不同PCR方法對豬偽狂犬病原檢出率的比較

陳光麗　河南省新鄉市動物疫病預防控制中心　453003

不同PCR方法對豬偽狂犬病原檢出率的比較

陳光麗河南省新鄉市動物疫病預防控制中心453003

豬偽狂犬病是影響豬群健康的重要疾病，在豬群中的發病率很高。該病可引起妊娠母豬流產、死胎和公豬的繁殖障礙，仔豬神經癥狀及高死亡率。偽狂犬病毒的實驗室診斷有普通PCR、實時熒光PCR及ELISA等。本文就普通PCR和實時熒光PCR在偽狂犬病原檢測中的檢出率做一比較論述。

1　材料與方法

（1）偽狂犬疑似病料。豫北某豬場11月初產房的多群2～3日齡仔豬出現腹瀉癥狀，病仔豬皮膚發紅，體溫升高，精神不振，嘔吐，逐漸消瘦，部分病豬有神經癥狀，出現發抖，后肢走路不穩，共濟失調。使用抗生素治療無效，病死率高達100％。采集病豬不同臟器、腦組織和腸內容物等，共10頭份進行檢測。

（2）主要試劑。偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒，購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司；偽狂犬病毒熒光PCR檢測試劑盒，購自廣州維伯鑫生物科技有限公司。

（3）方法。對病料的處理以及PCR擴增，參照試劑盒說明書進行。

2　結果

應用北京世紀元亨動物防疫技術有限公司偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒，對采集的病料進行病原學檢測，結果見圖1。

應用廣州維伯鑫生物科技有限公司偽狂犬病毒熒光PCR檢測試劑盒，對采集病料進行病原學檢測，結果見圖2。

3　結論

同批樣品采用普通PCR檢測偽狂犬病毒，10份樣品中有3份陽性，陽性率為30％；采用熒光PCR檢測，10份樣品全為陽性，陽性率為100％。對比發現，熒光PCR方法較普通PCR有更高的靈敏性和準確性，而且操作更為簡單快速，但是對實驗要求也較高，容易污染，造成假陽性的發生，價格也較為昂貴。普通PCR則更為準確，而且PCR擴增產物可進行回收用于下一步研究分析。兩種方法各有優缺點，在獸醫臨床中應配合使用，相得益彰。

圖1　樣品偽狂犬PCR電泳結果

圖2　樣品偽狂犬熒光PCR擴增曲線