ILK在宮頸癌組織中的表達及宮頸癌細胞侵襲能力的影響

朱向陽，王香花

(湖南省益陽醫專附屬醫院婦產科，湖南 益陽 413000)

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ILK在宮頸癌組織中的表達及宮頸癌細胞侵襲能力的影響

朱向陽，王香花

(湖南省益陽醫專附屬醫院婦產科，湖南 益陽 413000)

目的探討整合素鏈接激酶(ILK)在宮頸癌組織中的表達情況及其與宮頸癌細胞的侵襲能力的相關性。方法采用免疫組化法對湖南省益陽醫專附屬醫院婦產科收集的59例宮頸上皮瘤變(CIN)標本、44例術后病例確診的宮頸癌標本及30例病理檢查為正常宮頸組織的標本進行檢測，分析ILK在上述幾種組織標本中的表達水平，并分析ILK表達與宮頸癌患者的臨床病理特征的關系。結果宮頸癌組織中的ILK表達陽性率(86.36%)顯著的高于CINI級標本的(62.5%)、CINⅡ～Ⅲ級標本的(65.71%)及正常宮頸組織標本的(23.33%)(χ2值分別為5.144、4.725、29.737，均P<0.05)。CINⅠ級標本患者的ILK表達陽性率(62.5%)、CINⅡ～Ⅲ級標本的(75.71%)均顯著的高于正常宮頸組織標本(23.33%)(χ2值分別為8.472、11.675，均P<0.05)。ILK在宮頸癌組織中的表達與宮頸癌的低分化程度、發生淋巴結轉移、深度的肌層浸潤具有相關性(χ2值分別為5.173、4.810、4.020，均P<0.05)，與年齡、FIGO分期、組織學類型無顯著相關性(χ2值分別為0.275、1.991、0.129，均P>0.05)。結論ILK在宮頸癌組織中顯著的高表達，同時與宮頸癌的分化程度、發生淋巴結轉移、深度的肌層浸潤具有相關性。

整合素鏈接激酶；宮頸癌組織；宮頸癌細胞；侵襲能力

[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofintegrinlinkedkinase(ILK)incervicalcancertissuesanditscorrelationwiththeinvasiveabilityofcervicalcancercells.MethodsByusingimmunohistochemicalmethodexpressionsofILKweredetectedinspecimensof59casesofcervicalintraepithelialneoplasia(CIN), 44casesofcervicalcancerdiagnosedaftersurgeryand30caseswithnormalcervicaltissuescollectedinAffiliatedHospitalofHunanMedicalCollegeinYiyangCity.TherelationshipbetweentheexpressionofILKandclinicalandpathologicalfeaturesofcervicalcancerpatientswasanalyzedaswell.ResultsThepositiveexpressionrateofILKincervicalcancertissues(86.36%)wassignificantlyhigherthanthatinspecimensfrompatientswithCINⅠ (62.5%),frompatientswithCINⅡ-Ⅲ (65.71%)andfromnormalcervicaltissue(23.33%) (χ2valuewas5.144, 4.725and29.737,respectively,allP<0.05).ThepositiveexpressionrateofILKinCINⅠsamples(62.5%)andCINⅡ-Ⅲsamples(75.71%)wassignificantlyhigherthanthatinnormalcervicaltissuespecimens(23.33%) (χ2valuewas8.472and11.675,respectively,bothP<0.05).TheexpressionofILKincervicalcancertissueswascorrelatedwithlowdifferentiationdegree,lymphnodemetastasisanddeepmyometrialinvasion(χ2valuewas5.173, 4.810and4.020,respectively,allP<0.05),butnotcorrelatedwithage,FIGOstageandhistologicaltype(χ2valuewas0.275, 1.991and0.129,respectively,allP>0.05).ConclusionTheexpressionofILKissignificantlyhighincervicalcancertissues,anditiscorrelatedwiththedegreeofdifferentiation,lymphnodemetastasisanddeepmyometrialinvasion.

[Keywords]integrinlinkedkinase(ILK);cervicalcancertissue;cervicalcancercell;invasionability

宮頸癌作為女性生殖系統惡性腫瘤，其病死率一直維持在較高水平，有報道大陸地區女性宮頸癌術后5年生存率不足30%，而臨床上有關宮頸癌預后判斷的指標較少，僅僅依靠婦科腫瘤指標對于預后進行判斷遠遠滿足不了宮頸癌特別是根治性手術后相關臨床預后的判斷[1]。而整合素鏈接激酶(integrinlinkedkinase，ILK)近幾年被發現在胃癌、膀胱癌以及宮頸癌中異常表達[2]。本研究通過對59例宮頸上皮內瘤變(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)標本、44例宮頸癌標本及30例正常宮頸組織標本的研究，揭示整合素鏈接激酶對于宮頸癌相關臨床預后的潛在參考價值。

1對象與方法

1.1研究對象

選取湖南省益陽醫專附屬醫院婦產科收集的59例宮頸上皮瘤變(CIN)標本、44例術后病例確診的宮頸癌標本及30例病理檢查為正常宮頸組織的標本作為研究對象。CIN組標本59例，其中CINⅠ級24例、CINⅡ級20例，CINⅢ級15例，年齡30～70歲，平均年齡(49.24±10.67)歲；宮頸癌標本44例，年齡37～67歲，平均年齡(51.26±9.47)歲，根據國際婦產聯盟(InternationalFederationofgynecologyandobstetrics，FIGO)分期：Ⅰ期8例、Ⅱ期17例、Ⅲ期12例、Ⅳ期7，分化程度：高分化18例、中分化13例、低分化13例，發生淋巴結轉移18例、未出現轉移26例。正常宮頸組織標本30例，年齡41～65歲，平均年齡(50.48±6.92)歲。納入標準：①宮頸癌組織標本、宮頸上皮瘤變組織標本為本院手術后切除后經病理學明確診斷的標本；②正常宮頸組織標本為本院門診實施婦科檢查，取活組織經病理檢查正常的標本；③所有研究對象近期未接受激素類等藥物治療。排除標準：①未進行明確的病理學診斷的患者；②近期應用抗病毒、激素類藥物治療的患者。3種類型的宮頸組織標本患者的年齡構成差異不具有統計學意義(均P>0.05)。

1.2標本采集

宮頸癌組織標本、宮頸上皮內瘤變標本以及正常宮頸組織標本均為本院婦科有經驗的宮頸領域專家采集，采集過程較為一致，其中宮頸癌標本為宮頸癌根治性手術切除的部分原位宮頸腫瘤組織，CIN組織為本院婦科陰道鏡門診CIN病變患者術中切除的部分宮頸病變組織，而正常宮頸組織為本院婦科門診超聲聚焦治療門診對于宮頸糜爛以及部分宮頸息肉患者術中切除的部分宮頸組織，所有患者均知曉本次研究并簽署相關知情同意書。標本采集后統一放置4℃冰箱保存。

1.3檢測方法

采用免疫組化技術檢測整合素鏈接激酶在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變以及正常宮頸組織中的表達，操作過程采用標準的石蠟切片法，整合素鏈接激酶相關一抗以及二抗均為南京凱基生物科技有限公司生產，二抗孵育后相關熒光的檢測采用熒光顯微鏡觀察(荷蘭phenom飛納高分辨率熒光顯微鏡)。

1.4免疫組化判定標準

免疫組織化學法的結果判定標準，ILK陽性表達細胞表現為細胞漿黃色、棕黃色著色，按照著色強度進行分級，共分為4級。0分：無色；淡黃色：1分；棕黃色：2分，褐色：3分；顯微鏡下染色陽性細胞計數：1%～25%：1分；26%～50%：2分；51%～75%：3分；>75%:4分；兩個得分項目相加為最終評分，(-)為總分<3分，陰性表達；(+)為3分，弱陽性表達；(++)為4分，中陽性表達；(+++)為5分及以上，強陽性表達。

1.5統計學分析

2結果

2.1不同類型的組織標本中整合素鏈接激酶的表達情況

宮頸癌組織中的ILK表達陽性率86.36%顯著的高于CINⅠ級標本、CINⅡ～Ⅲ級標本及正常宮頸組織，且差異均具有統計學意義(χ2值分別為5.144、4.725、29.737，均P<0.05)。CINⅠ級標本患者的ILK表達陽性率、CINⅡ～Ⅲ級標本的陽性率均顯著的高于正常宮頸組織標本，且差異均具有統計學意義(χ2值分別為8.472、11.675，均P<0.05)。CINⅠ級標本患者的ILK表達陽性率與CINⅡ～Ⅲ級標本患者的陽性表達率之間差異不具有統計學意義(χ2=0.064，P>0.05)，見表1。

免疫組化染色圖見圖1(×200倍)，圖1A為正常宮頸組織的免疫組化染色圖，可見幾乎沒有黃色著色，圖1B為CINⅠ級標本可見胞漿呈淡黃色著色，圖1C為CINⅢ級標本可見胞漿呈淺黃色著色，著色程度較CINⅠ級標本略深，圖1D為宮頸低分化鱗癌免疫組化染色，呈深棕黃色著色。

表1不同類型的組織標本中ILK的表達情況(n)

Table 1　Expressions of ILK in different types of　tissue specimens(n)

圖1不同類型的宮頸組織免疫組化染色圖(×200倍)

Fig.1Immunohistochemicalstainingofdifferenttypesofcervicaltissues(×200倍)

2.2宮頸癌組織中整合素鏈接激酶表達情況與患者的臨床及病理特征的關系分析

ILK在宮頸癌組織中的表達與宮頸癌的低分化程度、發生淋巴結轉移、深度的肌層浸潤具有相關性(均P<0.05)，與年齡、FIGO分期、組織學類型無顯著相關性(均P>0.05)，見表2。

表2宮頸癌組織中ILK表達情況與患者的臨床及病理特征的關系分析[n(%)]

Table 2 Relationship between ILK expression and clinical　and pathological features of cervical cancer tissue[n(%)]

(轉下表)

(續上表)

臨床及病理因素例數(n) ILK表達性質 陰性(%)弱陽性(%)χ2PFIGO分期1.9910.158 Ⅰ+Ⅱ255(20.00)20(80.00) Ⅲ+Ⅳ191(5.26)18(94.74)分化程度5.1730.023 高分化185(27.78)13(72.22) 中+低分化261(3.85)25(96.15)淋巴結轉移4.8100.028 是18018(100.00) 否266(23.08)20(76.92)組織學類型0.1290.720 鱗癌324(12.50)28(87.50) 腺癌122(16.67)10(83.33)肌層浸潤4.0200.045 深205(25.00)15(75.00) 淺241(4.17)23(95.83)

3討論

3.1整合素鏈接激酶臨床研究背景

整合素鏈接激酶為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，迄今為止已被發現在多種生物中廣泛存在，而在人染色體上包含著3個結構上高度保守的區域，包括錨蛋白結構結合區域、蛋白激酶結構激活區域以及依靠血小板以及白細胞相關抗原的同源激活結構域[3]。整合素鏈接激酶能與整合素β亞單位的結合，通過異常激活下游PI3K/PKB/AKT信號通路來調控細胞核內相關轉錄因子的水平，進而影響細胞間信號傳遞、改變細胞間緊密連接的狀態、促進細胞形態學改變并導致細胞間上皮間連接蛋白表達水平的顯著下調。相關研究證實在上皮性惡性腫瘤中，整合素鏈接激酶顯著參與到了發生發展過程[4]。因整合素鏈接激酶可以通過PI3K信號通路激活上皮間質轉換(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)來促進上皮細胞間質內細胞波形蛋白表達的上調，且整合素鏈接激酶可以通過改變細胞間緊密連接的狀態，降低上皮細胞內E-cadherin的表達促進細胞向間質部位侵襲[5]。而關于整合素鏈接激酶對于宮頸癌、宮頸上皮內瘤變的相關發生發展機制的研究較少[3]，本研究重在揭示整合素鏈接激酶在宮頸相關惡性或潛在惡性疾病中的作用。

3.2整合素鏈接激酶在宮頸宮頸上皮內瘤變中的異常表達

本研究結果發現，CINⅡ～Ⅲ級以及CINⅠ級宮頸病變組織中的整合素鏈接激酶表達水平顯著高于正常宮頸組織，而宮頸癌中整合素鏈接激酶的表達水平顯著高于宮頸上皮內瘤變以及正常宮頸組織，提示整合素鏈接激酶可能參與到了宮頸組織從正常-宮頸上皮內瘤變-宮頸癌的發展過程。宮頸癌以及CIN宮頸病變組織中整合素鏈接激酶的表達主要位于細胞質內。考慮整合素鏈接激酶主要依靠異常激活細胞間信號傳遞來促進細胞向間質部位侵襲。本研究并未發現CINⅡ～Ⅲ級以及CINⅠ級宮頸病變組織中整合素鏈接激酶表達水平的差異，考慮到宮頸病變發展過程中ILK對于PI3K以及下游信號通路的激活存在一致性的過程，而并不隨著宮頸上皮病變的程度呈現活化水平的差異。ILK導致的細胞核周邊miRNA135異常聚集以及宮頸上皮細胞由G0期快速通過S期而進入G1期，而細胞調控等方面并不具有組織病理學分層分析差異，在宮頸組織在由CINI級發展至CINIII級的過程中并無明顯蛋白激活水平的差異[6]。

3.3整合素鏈接激酶與宮頸病變相關臨床病理特征的關系

本研究結果發現，ILK在宮頸癌組織中的表達與宮頸癌的低分化程度、發生淋巴結轉移、深度的肌層浸潤具有顯著相關性，Han[4]也發現，整合素鏈接激酶在膀胱癌侵犯子宮以及盆腔后腹膜的組織中異常高表達，且隨著膀胱癌侵潤肌層深度的增加，ILK的表達水平呈現了指數級別的擴增。而于涓瀚等[7]學者在肺小細胞癌中也發現，ILK的表達異常高于其他亞型的肺部腫瘤如腺癌。本研究發現ILK隨著宮頸癌分化程度的惡化、淋巴結轉移的發生以及肌層清潤深度的增加，ILK的陽性表達顯著上調，提示了ILK可能廣泛參與到了宮頸癌遠處轉移以及侵襲的過程。本次研究并未發現ILK在不同宮頸癌臨床分期以及不同宮頸癌組織病理分型的陽性表達的差異，考慮ILK導致的PI3K/PKB/AKT信號通路的激活并不隨著不同宮頸癌細胞亞型的差異而出現激活水平的差異，宮頸鱗癌以及腺鱗癌等病理壓型腫瘤并無ILK的差異，而不同FIGO分期并未顯著反應宮頸癌的侵襲、惡性分化等細胞功能學的改變[8]。同時考慮到本研究的樣本量較少，以及ILK檢測時采用的抗體靈敏度的差異、熒光顯微鏡的熒光觀察效果均可能影響到ILK的陽性表達水平。

綜上所述，整合素鏈接激酶在宮頸上皮內瘤變以及宮頸癌組織中異常陽性表達，并隨著宮頸癌組織惡性分化、淋巴結轉移以及肌層侵潤的進展，ILK表達水平顯著上調，這些均提示了ILK可能顯著參與到了宮頸癌的發生發展過程，并可能作為宮頸癌預后的重要參考指標。

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[專業責任編輯：安瑞芳]

Expression of ILK in cervical cancer tissues and its influence on cervical cancer cell invasion

ZHU Xiang-yang, WANG Xiang-hua

(Affiliated Hospital of Hunan Medical College in Yiyang City, Hunan Yiyang 413000, China)

2015-06-12

朱向陽(1977-)，女，主治醫師，碩士，主要從事婦科腫瘤研究。

王香花，主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.030

R737.33

A

1673-5293(2016)01-0087-03