醋酸甲羥孕酮暴露致食蚊魚的雄激素效應

金子越， 方展強（華南師范大學生命科學學院/廣東省高等學校生態與環境科學重點實驗室， 廣州 510631）

醋酸甲羥孕酮暴露致食蚊魚的雄激素效應

金子越， 方展強
（華南師范大學生命科學學院/廣東省高等學校生態與環境科學重點實驗室， 廣州 510631）

目的 探討人工合成孕激素（醋酸甲羥孕酮，MPA）暴露對雌性食蚊魚（Gambusia affinis）的雄激素效應。方法 將成年雌性食蚊魚隨機分為4組， 包括對照組和40 ng/L（低密度組）、200 ng/L （中密度組）和1 000 ng/L（高密度組）等3個MPA實驗暴露組，并設置平行組。持續暴露28 d后觀察與測定食蚊魚的體長（BL）、體質量（BW）、身體健康指數（CF）、臀鰭第3鰭條分節數（FJ）、第4、5、6鰭條長度（FL）變化和第14、15、16椎體脈棘的形態變化等5項指標，并在7 d、14 d、21 d、28 d測定了卵黃蛋白原基因（VTGα）、雄激素受體基因（ARα）和細胞色素P450芳香化酶基因（CYP19α）mRNA表達水平的變化。 結果 食蚊魚經MPA暴露28 d后，與對照組相比， 200 ng/L和1 000 ng/L實驗組食蚊魚的BL、BW和CF均無明顯變化（分別P＞0.05）。臀鰭第3鰭條分節數和第6鰭條長度變化不明顯（P＞0.05），但第4、5鰭條的長度顯著增加（P＜0.01）。暴露在200 ng/L和1 000 ng/L MPA中、高濃度組食蚊魚的第14椎體脈棘的總長（L）、尾部尖端到脊的高度（D）值， 第15椎體脈棘的投影長（P）、P∶D值和第16椎體脈棘的P、L∶D、P∶D值分別呈現顯著性變化（P＜0.05或P＜0.01），椎體脈棘伸長，且與脊椎骨接近垂直，顯示形態雄性化效應。與對照組相比，低濃度組（40 ng/L MPA） VTGα， CYP19α基因的表達量上升（P＜0.01），而ARα表達被抑制（P＜0.05）； 中濃度組VTGα，CYP19α， ARα基因的表達量都顯著上升（P＜0.01）； 高濃度組CYP19α， ARα基因的表達量顯著上升（P＜0.01），而VTGα的表達量則被抑制（P＜0.01）。結論 MPA暴露致雌性食蚊魚骨骼出現形態雄性化，目標基因表達水平的變化結果證明MPA對食蚊魚具雄激素效應，表明MPA是一種具有雄激素效應的孕激素。

醋酸甲羥孕酮（MPA）； 食蚊魚； 雄性化； 細胞色素P450芳香化酶基因（CYP19α）； 卵黃蛋白原基因（VTGα）、雄激素受體基因（ARα）； mRNA表達； 骨骼形態學

孕激素（progestin）是由卵巢的黃體細胞分泌，以孕酮（黃體酮）為主，它通常在雌激素作用的基礎上產生效用。目前， 人工合成孕激素已經大量使用，如醋酸甲羥孕酮（Medroxyprogesterone 17-acetate，MPA）中文名又稱“甲羥孕酮醋酸酯”、“甲孕酮”、“安宮黃體酮”等，臨床上主要用于女性如痛經、功能性閉經、功能性子宮出血等疾病的治療，大劑量可用作長效避孕針。在魚類體內，孕激素對刺激雌魚卵巢的最后發育和成熟、刺激雄魚的精子形成以及對啟動雌、雄魚減數分裂都起著很重要的作用［1］。環境中的孕激素主要來源于人體、家畜和野生動物的糞便，在臨床上使用的大量孕激素類產品，以及造紙工業廢水中具孕激素活性的植物激素類物質等， 它們未經處理便直接地被排放到水環境中［2］。由于孕激素是雄激素、雌激素、腎上腺皮質激素等生物合成的重要中間體［3］， 因此不同程度上具有上述各類激素的作用。一些研究已經表明不同的孕激素類物質表現出不同的激素效應［1］，因此，可以利用實驗魚類作為指示生物了解不同水平孕激素暴露對水生生物的毒性影響。

食蚊魚（Gambusia affinis）隸屬鳉形目（Cypriondontiformes），胎鳉科（Poeciliidae），是一種原產美國東南部、墨西哥及古巴的熱帶性卵胎生小型魚類，引進我國后，目前已廣泛分布在華南地區不同水域。食蚊魚具有明顯的二態性，雄魚稍細長，雌魚腹緣圓凸，性發育成熟或者妊娠的雌魚在臀鰭附近可以觀察到孕斑。雌魚的臀鰭和第14、15、16椎體脈棘（vertebral ribs）與雄魚不同，性成熟的雄性個體其變長并向前彎曲，這種結構可以在雄魚交配時為生殖足擺動提供足夠的支撐［4］。另外雌魚的臀鰭為扇形，雄魚臀鰭部分高度分化，第3、4、5鰭條變細形成長的生殖足，其尖部具有生殖鉤，雄性食蚊魚通過生殖足給雌性食蚊魚輸送精子［5］。利用食蚊魚的臀鰭和第14、15、16椎體脈棘的骨骼形態變化可以檢測孕激素類物質暴露致魚類的雌/雄激素效應［6］。而利用食蚊魚目標基因mRNA表達水平變化可更敏捷地檢測到水體環境激素類物質暴露致魚類的雌/雄激素效應［7-9］。

本實驗選取MPA對雌性食蚊魚進行暴露，觀察MPA對食蚊魚骨骼發育的形態雄性化效應，同時觀察食蚊魚生殖相關的卵黃蛋白原基因（VTGα）、雄激素受體基因（ARα）和細胞色素P450芳香化酶基因（CYP19α） mRNA表達水平的變化，探討人工合成孕激素對水生動物魚類的雌/雄激素效應。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

食蚊魚捕自廣州市華南師范大學石牌校區池塘（該池塘已被證明未受激素類物質污染），在水族箱暫養并區分雌、雄個體。選取性成熟雌魚進行馴養（部分雌性食蚊魚已妊娠），持續2周使其適應生存環境，隨后將實驗魚隨機分配到小魚缸。每缸保持30尾魚，各個濃度暴露組分設2缸，每個濃度組保持60尾。實驗用水在陽光照射下放置2 d，水溫保持在25±2 ℃，2 d換水1次。光周期為14 h∶10 h（白天∶黑夜）。每日喂食2次，分別在上午9∶00和晚上9∶00，食用紅蟲購自廣州花鳥魚市場。實驗魚的使用及實驗過程“參照實驗動物使用的3R原則進行”［10］。

1.2 暴露藥物

1.3 實驗方法

1.3.1 骨骼形態學觀察 設置40 ng/L（低濃度組）、200 ng/L（中濃度組）、1 000 ng/L（高濃度組） MPA 3個實驗組和對照組（DMSO）。暴露實驗在10 L魚缸中進行， 每缸加入8 L處理后自來水， 采用靜水更新方式的實驗模式。持續暴露7 d、14 d、21 d 和28 d后，分別使用游標卡尺和電子天平測定食蚊魚體長（BL， mm）、體質量（BW， mg）并計算健康指數［CF（%）=BW/BL×100］。同時獲取不同暴露階段食蚊魚的骨骼組織進行染色，觀察并統計數據分析骨骼的形態變化。

使用Photoshop CS3圖像分析軟件測量臀鰭第3鰭條分節數，臀鰭第4、5、6鰭條長度，第14/ 15/16椎體脈棘長度的L值、P值、D值即第14/ 15/16椎體脈棘總長（14L/15L/16L）、第14/15/16椎體脈棘的投影長度（14P/15P/16P）、第14/15/16椎體脈棘尾部尖端到脊柱的高度（14D/15D/16D），并根據測量的指標計算P∶D、L∶D的比值。其數據以平均值±標準差的形式表示。實驗組和對照組之間的顯著性差異的檢驗使用方差分析或者協方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

1.3.2 目標基因mRNA表達觀察 分別取各組食蚊魚性腺、肝臟、臀鰭組織提取RNA，進行反轉錄，熒光定量。具體操作如下。1）引物設計 登陸NCBI網站，找到西部食蚊魚（Gambusia affinis）的VTGα cDNA、ARα cDNA的序列CYP19α中間片段序列［11］，利用Primer3軟件，由華大基因生物工程公司合成所需要的引物。相關基因擴增引物名稱及其序列見表1。2）RNA制備 將性腺和肝臟組織勻漿，臀鰭條則研磨成粉末，分別加入1 mL 的Isoplus RNA（RNAiso Plus）提取液（TakaRa）進行總RNA提取。RNA提取后進行基因組DNA的去除，并檢測RNA濃度及其完整性， 保證A260/A280的比值在1.8～2.0 （TakaRa）。3）RNA反轉錄成cDNA使用TakaRa Code: DRR037 PrimScriptTMRT reagents Kit （Perfect Real Tome） 產品。RT反應液配置如下：5×PrimeScript Buffer （2 μL）， PrimeScript PT Enzyme Mix I （0.5 μL）， Random 6 mers （100 μmol/L，0.5 μL）， Oligo dT Primer （50 μmol/L， 0.5 μL）， Total RNA （1 μL）， Rnase Free dH2O （5.5 μL）， 總共10 μL。反轉錄反應條件如下：37 ℃ 15 min （cDNA合成），85 ℃ 5s（酶失活）。4）實時熒光定量 使用TakaRa Code：DRR081A SYBR?Premix Ex TaqTMII （2×）10.0 μL， 正反向引物（10 μmol/L）各0.8 μL，ROX References Dye I （50×） or ROX References Dye II （50 ×） 0.4 μL， cDNA模板2.0 μL， H2O（滅菌） 6.0 μL，總共20.0 μL。按照兩步法PCR擴增標準程序進行RT-PCR反應。

表 1 目標基因擴增引物名稱及其序列Table 1 Name and sequence of the target gene amplified with primers

RT-PCR擴增結果數據的處理采用相對定量法，內參基因選用β-actin。通過標準曲線對對照樣品、待測樣品的目的基因及管家基因進行定量，然后根據計算公式求得相對值即為相對表達值。校正值=目的基因定量結果/管家基因定量結果；相對值=待測樣品的校正值/對照樣品的校正值。使用SPSS 19.0統計軟件對所得數據進行統計學分析，采用單因素方差分析（One way-ANOVA）法對數據進行差異性分析。用Excel 2013做柱形圖。設置P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MPA暴露后食蚊魚的BL、BW和CF變化

食蚊魚暴露在MPA初期，其食欲顯著下降，至7～14 d恢復到暴露前的喂食量，持續至28 d后活動行為恢復正常。暴露初期，200 ng/L組實驗魚死亡2尾、1 000 ng/L組死亡1尾，經解剖發現死亡個體均已經妊娠， 由此表明MPA暴露對妊娠食蚊魚造成一定影響。持續暴露28 d后各實驗組中均沒有觀察到體表出現明顯變化的個體， 不同濃度組食蚊魚的BL、BW和CF變化都不明顯（P＞0.05）。雖然在暴露初期食蚊魚的食欲下降，在此期間CF也發生一些改變，但經2周后食蚊魚的食欲恢復正常，本實驗只檢測28 d后的健康指數，而沒有觀察不同暴露時期食蚊魚的CF。

2.2 MPA暴露后食蚊魚骨骼的形態變化

經過28 d的MPA暴露后， 食蚊魚臀鰭的第3鰭條的分節數（FJ）并沒有出現明顯變化，但是臀鰭第4和第5鰭條長度變化明顯， 其中中濃度組（200 ng/L）第5臀鰭條長度發生顯著性增長（P＜0.01）； 高濃度組（1 000 ng/L）第4、5臀鰭條長度也發生顯著性增長（P＜0.01）。而第6臀鰭條長度均沒有發生明顯變化（P＞0.05）。

《衛風·伯兮》中提到，“焉得諼草，言樹之背。愿言思伯，便我心痗。”說的就是樹蔭之下生長的忘憂草，能夠消除我對你的相思之苦，但是我甘愿相思成病，只希望親愛的愛人能快些回來。

暴露MPA 28 d后，中、高濃度組食蚊魚第14椎體脈棘L值顯著增長（分別P＜0.01）， 其他則均無顯著性變化（圖1A）。中濃度組第15、16椎體脈棘P值顯著下降（分別P＜0.01），高濃度組第16椎體脈棘P值顯著下降（P＜0.05），其他均無明顯變化（圖1B）。中、高濃度組第14椎體脈棘D值發生顯著變化（分別P＜0.05和P＜0.01）， 其他均沒有發生顯著新變化（圖1C）。中、高濃度組第16椎體脈棘L∶D值顯著性下降（P＜0.01），其他均沒有發生顯著性變化（圖1D）。中、高濃度組第15（P＜0.05， P＜0.01）、16椎體脈棘（分別P＜0.01） P∶D值極顯著性下降， 其他均沒有發生顯著性變化（圖1E）。以上結果表明雌性食蚊魚臀鰭和椎體脈棘出現明顯的形態雄性化現象。

2.3 MPA暴露食蚊魚目標基因的表達水平

2.3.1 ARα基因 如表2所示，低濃度組（40 ng/L）MPA暴露對食蚊魚臀鰭組織ARα基因的表達持續21 d后影響不明顯，至28 d時則顯著抑制其表達（P＜0.05）； 中濃度組（200 ng/L）對ARα基因的表達起到促進作用，與對照組相比，暴露7～21 d均顯著提高ARα mRNA的表達量（P＜0.05），至28 d其影響才不明顯（P＞0.05）； 高濃度組（1 000 ng/L）與中濃度組相類似， 暴露7 d和14 d后， MPA對ARα的影響為促進作用（P＜0.05），隨后持續至21 d和28 d后，ARα mRNA的表達量有所回落，與對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。結果表明，低MPA對ARα表達為抑制作用，中、高濃度MPA對ARα表達促進作用，但是中濃度組（200 ng/L）對ARα mRNA的表達量上調更高。

A， B， C， D， E中橫標14、15、16分別代表第14、15、16椎體脈棘；與對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01圖 1 MPA暴露28 d后食蚊魚椎體脈棘L值、P值、D值、L： D值和P： D值的影響A， B， C， D， E: 14， 15 and 16 represented the 14th ， 15th and 16th hemal spine. The symbol*indicated significant difference compared with control group， symbol**indicated very significant differenceFigure 1 Effects of progesterone on the L， P， D， L： D and P： D values in the female G. affinis after exposure for 28 days

2.3.2 VTGα基因 如表2所示，不同濃度MPA對食蚊魚VTGα基因表達起到不同的作用，低濃度對VTGα mRNA的表達起到了促進作用， 與對照組比較其VTGα mRNA表達量最高達到15.9倍（P＜0.01）；中濃度組VTGα mRNA表達量不斷提升并在14 d開始趨于平緩；而在高濃度組中，VTGα mRNA的表達量卻被顯著抑制，mRNA的表達量僅為對照組的0.1倍左右（P＜0.01）。結果顯示，隨時間的持續mRNA表達量也隨著提升的關系。

2.3.3 CYP19α基因 如表2所示，MPA對食蚊魚CYP19α基因起正調控作用，低、中濃度組分別隨著時間的增加表達量逐漸提升，在中濃度組中CYP19α mRNA的表達量最高（P＜0.01）； 而在高濃度組中，CYP19α mRNA的表達量在7 d的時候達到最高值，隨后CYP19α mRNA的表達量逐漸降低，并在28 d，CYP19α mRNA的表達量和對照組無明顯差異（P＞0.05），整體呈趨于平緩的趨勢。

3 討論

3.1 MPA暴露對食蚊魚生長發育的影響

CF的變化能夠反映攝食、脂質沉積和蛋白質平衡［12］。用孕酮處理食蚊魚時顯示， 低濃度組和對照組之間BL和CF都沒有表現出明顯差異， 而高濃度組的BW和對照組相比時則顯著下降（P＜0.05）［13］。雌性食蚊魚經過不同濃度的MPA暴露28 d后， BW與對照組相比沒有明顯的變化； 其BW與CF雖略低于對照組， 但差異不明顯， 這表明中、高濃度MPA并未使食蚊魚健康狀況受到影響。但在實驗中觀察到妊娠食蚊魚死亡可能與肝臟損傷有關， 推測MPA暴露影響了食蚊魚肝臟脂類代謝， 由于雌性食蚊魚妊娠，幼體對母體營養需求對食蚊魚產生負荷， 從而影響肝臟激素代謝和解毒， 導致妊娠雌性食蚊魚的死亡。

3.2 MPA暴露對雌性食蚊魚骨骼形態發育的影響

食蚊魚臀鰭共有10根鰭條，每根鰭條又由許多的分節來構成，已有研究表明［14］，暴露在含有雄激素類物質的水環境中致食蚊魚第3臀鰭條分節數顯著增加，第4、5、6臀鰭條長度也顯著增長；高濃度孕酮暴露致食蚊魚臀鰭第3鰭條分節數顯著增加［13］，這表明食蚊魚骨骼出現明顯的形態雄性化特征。本實驗結果顯示，雌性食蚊魚第4、5臀鰭條的長度顯著增加，這也表明MPA暴露后致食蚊魚臀鰭發生形態雄性化的變化，MPA暴露對食蚊魚具有雄激素效應。將雌、雄性食蚊魚暴露在雄激素或者雌激素中都使其第14、15、16椎體脈棘發生形態變化［14］。雄性食蚊魚的椎體脈棘發育具有先后性，研究表明第16椎體的脈棘首先發育，緊隨其后的是第14和15椎體［15］。但范俊杰等［13］的暴露實驗結果顯示，第14椎體發育對雄激素活性物質比對第15、16的更敏感。在本實驗中，雌性食蚊魚暴露于MPA 28 d之后，僅第14椎體發生顯著性增長，但第15、16椎體骨骼增長則不明顯；MPA暴露對第14椎體脈棘的D值有顯著性增長，其結果與范俊杰等的結果相一致。本實驗中濃度MPA暴露致第15、16椎體脈棘P值顯著降低，高濃度組第16椎體脈棘P值也顯著性降低。P、D 和L的兩兩比值是研究內分泌干擾物（EDCs）效應的一項非常有價值的測量指標［15］。在本實驗中，第16椎體脈棘的L∶D值顯著性降低，第15、16椎體脈棘的P∶D值顯著性降低。可見，經過28 d MPA暴露以后，食蚊魚的第14、15、16椎體脈棘的發育都發生不同程度的變化，L變長以及P值的減小顯示骨骼變長并向中線移動，向前移動的椎體脈棘的長度是受雄激素類物質控制，這與雄激素、孕酮暴露食蚊魚產生的效應相似，因而表明MPA暴露出現雄激素效應。

雖然MPA暴露致使食蚊魚出現不同程度的形態雄性化效應，但是與強雄激素類比較，孕酮對食蚊魚的生長發育影響并不十分顯著，推測可能是暴露時間不長以及濃度設置較低對性成熟的雌魚暴露產生的效應結果。MPA為人工合成的孕激素，在進入體內以后可能會參與其他反應或被進一步修飾，從而顯示為弱雄激素效應。MPA暴露對食蚊魚骨骼發育產生影響，使雌性食蚊魚形態雄性化。

3.3 MPA暴露對食蚊魚目標基因表達的影響

MPA暴露誘導VTGα基因表達， 這可能與雌激素有關，孕激素在體內往往和雌激素一起發揮作用以改變體內激素水平。本實驗表明，隨著MPA暴露濃度的提高， VTGα mRNA的表達量沒有上升反而趨于平緩， 在高濃度組（1 000 ng/L）中VTGα mRNA的表達量則受到顯著抑制，這與Huang 等［16］的實驗結果相一致，他們將食蚊魚暴露在1 000 ng/L孕激素中，肝臟中的VTGα、VTGβ、VTGγ mRNA表達量都被顯著抑制，表明VTG mRNA的表達量與暴露劑量相關，推斷這可能與抗雌激素效應有關。AR為雄激素受體，其與雄激素結合才能發揮其作用。本實驗中，低濃度組MPA暴露，ARα mRNA的表達受到抑制，而在中、高濃度組ARα mRNA的表達量則被上調， 以200 ng/L組表達量最高，mRNA的表達量不呈劑量依賴關系。推測ARα表達被抑制可能和雌激素的抗雄激素效應有關，而暴露濃度的提升對ARα為正調控，可能是體內生成雄激素促進了基因表達，因為孕激素可以是雄激素的前體，當孕激素反應生成雄激素的時候，就可以促進ARα基因的表達。

本實驗食蚊魚暴露在不同濃度的MPA中，低、中濃度組CYP19α mRNA的表達量隨著時間的推移表達量逐漸上升；而高濃度組（1 000 ng/L）在7 d達到最高值隨后表達量逐漸降低，在28 d時CYP19α mRNA的表達量和對照組相近。高濃度組CYP19α mRNA表達量的降低可能是CYP19α蛋白催化睪酮（T）（或者T衍生物）生成雌二醇（E2）（或者E2衍生物）， 由于E2濃度過高而產生抑制作用。而低、中濃度組CYP19α mRNA的表達量并沒有被抑制， 這可能與暴露試劑濃度有關， 也有可能與其他機制相關。

MPA暴露對食蚊魚體內目標基因的影響是內在聯系的，通過對實驗結果的比較觀察到，不同濃度MPA暴露對食蚊魚目標基因的表達產生不同的影響。低濃度（40 ng/L）MPA和雌激素共同作用促使VTGα基因表達顯著上升，MPA可能在體內通過一系列的反應生成雄烯二酮（AED）和T及其衍生物，正向調節了CYP19α mRNA的表達，生成雌醇及E2同時促進VTGα基因表達，而雌激素水平的提高則對ARα產生抗雄激素作用因而抑制了其表達。中濃度（200 ng/L） MPA持續刺激CYP19α mRNA的表達，從而產生更多E2，使得體內的E2水平大大提高， 在反應效率相同的情況下，暴露濃度的提升使體內的T水平也提高，T通過血液循環進入臀鰭， 促進了臀鰭ARα基因的表達； 同時E2水平的提高則對VTGα基因的表達產生負反饋， 降低了VTGα mRNA的表達量， 但與對照組相比較依然是顯著性提高。而在高濃度（1 000 ng/L）組中，MPA進一步促進CYP19α的表達，產生大量E2， 不僅顯著性地抑制VTGα mRNA的表達， 也引起本身的負反饋機制。閆月明等［17］的研究表明， 高濃度17α-甲基睪酮會抑制CYP19α表達， 所以體內MPA水平的提高使得T、AED水平提高的同時也會抑制CYP19α表達。以上結果表明隨著暴露時間的增加CYP19α mRNA水平降低，而ARα的表達量也有所回落，可能是由于T或者其衍生物在體內參加其他途徑反應造成ARα的表達量下降。這些結果表明，高濃度MPA暴露將造成所有目標基因都處于負調控當中，繼續提升MPA濃度將對機體產生的毒性效應如何將有待作進一步研究。

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Androgenic Effects of Synthetic Progesterone （Medroxyprogesterone acetate） on Gambusia affinis

JIN Zi-yue， FANG Zhan-qiang
（Key Laboratory of Ecology and Environmental Sciences of Guangdong Higher Education，College of Life Science， South China Normal University， Guangzhou 510631， China）

Objective To investigate the androgen effects of synthetic progesterone （Medroxyprogesterone acetate， MPA） exposure on the female mosquitofish （Gambusia affinis）. Methods The mature female mosquito fish were randomly divided into four groups， with one control group and three experimental groups exposed with 40 ng/L， 200 ng/L and 1 000 ng/L MPA respectively. Parallel experimental groups were also established. After 28-day-long exposure， five indexes including the body length （BL），body weight （BW）， health index （CF）， the section number （FJ） of the 3rd anal fin， the length （FL） change of the 4rd， 5rd， 6rd anal fin， and the morphological changes in the 14， 15 and 16 vertebral ribs in mosquito fish were observed and measured. The mRNA expression levels of vitellogenin gene （VTGα）， cytochrome P450 gene （CYP19α） in livers， and androgen receptor gene （ARα） in anal were also determined after 7， 14， 21 and 28 days exposure. Results The BL， BW and CF of experimental groups exposed in concentrations of 200 ng/L and 1000 ng/L MPA for 28 d were not changed significantly （respectively，P＞0.05） when compared with those of the control group. The 3rd anal fin of FJ and the 6rd anal fin of FL were not changed significantly （P＞0.05）， however， the 4rd， 5rd of FL in experimental groups had been increased in varying degrees （P＜0.01）. When exposed in 200 ng/L and 1000 ng/L MPA， the L， D values of the 14th vertebral ribs， the P， P∶D value of the 15th vertebral ribs， and the P， L∶D， P∶D value of the 16th vertebral ribs in female G. affinis were appeared very significantly different （P＜0.05 or P＜0.01）， respectively. Centrum haemal spine elongation and with the spine nearly vertical were displayed significant changes in morphological masculinization. Compared with the control group， low concentration groups （40 ng/L MPA） VTGα， CYP19α genes expression were increased significantly （P＜0.01）， while ARα expression was inhibited （P＜0.05）； medium concentration groups （200 ng/L MPA） VTGα， CYP19α，ARα genes expression were increased significantly （P＜0.01）； high concentration groups （1 000 ng/L MPA） CYP19α， ARα genes expression were increased significantly （P＜0.01）， however the expression of VTGα was inhibition （P＜0.05）. Conclusion MPA exposure induced skeletal development morphological masculinizing effects in female mosquitofish， and the results of target gene expression level changes showed that the effects of androgen induced by MPA in mosquitofish， indicating that the MPA was a kind of androgen effect of progesterone.

Medroxyprogesterone（MPA）； Gambusia affinis； Masculinization； Cytochrome P450 gene （CYP19α）； Vitellogenin gene （VTGα）； Androgen receptor gene （ARα）； mRNA expression；Skeleton morphology

Q95-33

A

1674-5817（2016）01-0006-07

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.002

2015-08-24

廣東高校城市水環境生態治理與修復工程技術研究中心建設項目（2012gezxA004）

［作者介紹］ 金子越（1989-）， 男， 碩士， 研究方向: 水生生物學。E-mail: komsjk1990@163.com

方展強（1953-）， 男， 教授， 博士生導師， 研究方向: 水生生物學。E-mail: fangzhq@scnu.edu.cn