CYP1A1基因多態性與子宮肌瘤的相關性研究

陳倩，羅守軍

CYP1A1基因多態性與子宮肌瘤的相關性研究

陳倩，羅守軍

目的探討CYP1A1基因單核苷酸多態性（SNPs）與子宮肌瘤易感性的相關性。方法選取子宮肌瘤患者106例設為病例組，女性非子宮肌瘤患者和部分健康志愿者119例設為對照組。分析兩組患者CYP1A1基因rs4646903位點和rs4646422位點SNPs與子宮肌瘤易感性的關系。結果CYP1A1基因rs4646422位點GG型和GA+AA型的比例在病例組及對照組差異有統計學意義（＜0.05），等位基因G與A頻率在病例組及對照組差異有統計學意義（＜0.05）；CYP1A1基因rs4646903位點TT型和TC+CC型的比例在病例組及對照組差異無統計學意義（＞0.05），等位基因T與C頻率在病例組及對照組差異無統計學意義（＞0.05）。結論CYP1A1基因的rs4646422位點SNPs與子宮肌瘤易感性之間可能有一定相關性。

子宮肌瘤；單核苷酸多態性；CYP1A1基因

子宮肌瘤常見于30～50歲婦女，20歲以下少見，30歲以上的發病率高達20%～25%，是女性生殖系統中最常見的良性腫瘤，同時也是女性行子宮切除最常見的原因之一，該病的發生是遺傳因素和環境因素共同作用的結果，但其確切的發病原因目前尚未完全明確［1］。由于子宮肌瘤是復雜的多基因遺傳性疾病，其易感基因的數量、各基因的致病風險度及致病機制尚未被闡明。因此，確定子宮肌瘤易感基因和決定疾病易感性的SNPs，在基因水平上預防和治療該病具有重要意義。另外，子宮肌瘤是一種雌激素依賴腫瘤［2］。子宮肌瘤雌激素受體的含量與子宮肌瘤的生長速度呈正比，子宮肌瘤生長越快，子宮肌瘤雌激素受體的含量越高，對雌激素的敏感性越強。雌激素還刺激子宮肌瘤細胞的增長。本研究針對雌激素代謝關鍵酶CYP1A1基因單核苷酸多態性（SNPs）位點（rs4646903位點和rs4646422位點）進行檢測，以期為從遺傳學角度對子宮肌瘤易感人群進行篩查，為在基因水平上預測個體發病風險，有效防治子宮肌瘤奠定基礎。報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年1月至2014年12月寧波市北侖區小港醫院收治的子宮肌瘤患者106例，設為病例組；另選同期在小港醫院就診的女性非子宮肌瘤患者和部分健康志愿者119例，設為對照組，經查體和彩超檢查排除子宮肌瘤。兩組年齡30～50歲，中國漢族女性，排除其他婦科腫瘤和與激素有關的疾病，近半年未使用過雌激素類藥物。

1.2方法

1.2.1血樣收集與處理取受試者外周靜脈血5 ml，―20℃保存至提取基因組DNA。

1.2.2基因組 DNA的制備采用QIAGEN公司的QIAampDNAMiniKit試劑盒提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性。

1.2.3候選基因SNPs檢測

1.2.3.1確定候選基因及其 SNPs位點選擇漢族人群中與雌激素代謝相關的關鍵酶CYP1A1，選擇與代謝酶活性密切相關且雜合度＞10%的SNPs位點進行基因型分析。包括：CYP1A1的rs4646903（A/C）、rs4646422（Gly45 Asp）2個位點。

1.2.3.2PCR引物設計利用SNPs數據庫網站及SNP BLAST網絡服務系統查詢每一個SNP的DNA序列。利用引物設計軟件premier 5.0，在含SNPs的DNA序列上設計PCR引物，并將設計的引物進行引物的同源性比較，選出同源性最小而Tm值和G/C比值合適的引物作為PCR反應引物，引物本身不能含有 SNPs，所擴增片段應包含要檢測的SNPs位點，其位置盡可能設計在PCR擴增片段的中部。

1.2.4PCR擴增PCR反應體系總體積為50 l，內含5 l 10×PCR緩沖液，3 l 25 mmol/L MgCl2溶液，5l 2 mmol/L dNTP混合物，1.25 U Taq DNA聚合酶，0.5mol/L引物及 100g的基因組DNA。反應在PE公司9700型PCR反應儀中進行。PCR循環條件為95℃預變性10 min，然后94℃變性30 s，60℃復性30 s，72℃延伸30 s，反應40個循環后，72℃再延伸10 min。擴增產物用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，4℃保存。1.2.5純化后測序PCR產物經純化后作為測序模板，用Big-Dye末端熒光標記試劑盒進行測序反應，測序反應產物經純化后在ABI PRISM 3700測序儀上進行測序電泳，用Genecodes公司的Sequencer 4.2對測序結果進行分析。

1.3統計方法使用SPSS 19.0統計軟件進行分析。計數資料采用2檢驗，用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗基因型分布。＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1基因多態性結果分析CYP1A1基因rs4646422位點GG型和GA+AA型的比例在病例組及對照組差異有統計學意義（2=13.191，＜0.05），等位基因G與A頻率在病例組及對照組同樣差異差異有統計學意義（2=14.874，＜0.05）；CYP1A1基因rs4646903位點TT型和TC+CC型的比例在病例組及對照組差異無統計學意義（2=1.092，= 0.296），等位基因T與C頻率在病例組及對照組差異無統計學意義（2=2.799，=0.094）。見表1～2。

表1　CYP1A1（rs4646422）測序結果　　例（%）

表2　CYP1A1（rs4646903）測序結果　　例（%）

2.2Hardy-Weinberg平衡檢驗分析CYP1A1基因rs4646422位點及rs4646903位點在病例組及對照組均通過了 Hardy-Weinberg平衡檢驗（2≤ 0.045，均＞0.05），符合遺傳平衡法則。見表3。

表3　Hardy-Weinberg平衡檢驗分析結果

3　討論

研究證據表明，遺傳因素在子宮肌瘤的發病中起著非常重要的作用，但是目前尚未有研究證實與發病有關的基因。既往研究發現，雌激素代謝途徑的關鍵酶的編碼基因在不同人群中存在多態性，并可以改變內源性或外源性雌激素及其代謝產物的水平［3］。由卵巢分泌的類固醇激素在子宮肌瘤發生發展中起著重要的促進作用［4］。Yager等［5］發現4-羥化酶在人類子宮肌層和良性子宮肌瘤中活性更強。Herr等［6］報道了在德國人群中，CYP1A1 Thr461Asn等位基因C與子宮肌瘤易感性的增加有統計學意義。這些報道都提示了子宮肌瘤的發生發展可能與雌激素合成代謝通路有著密切的聯系［1］。CYP1A1基因多態性可以影響雌激素的合成與代謝，因此推斷CYP1A1基因可能在子宮肌瘤的發生發展中起著重要的作用。

本研究結果證實，在中國女性中，CYP1A1基因rs4646422位點基因多態性與子宮肌瘤易感性的增加有明顯相關性（＜0.05），而rs4646903位點基因多態性則不具有相關性（＞0.05）。推測CYP1A1基因rs4646422位點基因多態性導致的Gly45 Asp突變可能在子宮肌瘤的發生發展中起著重要的作用，這也為子宮肌瘤的早期診斷和預防，以及非手術靶向治療提供了重要的理論依據。

本研究樣本尚小，還需要進一步的大樣本試驗在明確子宮肌瘤發生發展過程中的基因環境交互作用。另外，CYP1A1基因多態性與子宮肌瘤易感性之間具體的機制有待進一步研究證實。

［1］Duhan N，Sirohiwal D.Uterine myomas revisited［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2010，152（2）:119-125.

［2］Cook JD，Walker CL.Treatment strategies for uterine leiomyoma:the role of hormonalmodulation［J］.SeminReprodMed，2004，22（2）:105-111.

［3］Gajjar K，Martin-Hirsch PL，Martin FL. CYP1B1 and hormone-induced cancer［J］. Cancer Lett，2012，324（1）:13-30.

［4］Hsieh Y1，Chang CC，Tsai FJ，et al.Androgen receptor trinucleotide polymorphism in leiomyoma［J］.J Assist Reprod Genet，2004，21（12）:453-457.

［5］YagerJD.Molecularmechanismsofestrogen carcinogenesis［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，1996，36:203-232.

［6］Herr D，Bettendorf H，Denschlag D，et al. Cytochrome P2A13 and P1A1 gene polymorphismsareassociatedwiththeoccurrenceofuterineleiomyoma［J］.ArchGynecol Obstet，2006，274（6）:367-371.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.04.039

R737.33

A

1671-0800（2016）04-0491-02

2015-07-10

（本文編輯：孫海兒）

315801寧波，寧波市北侖區小港醫院（陳倩）；寧波市第一醫院（羅守軍）

陳倩，Email:59609840@ qq.com