豬巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗

吳艷萍　山東省博興縣畜牧獸醫局　256500

豬巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗

吳艷萍山東省博興縣畜牧獸醫局256500

2015年10月，山東省博興某豬場飼養的仔豬發生一種以呼吸嚴重困難和敗血癥為主要特征的疫病。無菌采集病死豬的肺臟等組織進行病原分離，通過分離菌株的菌落特征、形態特征和生化特性等鑒定，分離菌株為豬巴氏桿菌，致病性試驗顯示分離菌株具有較強的致病性，藥敏試驗顯示分離菌株對青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物敏感。

豬巴氏桿菌；分離鑒定；藥敏試驗

豬巴氏桿菌病是由豬多殺性巴氏桿菌引起的一種以出血性敗血病、咽喉炎和肺炎為主要特征的急性、繼發性、細菌性傳染?。?.2］。該病的發生無明顯季節性，但秋冬氣候劇變、飼養條件改變和長途運輸等容易誘發，故該病在我國一直呈散發性和地方性流行［3-4］。2015年10月，山東省博興某豬場飼養仔豬發生以精神沉郁、體溫升高、呼吸困難、口鼻流白色泡沫、氣管內有大量泡沫黏液和肺臟充血、出血、淤血等為主要特征的疫病。本研究進行了病原的分離鑒定與藥敏試驗，篩選出了針對該致病菌的敏感性藥物，為發病豬場防治措施的制定提供了參考。

1　材料與方法

無菌采集病死豬的肺臟、脾臟、肝臟、腎臟和淋巴結等組織。細菌微量生化反應管購自杭州天和微生物試劑有限公司，潔級昆明系小白鼠購自山東省實驗動物中心，藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術開發公司。將采集的臨床病料樣品劃線接種于血液瓊脂平板，37℃恒溫培養24小時后，挑取生長良好的單菌落劃線接種于平板進行純化，連續傳3代，觀察菌落的生長特征。挑取純化后的單菌落涂片，革蘭氏染色、鏡檢，觀察分離菌株的形態特征。將分離菌株分別接種于生化反應管，18小時后觀察生化試驗結果。將分離菌株腹腔注射昆明系小白鼠5只，0.2mL/只，同時取5只小白鼠腹腔注射培養基作為對照。隔離飼養，觀察小白鼠的發病和死亡情況，對死亡小白鼠進行解剖，觀察病理變化。利用K-B菌液涂布法分別測定分離菌株對青霉素等12種常見藥物的敏感性，篩選出針對分離菌株的高敏藥物。判定標準為：當抑菌環直徑在15mm以上判為高敏，抑菌環直徑在10～15mm之間判為中敏，抑菌環直徑在10mm以下判為耐藥。

2　結果與分析

（1）病原菌分離培養與純化結果。培養24小時后的血液瓊脂平板上可見露珠狀菌落，無溶血現象。經連續3代純化后，得到大小均一、半透明、光滑濕潤和邊緣整齊的露珠狀菌落。

（2）分離菌株形態特征觀察結果。革蘭氏染色后鏡檢可見革蘭氏陰性菌，呈短桿狀。

（3）分離菌株生化特性鑒定結果。分離菌株的生化特性如表1所示，其與豬巴氏桿菌的生化特性相符。

表1　分離菌株的生化特性

（4）致病性試驗結果。接種分離菌株的5只小白鼠在接種后1小時，開始出現精神沉郁等不適反應，在接種后12小時內全部死亡。解剖死亡小鼠可見肝臟、肺臟和心臟等臟器組織均具有出血點，取死亡小鼠的肝臟、肺臟和心臟等組織可再次分離出巴氏桿菌。同時接種培養基的5只小白鼠均生長正常，無不適反應。

（5）藥敏試驗結果。如表2所示，分離菌株對青霉素等12種藥物表現出了不同程度的敏感性，其中高敏藥物5種（青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考、卡那霉素），中敏藥物3種（氧氟沙星、慶大霉素、諾氟沙星），耐藥藥物4種（環丙沙星、四環素、土霉素、復方新諾明）。

表2　分離菌株對12種藥物的敏感性

3　討論

豬巴氏桿菌在豬群中屬于條件性致病菌，即該菌在豬群中廣泛存在，當豬的免疫力和抗病力下降，該病原菌可大量增殖并侵入機體發生內源性感染，進而引起發病。故該病的綜合防治措施應采取以加強飼養管理和環境衛生為主的預防方法，采取“防重于治”的原則，從源頭上控制該病的發生和流行。

目前，臨床上控制豬巴氏桿菌病最有效、最快速的方法是使用抗菌藥物進行治療，但是隨著抗菌藥物大量、盲目的濫用，細菌的耐藥性亦越來越嚴重，給食品安全和人類健康造成潛在的威脅。張顯浩等［5］研究表明，豬巴氏桿菌分離株對青霉素、氨芐西林和頭孢類藥物均產生了一定的耐藥性。馬增軍等［6］研究表明，豬巴氏桿菌部分分離株對復方新諾明、慶大霉素和卡那霉素3種藥物耐藥。本研究中的分離菌株雖然對青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物高度敏感，為發病豬場篩選出了治療性藥物，但是本研究中的分離菌株已對環丙沙星、四環素、土霉素和復方新諾明4種藥物產生了不同程度的耐藥性。綜合以上研究結果可以看出，豬巴氏桿菌不同地域分離株對不同藥物均已產生了一定的耐藥性，其整體耐藥性的發展趨勢不容樂觀，應加強重視。

［1］朱俠.豬巴氏桿菌病及其防控措施［J］.中國畜牧獸醫文摘，2015，31（11）：132-133.

［2］王炎炎，黃坤英，丁孟建.豬多殺性巴氏桿菌病的診治［J］.黑龍江畜牧獸醫，2013，（1）：101-102.

［3］史正明.仔豬巴氏桿菌病病原的分離與鑒定［J］.山東畜牧獸醫，2015，36（9）：32-33.

［4］范靈霞.豬巴氏桿菌病的診斷與防治［J］.中國畜牧獸醫文摘，2014，30（12）：117.

［5］張顯浩，陳敏鴻，李冰，等.豬A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及耐藥性分析［J］.黑龍江畜牧獸醫，2016（1）：110-112.

［6］馬增軍，芮萍，張軍輝，等.豬源多殺性巴氏桿菌分離鑒定與藥敏試驗［J］.畜牧與獸醫，2015，47（7）：93-95.