毛細管氣相色譜法測定消毒劑中甲酚位置異構體

趙凌國　尹江偉　付　斌　曾雙飛　周指明

(1.深圳市寶安區疾病預防控制中心，深圳 518100；2.廣東醫學院，東莞 523808)

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毛細管氣相色譜法測定消毒劑中甲酚位置異構體

趙凌國1尹江偉1付斌1曾雙飛2周指明1

(1.深圳市寶安區疾病預防控制中心，深圳 518100；2.廣東醫學院，東莞 523808)

建立了毛細管氣相色譜法分離和測定消毒劑中3種甲酚位置異構體的方法。消毒劑中的甲酚用乙醚進行萃取，HP-FFAP毛細管柱進行分離，氫火焰離子化檢測器檢測，同時運用外標法和內標法進行定量分析。乙醚、水楊醛(內標)、對甲酚、間甲酚和鄰甲酚完全分離，峰面積和濃度的線性關系良好，3種甲酚位置異構體加標回收率為82%～107%，精密度RSD為2.6%～7.2%。該方法簡單、快速，具有良好的準確度和精密度，適用于消毒劑中3種甲酚位置異構體含量的測定。

甲酚氣相色譜消毒劑異構體

甲酚是重要的精細化工中間體，同時也是環境中較為普遍的有機污染物，研究其分析方法具有重要意義。甲酚極性較強，有3種理化性質極其接近的位置異構體，其中間甲酚與對甲酚沸點相差僅0.3℃。鄰甲酚、間甲酚和對甲酚的pKa值差別也很小，普通分析方法難以完全分離。在文獻報道的測定方法中，常規的比色法[1，2]、紫外分光光度法[3]和滴定法[4]只能測定總酚的含量。高效液相色譜法無法分離間甲酚和對甲酚[5-7]，衍生化過程繁瑣[7]。毛細管電泳法存在鄰甲酚和間甲酚分離效果不理想的問題[8]。

目前，氣相色譜法是檢測甲酚的主要方法，包括分析單一異構體，如鄰甲酚[9]、對甲酚[10]和間甲酚[11，12]，以及分離3種異構體，使用填充柱分離甲酚異構體，效果不理想[13，14]。近年來毛細管氣相色譜被廣泛運用，文獻報道HP-5柱與 Rtx-200柱能分離多種酚類，但均無法將對甲酚和間甲酚完全分開[15，16]。張明明等[12]篩選FFAP、阿匹松、OV-1、SE-54、OV-17和SE-30毛細管柱，臧娜等[17]篩選SE-30、SE-54、OV-17和PEG-20M毛細管柱，用于分離甲酚異構體，結果均不理想。為了增強分離效果，環糊精類(cyclodextrin,CD)衍生物被作為固定相分離甲酚異構體，如多種β-CD[18]，U-CD[19]和α-CD[17]的衍生物。含偶氮苯和膽甾酯側鏈的聚硅氧烷高分子液晶也被作為毛細管氣相色譜固定液，用于分離二氯苯異構體和甲酚異構體[20]，但上述環糊精類和高分子液晶固定相合成比較繁瑣，不易普及。于大海等[21]使用DB-225毛細管柱(50%-氰丙基苯基)-二甲基聚硅氧烷為固定液)分離甲酚異構體，取得一定分離效果。本實驗采用商品化的HP-FFAP毛細管柱同時分離3種甲酚位置異構體，取得優于以往文獻報道的分離效果。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

島津GC2010氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器；HP-FFAP毛細管柱(50 m×0.52 μm×0.32 mm)。所用的水是18.2 MΩ超純水；乙醚和鹽酸購自國藥集團化學試劑有限公司；水楊醛(批號20150310)、對甲酚(批號20150205)、鄰甲酚(批號20150122)、間甲酚(批號20140731)對照品購自天津市光復精細化工研究所；瑞泰奇牌甲酚皂消毒液購自山東瑞泰奇洗滌消毒科技有限公司(批號151017)；利爾康牌復方甲酚皂消毒液購自山東利爾康醫療科技股份有限公司(批號151019A)；德新康消毒液購自德州德新康消毒制品有限公司(批號：150903)，北洲牌甲酚皂溶液購自南昌白云藥業有限公司(批號20141102)。

1.2色譜條件與溶液配制

HP-FFAP毛細管柱(50 m×0.52 μm×0.32 mm)；程序升溫：50℃，保持1min，20℃/min至140℃，2℃/min至160℃，保持20 min；分流進樣(1∶50)，進樣量1 μL；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；載氣：氮氣，恒流，2.26 mL/min。

標準溶液：分別稱取鄰甲酚、間甲酚、對甲酚和水楊醛對照品0.14 g，乙醚溶解，定容至50 mL，作為標準儲備溶液。將標準儲備溶液用乙醚稀釋，配置成一系列標準溶液，取1 μL注入氣相色譜儀，測定。

內標溶液：稱取水楊醛1.35 g，置50 mL容量瓶中，加乙醚使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。

樣品溶液：精密稱取消毒劑1.0 g，置分液漏斗中，加鹽酸0.2 mL，加水3 mL，搖勻。精密加入乙醚20 mL，振搖，靜置分層，棄去水層。精密量取乙醚提取液1 mL和內標溶液1 mL，搖勻，取5 μL注入氣相色譜儀，測定。

2　結果與討論

2.1甲酚位置異構體分離

由于甲酚的3種位置異構體具有相似結構和理化性質，以往報道的分離方法效果均不太理想，間甲酚和對甲酚未基線分離[7,12-16,21]，或者分離度不高[17-20]。采用商品化的HP-FFAP毛細管柱分離甲酚位置異構體，取得優于以往報道的分離效果，結果如圖1所示，3種甲酚異構體和水楊醛的分離效果如表1所示。

圖1　甲酚位置異構體和水楊醛的氣相色譜分離圖峰鑒定:1.乙醚;2.水楊醛;3.鄰甲酚;4.對甲酚;5.間甲酚

化合物保留時間分離度對稱因子理論塔板數乙醚2.2920.0001.53847923水楊醛12.227149.1191.038286438鄰甲酚21.81369.6501.010225179對甲酚26.33222.6191.129238302間甲酚26.8412.2041.071191147

2.2方法學考察

不同濃度的標準溶液進樣分析，結果如圖2所示。在43.5～2720 μg/mL濃度范圍內，以峰面積對濃度進行線性回歸，4種物質線性關系良好。以3倍信噪比(S/N)對應分析物濃度作為檢出限，10倍信噪比對應分析物濃度作為定量限，甲酚和水楊醛的相關數據如表2所示。

圖2　不同濃度標準品的色譜圖峰鑒定:1.水楊醛;2,.鄰甲酚;3.對甲酚;4.間甲酚

樣品回歸方程相關系數線性范圍(μg/mL)檢出限(μg/mL)定量限(μg/mL)水楊醛Y=1640.2x+120330.999443.5～27200.0670.223鄰甲酚Y=1522.5x+150720.999243.5～27200.1160.385對甲酚Y=1782.8x-214590.999843.5～27200.1300.434間甲酚Y=1717.8x+258510.999343.5～27200.1280.427

中國藥典處方中，甲酚皂溶液 (來蘇兒)由甲酚 500 mL、植物油300g、氫氧化鈉 43g 和水配至1000 mL而成[22]。按該比例制備皂體1.0 g，分別加入藥典處方量 80%,100%和120%的甲酚異構體，水浴加熱溶解后搖勻，再加水搖勻并定容，得到低、中和高濃度的甲酚皂溶液樣品。按1.2項下方法經乙醚萃取后，進樣測定，同時運用外標法和內標法計算消毒劑中甲酚的含量，所得結果一致。鄰甲酚的低、中、高3個濃度組平均加樣回收率為82%～94%，對甲酚為85%～103%，間甲酚為83%～107%。精密度考察結果顯示鄰甲酚3個濃度組重復萃取測定RSD (n=5)為2.6%～5.1%，對甲酚為4.1%～7.2%，間甲酚為3.3%～5.8%，結果顯示方法的精密度良好。

2.3樣品測定

為了考察方法在實際檢測中的應用，將不同品牌的消毒劑適當稀釋后，用乙醚萃取后進行分析，結果如圖3所示。在所有消毒劑樣品中，均檢出甲酚，且3種位置異構體完全分離，受雜質干擾少。表3結果顯示4種消毒劑的甲酚總含量與標示量基本一致。此外，研究發現各消毒劑的甲酚原料藥有所不同，瑞泰奇和德新康消毒液中，各甲酚異構體的構成比例基本一致，而與北洲和利爾康不同。

圖3　北洲甲酚皂溶液(a).利爾康復方甲酚皂消毒液；(b).瑞泰奇甲酚皂消毒液；(c).和德新康消毒液；(d).樣品的色譜圖 峰鑒定:1.鄰甲酚;2.對甲酚;3.間甲酚

樣品標示量(%)鄰甲酚含量(比例,%)對甲酚含量(比例,%)間甲酚含量(比例,%)甲酚總量(V/V,%)北洲50137g/L(27.4)159g/L(31.8)204g/L(40.8)49利爾康2.7～3.3(V/V)0.3g/L(0.9)12.8g/L(40.0)18.9g/L(59.1)3.1瑞泰奇27.0～33.0g/L9.1g/L(33.2)4.7g/L(17.2)13.6g/L(49.6)27.4g/L德新康4.8～5.2(V/V)16.4g/L(33.4)8.4g/L(17.1)24.3g/L(49.5)4.8

3　討論與小結

建立了一種采用商品化HP-FFAP毛細管柱同時分離和測定3種甲酚位置異構體的方法。消毒劑中的甲酚用乙醚萃取后直接進樣分析，鄰甲酚、間甲酚和對甲酚完全分離。本方法樣品處理過程簡單、快速，具有良好的準確度和精密度，適用于消毒劑中甲酚異構體含量的測定。

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Determination of cresol isomers in sterilants by capillary column gas chromatography.

Zhao Lingguo1,Yin Jiangwei1,Fu Bin1,Zeng Shuangfei2,Zhou Zhiming1

(1.Center for Disease Prevention and Control of Futian District,Shenzhen,518040 China;2.Guangdong Medical University,Dongguan,518060 China)

The cresol isomers were extracted by diethyl ether.Then they were separated on a HP-FFAP capillary column and analyzed by flame ionization detector.Both the external standard method and internal standard method were used for the quantitative analysis.Diethyl ether,salicylaldehyde,o-cresol、m-cresol and p-cresol were separated completely.A good linearity was found and the recoveries of cresol isomers in sterilants ranged from 82% to 107%，and the relative standard deviations (RSDs)ranged from 2.6% to 7.2%.This method is fast,accurate and precise.It is feasible for determination of cresol isomers in sterilants.

cresol；gas chromatography；sterilants；isomer

廣東省自然科學基金2015A030310454；深圳市科技項目JCYJ20140414100411116;深圳市衛計委科研項目201505023。

趙凌國，男，1983年出生，博士，副主任技師，研究方向為衛生檢驗，E-mail：zhaolingguo2008@163.com。

10.3936/j.issn.1001-232x.2016.04.007

2016-03-10