形科植物腎茶Clerodendranthusspicatus(thunb.) C.Y.Wu ex H.W.Li。陽性對照藥為苯溴馬隆(江蘇省昆山龍燈瑞迪制藥有限公司，生產批號：1403305，規格：50 mg/片)，實驗時取藥片研碎，用蒸餾水配成實驗所需濃度；尿酸鈉(Sigma公司，生產批號：U2875-5g)；大鼠白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)試劑盒均購自聯科生物技術有限公司，生產批號：70-E-EK301B2、70-E-EK3822；白細胞介素-8(IL-8)、黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，生產批號：H008、A002；尿酸(serum uric acid, SUA)測定試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司，生產批號：000020110。

1.2實驗動物

雄性SD大鼠60只，體質量(180±20)g，由昆明醫學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(滇)2011-0004；實驗大鼠飼料由昆明醫學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(滇)2011-0005。實驗動物購買后在實驗室條件下適應性飼養1周。

1.3腎茶水煎劑的制備

腎茶全草適量，加8倍量蒸餾水浸泡30 分鐘，然后煎煮30分鐘(以煮沸時算起)，過濾，殘渣再加水煮30分鐘左右。最后收集合并濾液，加熱蒸發濃縮至濃度為6.0 g/kg，臨用時稀釋成3.0 g/kg、1.5 g/kg，分別作為高、中、低劑量組使用濃度，放入4℃冰箱保存備用。

1.4分組與給藥

60只大鼠隨機分6組，分別為正常對照組、模型組、陽性藥組(苯溴馬隆組)、腎茶組(高、中、低劑量)，每組10只；陽性對照組給予苯溴馬隆4.2 mg/kg，腎茶組高劑量6.0 g/kg、中劑量3.0 g/kg、低劑量1.5 g/kg，正常組及模型組給予等體積蒸餾水；其中腎茶高、中、低劑量組于造模前10天開始連續灌胃給藥，灌胃體積為10 mL/kg，陽性對照組苯溴馬隆于造模前2天灌胃給藥，每天灌胃給藥1次。

表1　腎茶水煎劑對MSU致大鼠急性痛風性關節炎足踝關節周徑的影響±s, n=10)

注： 與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，cP<0.01。

1.5造模方法

造模當天，將模型組、苯溴馬隆組、腎茶高、中、低劑量組按照Mc Carty DJ[4]經典方法開始造模。以酒精局部消毒，用1 mL滅菌注射針于受試大鼠右側踝關節背側從45°方向插入脛骨肌腱內側，將0.2 mL尿酸鈉溶液注入到踝關節腔內進行造模；正常對照組給予0.2 mL無菌生理鹽水，以關節囊對側鼓起為注入標準。

1.6檢測指標

1.6.1踝關節腫脹度的測定 每組大鼠分別于造模后2、4、8、12、24、48、72小時，采用傅線法測量右側踝關節同一部位周徑，每只測3次，取平均值。

1.6.2血樣分析 于造模后72小時，大鼠眼內眥靜脈取血，4000 rpm，離心10 分鐘，分離血清，按ELISA法檢測試劑盒操作說明書，繪制標準曲線，測定血清中IL-1β、IL-8、TNF-α含量。

1.7統計學處理

2　結果

2.1腎茶水煎劑對大鼠踝關節周徑的影響

與正常對照組相比，模型組大鼠注射MSU 2小時后關節及足趾開始出現紅腫和功能障礙，發生率100%。踝關節腫脹程度在4小時表現明顯，8～12小時達高峰期，在48小時后開始逐步消退。與模型組比較，苯溴馬隆組、腎茶高、中、低劑量組在各個時間段均能不同程度降低大鼠踝關節腫脹程度，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

2.2腎茶水煎劑對大鼠血清尿酸、黃嘌呤氧化酶的影響

經尿酸鈉溶液注射后，模型組較正常對照組血尿酸濃度顯著升高(P<0.01)，提示急性痛風性關節炎造模成功。同時，模型組較正常對照組大鼠黃嘌呤氧化酶活性顯著增加(P<0.01)。與模型組比較，腎茶高、中劑量組和苯溴馬隆組均能顯著降低血尿酸水平(P<0.05或P<0.01)，腎茶高劑量和苯溴馬隆組能顯著降低黃嘌呤氧化酶活性(P<0.05)。見表2。

表2　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風性關節炎模型血尿酸、黃嘌呤氧化酶的影響±s, n=10)

注： 與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，cP<0.01。

2.3腎茶水煎劑對大鼠血清IL-1β、IL-8、TNF-α含量的影響

與正常對照組相比，模型組大鼠造模后血清中IL-1β、IL-8和TNF-α含量均有明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，腎茶高、中、低劑量組和苯溴馬隆組能不同程度地降低血清中IL-1β含量(P<0.05或P<0.01)；腎茶高劑量組能顯著降低大鼠血清中IL-8含量(P<0.05)；各給藥組大鼠血清中TNF-α的含量變化無統計學差異。見表3。

表3　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風性關節炎模型IL-1、IL-8、TNF-α含量的影響

表3　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風性關節炎模型IL-1、IL-8、TNF-α含量的影響

組別劑量(g/kg)IL-1β(pg/mL)IL-8(pg/mL)TNF-α(pg/mL)正常對照組—338.25±11.5819.46±2.89187.80±28.12模型組—387.73±6.13b27.16±0.38b363.20±66.21b苯溴馬隆0.0042346.29±11.79d17.69±3.79d258.15±58.03腎茶高劑量6.0367.15±5.97c18.30±6.80c302.12±40.47a腎茶中劑量3.0368.41±0.62c24.62±2.95380.39±74.73b腎茶低劑量1.5361.79±14.57c26.72±1.16385.10±29.39b

注： 與正常對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01。

3　討論

痛風最典型的臨床癥狀是突發性足趾關節的紅、腫、劇烈疼痛等一系列急性關節炎表現。痛風性關節炎的核心是中性粒細胞介導的炎癥，增強的中性粒細胞—內皮細胞黏連是急性痛風產生的本質，炎性細胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子(TNF-α)等在急性痛風性關節炎的免疫和病理過程中起了重要作用[5]。黃嘌呤氧化酶活性的升高有利于嘌呤類向尿酸生成轉化。金沈銳等[6]研究表明，雌雄小鼠或同性小鼠之間，血尿酸正常值差異較大，尤以雌鼠個體之間血尿酸值波動較明顯，故本實驗僅選用雄鼠，且造模所用藥物為尿酸鈉晶體，可致大量炎性細胞浸潤，以尿酸濁毒流行于脈絡為主，通過排石即可排除尿酸鹽結晶，以達到祛邪外出而正安的目的，臨床上可根據不同沉積部位、 病程， 選擇不同排石療法[7]。 現代研究證實了腎茶在抗炎、利尿、抑菌、健腎、抗高血糖、降壓、抗腫瘤、提高機體免疫力等多方面均有廣闊的發展前景。其中關于腎茶抗炎、排石利尿的報道較為集中，也是本文研究腎茶治療痛風的重要原因。

腎茶作為一種保健茶，主要以單方泡飲為主。本實驗主要探討腎茶水煎劑對大鼠急性痛風性關節炎模型的影響，因尿酸鹽晶體可直接刺激滑膜及其周圍軟骨組織中單核細胞產生IL-1β、TNF-α繼而誘導趨化因子IL-8的產生，抗TNF-α能明顯抑制內皮細胞的激活和中性粒細胞的募集，從而抑制炎癥反應，降低急性痛風性關節組織局部IL-1β和TNF-α水平，可能終止炎性細胞因子的惡性循環，是急性痛風性關節炎有效治療的作用靶點[8]。黃嘌呤氧化酶活性的降低可有效抑制嘌呤類轉化成尿酸，進而減少尿酸的生成途徑。陽性藥選用苯溴馬隆，主要通過抑制腎小管對尿酸的重吸收而增加尿酸的排泄從而發揮降尿酸的作用。在踝關節腔及足趾皮下注射尿酸鈉晶體造模后，大鼠踝關節腫脹程度明顯增加，腎茶水煎劑高、中、低劑量組能不同程度抑制急性痛風性關節炎大鼠踝關節腫脹度；腎茶高、中劑量能顯著降低急性痛風性關節炎大鼠血清尿酸值，可能與其利尿促進尿酸的排泄有關。同時，腎茶高劑量能明顯降低黃嘌呤氧化酶的含量，效果與陽性藥苯溴馬隆比較無統計學差異。本次實驗結果表明，腎茶的抗急性痛風性關節炎作用可能與其降低血清IL-1β、IL-8、TNF-α含量，抑制尿酸生成及增加尿酸排泄有關。

[1]南京中醫藥大學. 中藥大辭典[M]. 上海：上海科學技術出版社, 2006: 3081-3082.

[2]Zou J, Zhu YD, Zhao WM. Two new alkyl glycosides from Clerodendranthus spicatus[J]. J Asian Nat Prod Res, 2008, 10(7-8): 603-607.

[3]任文輝,洪儷芳.貓須草的藥理作用研究進展[J].中草藥，2013, 44(20): 2946-2950.

[4]陳奇. 中藥藥效研究思路于方法[M]. 北京：人民衛生出版社, 2005: 651-660.

[5]李迎春, 徐建華. 急性痛風性關節炎的發病機制及研究進展[J]. 安徽醫學, 2013, 34(1): 96-98.

[6]金沈銳, 鄭軍, 劉紹唐. 小鼠高尿酸癥模型初探[J]. 成都中醫藥大學學報, 1999, 22(1): 49-50.

[7]王坤. 排石療法在痛風防治中的運用初探[J]. 四川中醫, 2013, 31(4): 29-30.

[8]Chen CJ, Shi Y, Hearn A, et al. MyD88-dependent IL-1 receptor signaling is essential for goulty inflammation stimulated by monosodium urate crystals[J].J Clin Invest，2006，116(8): 2262-2271．

(本文編輯： 韓虹娟)

Anti-inflammation effect ofClerodendranthusspicatuson rats with acute gouty arthritis

CHENZhu,YANGCai-xia,NIWan-ye,etal.

YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650500，China

Correspondingauthor：MAOXiao-jian，E-mail：1224346204@qq.com

ObjectiveTo observe the anti-inflammation effect ofClerodendranthusspicatuson rats with acute gouty arthritis(AGA). MethodsExcept the normal group, the others were given ankle injection with sodium urate crystal solution to induce the acute gouty arthritis model. The positive group were used the Benzbromarone, the influence of the aqueous extract ofClerodendranthusspicatuson rats ankle swelling, the level of serum uric acid and the activities of xanthine oxidase in the serum was observed. ELISA was used to detect serum IL-1β, IL-8 and TNF-α. ResultsCompared with normal group, the level of IL-1β and IL-8 was higher of AGA model group(P<0.05,P<0.01). High, middle and low dose of the aqueous extract of Clerodendranthus spicatus could significantly inhibit ankle swelling and reduce serum IL-1β and IL-8 leve1 at different degrees, reduce the level of serum uric acid (SUA) and the activities of xanthine oxidase (XOD) in the serum. Compared with the model group, the difference was significant (P<0.05). ConclusionThe aqueous extract ofClerodendranthusspicatushas obvious curative effect on acute gouty arthritis in rats. The therapeutic effect of AGA is related to decreasing in the levels of IL-1β、IL-8 in the serum．It can effectively inhibit the activities of xanthine oxidase, and decrease the formation of uric acid and promote the excretion of uric acid.

Clerodendranthusspicatus；Acute gouty arthritis；Anti-inflammation

云南省高校南藥協同創新項目(30270101400)

650500昆明，云南中醫學院中藥學院

陳珠(1989- )，女，2014級在讀碩士研究生。研究方向：臨床中藥學。E-mail：1225493904@qq.com

毛曉健(1967- )，女，碩士，教授，碩士生導師。研究方向：臨床中藥學、中藥藥理。E-mail：1224346204@qq.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2016.09.005

2016-04-11)