一例豬圓環病毒與高致病性豬藍耳病混合感染的診斷

杜海燕　河南省新鄉市動物疫病預防控制中心　453000韓俊偉　河南省新鄉市動物衛生監督所　453000

一例豬圓環病毒與高致病性豬藍耳病混合感染的診斷

杜海燕河南省新鄉市動物疫病預防控制中心453000
韓俊偉河南省新鄉市動物衛生監督所453000

豬圓環病毒病主要是以圓環病毒2-型為病原，常引起以體質下降、消瘦、腹瀉、呼吸困難、免疫抑制和多病原繼發感染為主要特征的一類病毒性傳染病。高致病性豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種高度接觸性傳染病，以成年豬生殖障礙、早產、流產、死胎，以及呼吸異常為特征。豬藍耳病和豬圓環病毒均是引起豬群免疫抑制的疾病，二者混合感染可導致更高的發病率和死亡率。2015年10月某豬場送檢2頭病死豬組織，經實驗室診斷為豬圓環病毒和豬高致病性藍耳病混合感染。

1　發病情況

據畜主反映，發病豬多為初產母豬，死亡率達30%。送檢1號豬產前正常，分娩過程3～4小時，產后3天陰道有白色分泌物流出，隨后用催產素、阿莫西林、魚腥草、復合維生素B等治療無效，8天后死亡。剖檢可見整個胸、腹腔有消化道內容物（胃破裂），肝臟、肺臟表面色澤為褐色。2號豬產前2個月出現呼吸采食困難，飲水正常，體溫39℃。用氨芐青霉素、阿米卡星、氟苯尼考、強力霉素、林可霉素治療均無效，于產后13天死亡，耳、四肢、腹部發紺，剖檢可見肺部嚴重出血。所產仔豬現存活10頭。

2　病原核酸檢測

（1）豬圓環病毒核酸檢測。分別取2頭病死豬的肺、淋巴結約1g，研磨組織勻漿液，8000rpm離心2分鐘，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。利用廣州維伯鑫生物科技有限公司生產的豬圓環病毒通用型（PCV-U）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）對待檢病料進行檢測。擴增體系根據試劑盒說明進行。標記熒光基團種類報告基團FAM，淬滅基團TAMRA。擴增反應條件：94℃2分鐘，然后94℃30秒或55℃45秒采集熒光，40個循環。反應結束后，陰性質控品Ct值在40以上，Ct值小于35的為陽性，Ct值在35～40之間為灰區，需要進行重復試驗。重復試驗后，Ct值仍在35～40之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。結果見圖1。

圖1　豬圓環病毒核酸檢測結果

根據熒光PCR擴增結果可知，陽性對照Ct值15.67，1號樣Ct值是24.32和2號樣Ct值是30.21，出現特異性熒光曲線，陰性對照未出現特異性熒光曲線。結果顯示，送檢病料檢測到豬圓環病毒病原核酸，表明病死豬感染豬圓環病毒。

（2）高致病性豬藍耳病病毒核酸檢測。分別取病理變化明顯的肺、淋巴結研磨組織勻漿液，8000rpm離心2分鐘，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中，采用離心柱提取法提取病料RNA。采用廣州維伯鑫生物科技有限公司生產的高致病性豬藍耳病病毒核酸RT-PCR熒光探針法進行。擴增體系和循環參數設置根據試劑盒說明進行。熒光通道選擇：檢測通道FAM，淬滅通道NONE。檢測樣本Ct值≤35.0，而且曲線有明顯的指數增長，曲線為陽性檢測樣本Ct值＞35.0，重復一次實驗，如果Ct值仍大于35.0，而且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性。檢測不到樣本Ct值為陰性。結果見圖2。

圖2：高致病性豬藍耳病病毒核酸檢測結果

根據熒光RT-PCR擴增結果可知，陽性對照Ct 值12.91，1號樣Ct值是21.15，2號樣Ct值是22.89。出現特異性熒光曲線，陰性對照未出現特異性熒光曲線。結果顯示，送檢豬體內檢測到高致病性豬藍耳病毒核酸，表明病死豬感染高致病性豬藍耳病毒。

3　結果討論

通過對送檢病死豬進行豬藍耳病和豬圓環病毒病原核酸的實驗室檢測，結果可判斷該豬群為豬圓環病毒感染與高致病性豬藍耳病病毒混合感染。豬場應立即選用相關疫苗進行強化免疫。對病死豬、流產胎兒、環境污染物等進行無害化處理，嚴格消毒。淘汰重病豬，消除傳染源。圓環病毒病和高致病性豬藍耳病均會造成免疫抑制，使機體抵抗力下降，引起多種病原菌的侵入而發生多重疫病混合感染。因此，應當加強對豬場環境的清潔消毒及飼養管理工作，給豬群服用抗生素，減少其繼發的幾率。養豬場應加強飼養管理，堅持全進全出，自繁自養，嚴把引種關，不從疫區或發病豬場引進種豬。防重于治，嚴格落實豬場防疫措施，對引進豬只及時補免相關疫苗。制定科學免疫程序，針對性地對圓環病毒、高致病性豬藍耳病及豬瘟等病免疫，以免發生多種疫病混合感染，造成重大的經濟損失。