分光光度計法定量測定生乳中糊精的方法討論

文/徐　萍　魯　莉

﹝1農業部乳品質量監督檢驗測試中心（哈爾濱）；2青島市疾病預防控制中心﹞

分光光度計法定量測定生乳中糊精的方法討論

文/徐萍1魯莉2

﹝1農業部乳品質量監督檢驗測試中心（哈爾濱）；2青島市疾病預防控制中心﹞

生乳經過處理除去蛋白質、脂肪和可溶性糖后，用苯酚-硫酸溶液與提取出的糊精反應生成有色絡合物，其顏色深淺與溶液中糊精的含量成正比，通過標準曲線可間接求出生乳中糊精含量。試驗結果表明，該方法靈敏度高，精密度好，重復性試驗的標準偏差為0.007，相對標準偏差為2.88%，對生乳摻假糊精的檢測和監督具有指導性意義。

生乳；糊精；定量測定

糊精是淀粉的水解產物，呈白色或黃色，固體，有固定的分子式［（C6H12O5）·2H2O］，但是碳鏈長短不一定相同，稍溶于冷水，易溶于熱水，不溶于乙醚和乙醇，是葡萄糖向淀粉轉化的中間產物。有些奶農為了提高生乳中的固形物含量，將價格低廉的糊精摻入生乳中，從中獲利。

1材料與方法

1.1原理

樣品除去蛋白質后，用體積分數為85%的乙醇溶液除去可溶性糖，隨后苯酚-硫酸溶液與提取出的糊精反應生成有色絡合物，并且其顏色強度與溶液中糊精的含量成正比，通過以葡萄糖為標準參照物繪制的工作曲線來計算樣品中糊精的含量。

1.2試劑和材料

乙酸鋅溶液（219 g/L）：稱取219 g乙酸鋅［Zn（CH3COO）2·2H2O］，加入30 mL冰乙酸，然后加水溶解并稀釋至1 000 mL；

亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）：稱取106 g的亞鐵氰化鉀［K4Fe （CN）6·3H2O］，加水溶解并稀釋至1 000 mL；

苯酚溶液（800 g/L）：稱取精制苯酚80 g，加水溶解并稀釋至100 mL，混勻，貯存于棕色玻璃瓶中，置冰箱中可保存1 個月；

葡萄糖標準儲備液（0.5 mg/mL）：準確稱取0.5000 g經98～100 ℃干燥至恒重的純葡萄糖，加水溶解后加入5 mL鹽酸，然后加水稀釋并定容至1 000 mL；

葡萄糖標準工作液（0.1 mg/mL）：精確吸取10 mL葡萄糖標準儲備液，加水稀釋并定容至50 mL；

硫酸溶液（100 mL/L）：準確量取濃硫酸（比重為1.84）100 mL，緩慢加入到一定量的水中，待冷卻后加水稀釋至1 000 mL；

1.3儀器和設備

天平；離心機；旋轉混勻器；水浴鍋；分光光度計。

1.4分析步驟

1.4.1樣品預處理

稱量20 g樣品于250 mL容量瓶中，加入10 mL乙酸鋅溶液和10 mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，靜置，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。

1.4.2糊精的沉淀及處理

吸取上述溶液7.5 mL，置于50 mL離心管中，加入無水乙醇42.5 mL，邊加邊振搖，靜置，8 000 r/min離心10 min，棄去上清液。殘渣用體積分數為85%的乙醇溶液15 mL洗滌，隨后離心，棄去上清液，重復3 次此操作，最后殘渣用100 mL/L硫酸溶液20 mL溶解，并轉移至100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，此溶液為試樣待測液，備用。

1.4.3標準曲線的繪制

準確移取葡萄糖標準工作液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL分別置于25 mL試管中，準確補充水至2.00 mL，加入800 g/L苯酚溶液0.05 mL，旋轉混勻器上混勻，然后小心加入濃硫酸5.0 mL，于旋轉混勻器上小心混勻，置于沸水浴中煮沸5 min，冷卻至室溫，用分光光度計在485.0 nm波長處，以試劑空白溶液為參比，1 cm比色皿測定吸光度值。

1.4.4試樣中糊精質量濃度的測定

準確移取試樣測定液2.0 mL置于25 mL試管中，加入800 g/L苯酚溶液0.05 mL，旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸5.0 mL，于旋轉混勻器上小心混勻，置于沸水浴中煮沸5 min，冷卻至室溫，用分光光度計在485.0 nm波長處，以試劑空白溶液為參比，1 cm比色皿測定吸光度值。利用標準工作曲線和計算公式，計算試樣中糊精的質量濃度。

1.4.5方法的重復性測定

將糊精濃度為0.25 g/100 g的生乳樣品由同一操作者使用相同的方法和設備，在短時間內重復測定糊精濃度。

1.5結果計算公式

式中：

0.9——葡萄糖折算成糊精的換算系數。

2　結果

表1　不同質量葡萄糖的吸光度值

2.1標準工作曲線的建立

不同質量的葡萄糖對應的吸光度值見表1。以葡萄糖質量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線（圖1），線性方程為：C=0.0615（A）+0.0031，R2=0.9967，線性關系良好。

2.2重復性試驗

重復性試驗結果如表2所示。由表2可知，重復測定5 次，結果的標準偏差為0.007，相對標準偏差為2.88%，說明該方法精密度良好。

表2　重復性試驗測定結果

圖1　標準工作曲線

3　方法討論與注意事項

本方法靈敏度高，重復性條件下的精密度好，填補了目前大部分檢測糊精標準只能定性測定，而不能準確檢測出糊精含量的空缺。對于生乳中摻假糊精的檢測和監督具有指導性和突破性的意義。

用本方法測定生乳中糊精含量時，若試液中糊精的質量濃度超出或低于標準工作曲線的濃度，應把試液進行適當稀釋或濃縮，以保證測定結果的準確性；而且由于濃硫酸的腐蝕性較高，因此在加入濃硫酸時，一定要加倍小心，以免灼傷。

［1］ GB/T 20884-2007 麥芽糊精.

［2］ QB 1613-92 食品添加劑.

［3］ 王丹慧，王春苗，李梅，等. 原料乳及乳粉中糊精摻假的檢測方法. 中國乳品工業，2008，36（4）：62-64.

徐萍（1976-），本科，食品檢驗高級工程師，從事食品及農產品的檢驗與研究工作。

劉振邦教授追思&學術思想理論研討會在京召開

【本刊訊】（記者 祝文琪）2016年7月13日，由農業部原常務副部長，中國奶業協會名譽會長劉成果倡導提議的“劉振邦教授追思&學術思想理論研討會”在京召開。劉振邦教授是我國著名農業專家，中國社會科學院世界經濟與政治研究所研究員，博士生導師，享受國務院政府特殊津貼。他一生潛心研究世界農業的發展，在改革開放前夕大膽地提出中國要大力發展畜牧業，特別是草食畜牧業的論斷。他擯棄學院式研究，深入農村，和農民共同探討和推廣農業一體化思想，用合作社的形式組織農民，搞規模農業和畜牧業的實踐，幫助農民走上致富的道路。研討會上，劉振邦教授生前的同事、家人、朋友、學生、仰慕老先生的行業人士以及多家畜牧行業和大眾媒體60 余人到會，表達了對劉振邦教授的默哀和追思，并對劉振邦教授的學術思想進行研討學習，氣氛莊重而熱烈。

Discussion of Determination Method for Dextrin in Raw Milk with Spectrophotometer

XU Ping1，LU Li2
﹝1 Ministry of Agriculture Dairy Quality Supervision and Testing Center（Harbin）；2 QingDao Municipal Centre for Disease and Control﹞

After removing the protein，fat，and soluble sugar in raw milk，the extracted dextrin reacted with phenol-sulfuric acid solution，and the color depth of generated complex was proportional to the concentration of dextrin in the solution，therefore the concentration of dextrin in raw milk could be calculated by the standard curve. The results showed that the developed method has high sensitivity and good precision，with the standard deviation of 0.007 and the relative standard deviation of 2.88%. It provided guiding significance for the determination and supervision of dextrin adulteration in raw milk.

raw milk；dextrin；quantitative determination

2015-12-21）