腫瘤異常蛋白(TAP)在肝癌診斷及預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科(西安 710061)

尹　毅▲　姚向波　趙英仁△

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腫瘤異常蛋白(TAP)在肝癌診斷及預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科(西安 710061)

尹毅▲姚向波趙英仁△

目的:探討腫瘤異常蛋白 (TAP)在肝癌患者中的表達(dá)水平及對(duì)肝癌的診斷價(jià)值和復(fù)發(fā)評(píng)估作用。方法：選取原發(fā)性肝癌患者、良性肝病患者及健康體檢者各50例，分別檢測各組TAP、AFP水平，比較分析各組TAP水平差異以及術(shù)后TAP變化情況與肝癌患者無復(fù)發(fā)生存率(RFS)的相關(guān)性。結(jié)果：原發(fā)性肝癌組患者TAP水平顯著高于良性肝病組與對(duì)照組(P<0.05)，TAP與AFP聯(lián)合檢測對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷敏感性顯著高于單獨(dú)檢測組(P<0.05)。50例肝癌患者的TAP術(shù)后1個(gè)月水平較術(shù)前顯著下降，且以術(shù)后1個(gè)月TAP水平評(píng)估為PR組的患者無復(fù)發(fā)生存率(RFS)顯著高于SD+PD組(P<0.05)。結(jié)論：腫瘤異常蛋白 (TAP)作為新的腫瘤標(biāo)志物，在肝癌的診斷和復(fù)發(fā)評(píng)估中有著潛在的應(yīng)用價(jià)值。

主題詞腫瘤/診斷腫瘤蛋白質(zhì)類/代謝@腫瘤異常蛋白

原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率在全球惡性腫瘤中占第五位，病死率居世界第三[1]，在我國惡性腫瘤病死率中排名第二[2]，我國也是每年肝癌新增病例數(shù)最多的國家[3]。由于肝癌早期無特異癥狀，患者發(fā)現(xiàn)時(shí)一般已處于中晚期，此時(shí)期肝癌的治療方式非常有限，療效極差。研究表明早發(fā)現(xiàn)、早治療，可以提高原發(fā)性肝癌患者的5年生存率[4]，篩查與早期診斷是肝癌預(yù)防的重點(diǎn)。目前診斷肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)臨床上常用的血清學(xué)篩查手段主要是檢測甲胎蛋白(AFP)，而高分化或分化很差的肝癌細(xì)胞往往不產(chǎn)生AFP，且AFP是一種胚胎內(nèi)胚層衍生相關(guān)組織細(xì)胞的同源蛋白產(chǎn)物[5]，在活動(dòng)性肝病、妊娠、胚胎癌等均有升高，作為肝癌篩查手段AFP陽性率僅為70%左右，臨床檢測的敏感度較低[6]。最近發(fā)現(xiàn):正常細(xì)胞惡變時(shí)，細(xì)胞膜表面的聚糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，最常見的是N-鏈聚糖分支的增加，產(chǎn)生多種異常糖鏈糖蛋白即腫瘤異常蛋白(Tumor abnormal protein，TAP)，可釋放到體液中。當(dāng)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的TAP量達(dá)到一定程度時(shí)，即可以在末梢血液中檢出[7]。TAP不受肝細(xì)胞分化程度及各種炎癥等疾病影響，對(duì)HCC的早期診斷及療效監(jiān)測具有重要意義。

資料與方法

1一般資料選取2012年1月至2014年1月于本院住院治療的50例原發(fā)性肝癌患者，男32例，女18例，平均年齡63歲。根據(jù)臨床表現(xiàn)、B超、CT等檢查，提示肝臟占位病灶或肝外轉(zhuǎn)移灶，均經(jīng)病理組織學(xué)檢查，確診為原發(fā)性肝癌。所有患者均采用手術(shù)切除治療，術(shù)前未經(jīng)化療。收集所有患者術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后1個(gè)月指端末梢血，進(jìn)行TAP含量測定。選擇本院同期住院的其他良性肝臟疾病(乙型肝炎、丙型肝炎、脂肪肝等)患者50例，男24例，女26例，平均年齡58歲。選擇50例在本院進(jìn)行健康體檢的人員作為對(duì)照組，其中男25例，女25例，平均年齡55歲，排除器質(zhì)性疾病，患者肝、腎功能正常。三組在年齡、性別方面比較差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2檢測方法

2.1TAP的檢測： 取各組研究對(duì)象指端末梢血，推制成厚薄均勻的血片3張，自然干燥。將TAP檢測試劑充分搖勻，用滴管垂直滴加在血片上，每張3滴；等血片上凝聚助劑自然干燥形成圓形“斑點(diǎn)”，將標(biāo)本置于TAP集成閱片儀下，尋找特異形態(tài)的凝聚物。TAP正常/無明顯凝聚物：面積0～121μm2；TAP異常/凝聚物較小：面積121～225 μm2；TAP異常/凝聚物較大：面積≥225μm2。試劑和儀器均購自浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司。

2.2 AFP的檢測： 采用Elecsys2010型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及試劑盒由羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供，所有操作參照說明書進(jìn)行。

結(jié)　果

1三組TAP、AFP表達(dá)水平比較原發(fā)性肝癌組兩項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)水平均高于良性肝病組和健康對(duì)照組，(P<0.05)，而良性肝病組和健康對(duì)照組二項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平比較差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1　三組患者TAP、AFP表達(dá)水平

注：*與良性肝病組比較，P<0.05；*與健康對(duì)照組比較，P<0.05

2TAP、AFP單獨(dú)與聯(lián)合檢測在肝癌中的比較對(duì)于原發(fā)性肝癌患者，TAP檢測的敏感度與陽性率明顯高于AFP檢測所得，而特異度稍有偏低。但是兩者聯(lián)合檢測的敏感度與陽性率明顯高于各項(xiàng)單獨(dú)檢測，見表2。

表2　TAP、AFP單獨(dú)與聯(lián)合檢測在肝癌中的比較

注：*TAP檢測敏感度、特異度、陽性率與AFP檢測的比較P值;*TAP檢測敏感度、特異度、陽性率與兩者聯(lián)合檢測的比較P值;*AFP檢測敏感度、特異度、陽性率與兩者聯(lián)合檢測的比較P值

3肝癌患者手術(shù)前、后TAP表達(dá)水平比較肝癌患者手術(shù)后1周復(fù)查TAP水平較術(shù)前差別不大(189.2±156.8μm2)。而手術(shù)后1個(gè)月TAP值較術(shù)前顯著降低(90.6±121.5μm2)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖1。

4末梢血中TAP表達(dá)水平變化與患者預(yù)后的關(guān)系根據(jù)肝癌患者術(shù)后一個(gè)月TAP的水平，將患者分為PR(部分緩解-TAP正常/無明顯凝聚物)、SD(疾病穩(wěn)定-TAP異常/凝聚物較小)、PD(疾病進(jìn)展- TAP異常/凝聚物較大)。Kaplan-Meier生存分析顯示:末梢血TAP水平的動(dòng)態(tài)變化與患者的無復(fù)發(fā)生存率顯著相關(guān)，且術(shù)后TAP水平評(píng)估為PR組的患者中位無復(fù)發(fā)生存率(RFS)為20個(gè)月，而SD+PD組僅為5個(gè)月，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

* 表示與術(shù)前TAP水平相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01

圖1肝癌患者手術(shù)前后末梢血TAP表達(dá)水平的比較

圖2　肝癌患者TAP水平與無復(fù)發(fā)生存率(RFS)的關(guān)系

原發(fā)性肝癌多經(jīng)歷慢性肝炎、肝硬化至肝細(xì)胞癌的過程，往往確診已是在中晚期，嚴(yán)重影響了疾病的治愈率和患者的生存率。目前臨床常用的檢測肝癌的血清學(xué)指標(biāo)還不能滿足早診斷、早治療的目的。因此探尋新的一種無創(chuàng)性腫瘤標(biāo)記物檢查，提高肝癌的陽性檢出率，對(duì)肝細(xì)胞癌的早期診斷及疾病發(fā)展的監(jiān)測至關(guān)重要。

異常糖鏈糖蛋白(Tumor abnormal protein,TAP)又稱腫瘤異常蛋白，是腫瘤細(xì)胞在新陳代謝過程中排放的糖蛋白和鈣-組蛋白復(fù)合物的總稱，TAP的出現(xiàn)間接表示細(xì)胞癌變的數(shù)量和程度。當(dāng)TAP達(dá)到一定程度后,這類物質(zhì)向血液排放,并較多地存在于外周血液[8]。TAP在肝臟腫瘤具有較高表達(dá),陽性率為70%～95%[9]，消化系統(tǒng)腫瘤高危人群的篩選中TAP檢測系統(tǒng)特異度為97.7%，誤診率為2.3%[10]。將其作為肝癌血清學(xué)檢測的指標(biāo)，對(duì)發(fā)現(xiàn)癌前病變有較高的靈敏度和特異性。

本實(shí)驗(yàn)選取原發(fā)性肝癌患者、良性肝病患者及健康體檢者各50例，分別檢測各組TAP、AFP水平，結(jié)果顯示TAP在原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)水平明顯高于肝臟良性病變組與健康對(duì)照組。TAP單獨(dú)檢測的陽性率及敏感度均高于AFP的檢測，與AFP聯(lián)合檢測可以提高肝癌的診斷率，敏感性可達(dá)94.5%，陽性率達(dá)到80.2%，且與TAP單獨(dú)檢測比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，TAP可作為肝癌診斷的補(bǔ)充及聯(lián)合檢測指標(biāo)，為早期肝癌的篩查和監(jiān)測提供良好參考依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)研究還檢測50例肝癌患者術(shù)前、術(shù)后1周和術(shù)后1個(gè)月的TAP水平，結(jié)果顯示肝癌患者術(shù)后1周復(fù)查TAP水平較術(shù)前有所上升，而術(shù)后1個(gè)月TAP濃度顯著下降，這可能由于術(shù)后1周手術(shù)創(chuàng)傷炎癥反應(yīng)或并發(fā)感染未完全恢復(fù)所致，提示選擇術(shù)后1個(gè)月TAP值作為復(fù)查指標(biāo)更為合理。而根據(jù)肝癌患

者術(shù)后一個(gè)月TAP的水平，將患者分為PR(部分緩解-TAP正常/無明顯凝聚物)、SD(疾病穩(wěn)定-TAP異常/凝聚物較小)、PD(疾病進(jìn)展- TAP異常/凝聚物較大)三組,生存分析顯示，術(shù)后TAP水平與患者的無復(fù)發(fā)生存率(RFS)顯著相關(guān)，且評(píng)估為PR組的患者無復(fù)發(fā)生存率明顯高于SD+PD組，證實(shí)了TAP可作為肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)評(píng)估的的指標(biāo)。

總之，我們通過TAP與血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測診斷不但能發(fā)現(xiàn)早期肝癌，最重要的是當(dāng)人體內(nèi)的癌細(xì)胞數(shù)大于100萬個(gè)時(shí)就能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，此時(shí)人體內(nèi)尚未形成腫塊，為肝癌的防治爭取到了寶貴的時(shí)間。術(shù)后根據(jù)患者一個(gè)月后TAP的水平，還可以對(duì)患者的生存及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，為臨床制定科學(xué)合理的診療措施提供有力依據(jù)。因此TAP作為一項(xiàng)新的生物學(xué)檢測指標(biāo)，在肝癌的早期診斷、療效評(píng)價(jià)以及復(fù)發(fā)評(píng)估中有著潛在的應(yīng)用價(jià)值。

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(收稿：2016-02-26)

Research of tumor abnormal protein(TAP)in diagnosis and recurrence assessment of hepatocellular carcinoma

Department of Infectious Diseases, The First Affiliated Hospital of Medical College,

Xi'an Jiaotong University(Xi'an 710061)Yin YiYao XiangboZhao Yingren

Objective：To investigate the serum tumor abnormal protein(TAP)levels and its relevance in diagnosis and recurrence assessment of patients with Hepatocellular Carcinoma. Methods：50 cases of liver cancer group、benign liverdisease group and healthy people as control group were selected, serum TAP、AFP of patients and healthy people mentioned above were detected.observed the changes and its relationship to relapse-free survival(RFS). Results:Serum levels of TAP of patients in primary liver cancer group were significant higher than those in benign liver disease group and control group(P<0.05). Sensitivity of TAP detection combined with AFP in primary liver cancer diagnosis was obvious higher than those in detection groups without TAP(P<0.05)．Conclusion : Average TAP concentration of 50 cases of liver cancer patients after 1 months were significantly lower than those before surgery(P<0.05).Furthermore,one month after surgery,the relapse- free survival(RFS) of patients whose TAP level achieved PR was significantly longer than that of SD+PD group(P<0.05). Conclusion: Serum TAP as a new tumor marker has potential applications in the diagnosis and assessment of recurrence of hepatocellular carcinoma.

Liver neoplasms/diagnosisNeoplasm proteins/metabolisin@Tumor abnormal protein

R735.7

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2016.09.074

▲西安市第八醫(yī)院肝病科