臍血干細胞移植對小鼠腦梗死后神經生長因子的影響

潘曉峰　張細六　張　媚

1)武漢市第一醫院神經內科　武漢　430050　2)武漢市第五醫院　武漢　430050

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臍血干細胞移植對小鼠腦梗死后神經生長因子的影響

潘曉峰1)張細六1)張媚2)△

1)武漢市第一醫院神經內科武漢4300502)武漢市第五醫院武漢430050

目的分析臍血干細胞移植對小鼠腦梗死后神經生長因子的影響。方法建立大鼠大腦中動脈閉塞(middlecerebralarteryobstruction，MCAO)腦梗死模75只，分為實驗組、阿司匹林組以及生理鹽水組各25只。實驗組采用臍血干細胞移植治療，阿司匹林組大鼠給予阿司匹林灌胃治療，生理鹽水治療組在側腦室注入生理鹽水。觀察3組大鼠治療后血清NGF水平、神經功能缺損評分，分析3組大鼠在3周、6周以及8周的Brdu陽性細胞計數的差別。結果實驗前，3組大鼠血清NGF水平無差別(P>0.05)。經過治療，實驗組與阿司匹林組在2d、4d、6d、13d、20d、27d及34d的血清NGF顯著高于生理鹽水組，有顯著性差異(P<0.05)，但實驗組大鼠血清NGF水平在6d、13d、20d、27d以及34d顯著高于阿司匹林組(P<0.05)；造模前，3組大鼠神經功能缺損評分均為0。實驗后，實驗組與阿司匹林組神經功能缺損評分在2d、4d、6d、13d、20d、27d以及34d的均顯著低于生理鹽水組，差異有統計學意義(P<0.05)，但實驗組大鼠在6d、13d、20d、27d及34d的神經功能缺損評分明顯低于阿司匹林組大鼠，差異有統計學意義(P<0.05)；經免疫組化技術分析，實驗組與阿司匹林大鼠在3周、6周以及8周的Brdu陽性細胞計數顯著多于生理鹽水組，差異有統計學意義(P<0.05)；實驗組大鼠的Brdu陽性細胞計數在6周、8周顯著高于阿司匹林組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論臍血干細胞能夠在腦梗死大鼠腦內存活、遷徙和分化，顯著提高腦梗死大鼠神經生長因子的水平，顯著改善其神經功能缺損狀況。

臍血干細胞移植；神經生長因子；神經功能缺損評分；Brdu陽性細胞計數

腦梗死又稱缺血性腦卒中，是神經內科的常見病及多發病，致殘率及病死率均很高，給社會及家庭帶來了巨大的經濟與精神負擔[1]。文獻[2]報道，腦梗死之所以難以治療，原因就在于神經元的再生困難。神經突觸是神經元間信息傳遞和加工的重要結構，如何促進神經突觸的再生是促進損傷神經修復，是恢復神經功能的重要環節。因此，臍血干細胞移植已經成為治療中樞神經系統疾病新的治療方法。本研究分析臍血干細胞移植對小鼠腦梗死后神經生長因子的影響，現報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物選取健康的SD雄性大鼠75只，均建立大鼠大腦中動脈閉塞(middlecerebralarteryobstruction，MCAO)腦梗死模型，分為實驗組、阿司匹林組及生理鹽水組各25只。所有大鼠均符合動物實驗要求。

1.2臍血干細胞制備選取SD大鼠母鼠，產仔后取臍帶血，選用相關試劑盒，嚴格按照操作提取臍血干細胞。

1.3治療方法在實驗組大鼠腦部灌入臍血干細胞；阿司匹林大鼠給予阿司匹林灌胃治療；生理鹽水組大鼠在側腦室注入生理鹽水。

1.4觀察指標[3]實驗大鼠分別于2d、4d、6d、13d、20d、27d及34d采集靜脈血2mL，4 000r/min離心，分離血清后，置于冰箱保存待測神經生長因子(NSE)水平；比較3組大鼠2d、4d、6d、13d、20d、27d及34d的神經功能缺損評分(MNSS)。MNSS包括運動、感覺、反射和平衡測試，從0到18分分級，正常為0分，最嚴重的功能缺損為評分18分；采用免疫組化方法檢測3組大鼠3周、6周及8周的Brdu陽性細胞計數。

2　結果

2.13組治療后血清NGF(OD值)比較實驗前，3組大鼠血清NGF水平無差別(P>0.05)。經過治療，實驗組與阿司匹林組大鼠在2d、4d、6d、13d、20d、27d及34d的血清NGF顯著高于生理鹽水組，實驗組顯著高于阿司匹林組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1 。

表1　3組治療后血清NGF(OD值)比較

2.23組治療后神經功能評分比較造模前，3組大鼠神經功能評分均為0。實驗后，實驗組與阿司匹林組神經功能評分在2d、4d、6d、13d、20d、27d及34d的神經功能評分顯著低于生理鹽水組，差異有統計學意義(P<0.05)，同時實驗組大鼠明顯低于阿司匹林組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2 。

表2　3組治療后神經功能評分比較±s)

2.33組Brdu陽性細胞計數比較免疫組化技術分析，實驗組與阿司匹林組3周、6周以及8周的Brdu陽性細胞計數顯著多于生理鹽水組，差異有統計學意義(P<0.05)，同時實驗組顯著高于阿司匹林組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3 。

表3　3組腦梗死大鼠Brdu陽性細胞計數的分析，個/mm2)

3　討論

腦梗死是神經內科的常見病及多發病，致殘率及病死率均很高，是腦組織缺血、缺氧引起的局限性缺血性壞死或腦組織軟化等所致的疾病，嚴重影響了患者的生命健康[4]。由于腦梗死的不可逆性，患者往往遺留不同程度的殘疾，如何啟動損傷后神經修復機制，重建神經功能成為治療的熱點之一[5]。因此，本文分析臍血干細胞移植對小鼠腦梗死后神經生長因子的影響，為臨床治療提供依據。

有學者研究發現[6]，移植的臍血間充質干細胞能夠遷移至缺血邊緣地帶，分化為膠質細胞、神經元和血管內皮細胞，并促進新血管的形成，提示臍血干細胞能增強缺血側腦組織的神經可塑性，可能與臍血干細胞促進了腦梗死后神經細胞突觸的重塑有關。干細胞移植的治療方法一直是整個醫學領域的研究熱點，也被認為是治療腦梗死備受期待和極有前景的治療方法。誘導多能干細胞分化為新的目的組織細胞，進行細胞移植，或借助于體外培養擴增直接移植，以修復受損的腦組織，為腦缺血損傷的治療提供了新方法[7]。臍血干細胞是近年來發現的一類具有骨髓干細胞、外周血干細胞有相同多向分化潛能的原始祖細胞，具備自我增殖的能力，并能在特定因子的影響和誘導下向多種細胞或組織分化，能對腦梗死缺血及受損組織進行結構和功能的修復[8]。本研究發現，實驗組大鼠在治療后的6d、13d、20d、27d及34d的血清NGF水平顯著高于阿司匹林組與生理鹽水組，且顯著降低了神經功能缺損評分，充分說明經靜脈移植的臍血干細胞可促進腦缺血大鼠的神經細胞再生，改善其神經功能，這與臍血干細胞分化、再生神經細胞及神經膠質細胞以及分泌神經生長因子等多種神經營養因子的機制有密切關系[9]。本研究還發現，實驗組Brdu陽性細胞計數顯著多于阿司匹林組和生理鹽水組，進一步說明了臍血干細胞能夠在大鼠腦內遷移與分化成神經元樣細胞，從而起到治療疾病的作用[10]。

綜上所述，臍血干細胞能夠在腦梗死大鼠腦內存活、遷徙和分化，顯著提高腦梗死大鼠神經生長因子的水平，顯著改善其神經功能缺損狀況。

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[7]孫迎春，李建軍，高莉敏，等.電針刺激對脊髓損傷大鼠植入臍血干細胞后生長相關蛋白、堿性成纖維細胞生長因子、胰島素樣生長因子表達的影響[J].中國康復理論與實踐，2009，15(8)：717-719.

[8]劉建坤，孫志明，閆嶂松，等.臍血干細胞移植對大鼠脊髓損傷后神經再生和后肢運動功能的影響[J].中國現代醫學雜志，2009，19(16)：2 433-2 437.

[9]趙紅，王蘇平.臍血干細胞移植治療腦卒中的作用與機制[J].中國組織工程研究，2012，16(19)：3 584-3 587.

[10]杜丹，張明.臍血干細胞移植治療心肌梗死的作用與機制[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15(10)：1 851-1 854.

(收稿2015-08-10)

張媚，碩士，研究方向：腦血管病，癲癇，E-mail：420663068@qq.com

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1673-5110(2016)16-0049-03