中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病腦脊液MMP-2和TIMP-2測(cè)定的臨床意義

楊　華　沈立云　杜幸軍　馬鴻雁

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液科　鄭州　450014

?

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病腦脊液MMP-2和TIMP-2測(cè)定的臨床意義

楊華沈立云杜幸軍馬鴻雁

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液科鄭州450014

目的探討腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白抑制劑2(TIMP-2)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(CNSL)診斷的意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)CNSL組、無(wú)CNSL組和對(duì)照組腦脊液中MMP-2、TIMP-2表達(dá)水平的變化。結(jié)果CNSL組腦脊液中MMP-2和TIMP-2均高于無(wú)CNSL組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05))。結(jié)論腦脊液中MMP-2、TIMP-2在CNSL的表達(dá)明顯升高，提示其檢測(cè)在早期診斷CNSL方面有一定意義。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病；基質(zhì)金屬蛋白酶

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(central nervous system leiukemia，CNSL)是急性白血病嚴(yán)重并發(fā)癥，對(duì)白血病患者的預(yù)后起重要作用，嚴(yán)重威脅白血病患者的生存。如何早期診斷早期治療檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(CNSL)是目前白血病的治療難點(diǎn)。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)是一大類能降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的重要蛋白分解酶，特別是MMP-2在惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程起著重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(CNSL)患者腦脊液中MMP-2和TIMP-2的表達(dá)水平，旨在探討MMP-2和TIMP-2與白血病細(xì)胞中樞浸潤(rùn)的相關(guān)性，以及與MMP-2和TIMP-2在CNSL早期診斷中的意義。

1　材料和方法

1．1研究對(duì)象收取鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液科2011—2015年診治的67例白血病患者，中位年齡 42(2～77)歲，男35例，女32例；其中 AML 37例，ALL 25例，慢性髓細(xì)胞白血病急變(CML)5例。選取按血液病診斷及治療標(biāo)準(zhǔn)[1]確診的CNSL患者(初診或復(fù)發(fā))29例。收取無(wú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的非腫瘤患者腦脊液31例為對(duì)照組，男 19例，女 12例，中位年齡 44(5～74)歲。

1．2采集標(biāo)本在初診、復(fù)發(fā)或預(yù)防性鞘內(nèi)化療的白血病患者分別留取腦脊液標(biāo)本，在腰穿鞘注前留取對(duì)照組的腦脊液標(biāo)本。所有標(biāo)本于室溫下 3 500 rpm/min離心 20 min，分裝上清，-20 ℃凍存等待檢測(cè)。

1．3MMP-2和TIMP-2的檢測(cè)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)MMP-2和TIMP-2(北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司試劑盒)。按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行所有操作。

2　結(jié)果

(1)CNSL組腦脊液中MMP-2和TIMP-2水平均高于無(wú)CNSL組和對(duì)照組，3組間水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但無(wú)CNSL組的MMP-2和TIMP-2水平與對(duì)照組水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。(2)應(yīng)用直線相關(guān)分析MMP-2和TIMP-2在腦脊液中表達(dá)水平，分析結(jié)果提示二者表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　3組MMP-2和TIMP-2水平比較

注：與對(duì)照組相比，▲P<0.05；與無(wú)CNSL組相比，△P<0.05；與CNSL組相比，*P<0.05

3　討論

急性白血病作為造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，從骨髓原發(fā)灶向髓外浸潤(rùn)擴(kuò)散，白血病原始細(xì)胞逸出骨髓，浸潤(rùn)髓外器官、組織。這些過(guò)程需骨髓外基質(zhì)和基底膜變形和修飾，穿透基質(zhì)屏障、血管壁等[2]，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病作為急性白血病髓外浸潤(rùn)的常見(jiàn)部位，早期診斷十分重要，但具體發(fā)病機(jī)制并不十分清楚。基質(zhì)金屬蛋白酶家族作為重要的骨髓外基質(zhì)蛋白降解酶在多種腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。MMP-2屬于基質(zhì)金屬蛋白酶的明膠酶，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP)作為內(nèi)源性MMP抑制劑已知有4種，其中TIMP-2比較特異的抑制MMP-2。MMP-2 和TIMP-2已有研究證實(shí)參與多種腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[3-4]。此外，MMP-2 和TIMP-2在急性白血病的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程也有證據(jù)顯示發(fā)揮了作用[2]。目前有關(guān)MMP-2 和TIMP-2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液中表達(dá)情況研究不多。本研究檢測(cè)了腦脊液中MMP-2 和TIMP-2的表達(dá)情況，初步研究MMP-2 和TIMP-2與白血病細(xì)胞中樞浸潤(rùn)的相關(guān)性。結(jié)果顯示，MMP-2水平在白血病患者腦脊液中明顯高于對(duì)照組，且CNSL組患者腦脊液中的MMP-2水平高于無(wú)CNSL組。在本實(shí)驗(yàn)中，MMP-2 和TIMP-2的比值在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液中的表達(dá)均高于正常對(duì)照組，但二者無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明TIMP-2升高并非起著抑制MMP-2活性作用，可能通過(guò)激活MMP-2來(lái)促進(jìn)白血病細(xì)胞浸潤(rùn)。TIMP-2是MMP-2的抑制劑，但又在其酶原的激活過(guò)程發(fā)揮重要作用[5]。目前的研究認(rèn)為T(mén)IMP-2和MMP-2 通過(guò)MT1-MMP形成三元絡(luò)合物，進(jìn)一步激活MMP-2[6]。這些研究結(jié)果都說(shuō)明MMP-2 和TIMP-2之間作用機(jī)制復(fù)雜，本研究嘗試闡明MMP-2 和TIMP-2之間的關(guān)系，也證實(shí)了二者之間作用機(jī)制復(fù)雜，具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。總之，本研究嘗探討MMP-2 和TIMP-2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病中的作用，證實(shí)其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的早期診斷方面有一定意義。

[1]張之南．血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M]．3版．北京：科學(xué)出版社，2007:106-134．

[2]Janowska-Wieczorek A，Marquez LA，Matsuzaki A，et al．Expression of matrix metalloproteinases(MMP-2 and -9)and tissue inhibitors of metalloproteinases(TIMP-1 and -2)in acute myelogenous leukaemia blasts: comparison with normal bonemarrow cells[J]．Br J Haematol，1999，105(2): 402-411．

[3]Guo X T，Wang J F，Zhang L Y，et al．Quantitative assessment of the effects of MMP-2 polymorphisms on lung carcinoma risk[J]．Asian Pac J Cancer Prev，2012，13(6):2 853-2 856．

[4]Chen D，Wang Y，Zhang K，et al．Antisense oligonucleotide against clusterin regulates human hepatocellular carcinoma invasion through transcriptional regulation of matrix metalloproteinase-2 and ecadherin [J]．Int J Mol Sci，2012，13(8):10 594-10 607．

[5]Reis ST，Antunes AA，Pontes JJr，et al．Underexpression of MMP-2 and its regulators，TIMP2，MT1-MMP andIL-8，is associated with prostate cancer [J]．Int Btaz J Urol，2012，38(2):167-174

[6]Lehti K，Lohi J，Juntunen MM，et al．Oligomerization through hemopexin and cytoplasmic domains regulates the activity and turnover of membrane-type 1 matrix metalloproteinase[J]．J Biol Chem，2002，277(10):8 440-8 448．

(收稿2016-03-12))

R733.73

A

1673-5110(2016)18-0047-02

2012年度河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：201204055)