輻照與高壓蒸汽滅菌飼料對SD大鼠妊娠及胎仔發(fā)育的影響

趙康濤， 陳冠敏，2， 林 蔚， 陳 潤， 黃宗銹， 林 健，2（. 福建省人獸共患病研究重點實驗室， 福建省疾病預(yù)防控制中心， 福州 35000；2. 福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院教學(xué)基地， 福州 350004）

·經(jīng)驗交流·

輻照與高壓蒸汽滅菌飼料對SD大鼠妊娠及胎仔發(fā)育的影響

趙康濤1， 陳冠敏1，2， 林 蔚1， 陳 潤1， 黃宗銹1， 林 健1，2
（1. 福建省人獸共患病研究重點實驗室， 福建省疾病預(yù)防控制中心， 福州 350001；
2. 福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院教學(xué)基地， 福州 350004）

目的 了解不同滅菌處理飼料對SD大鼠妊娠及胎仔發(fā)育的影響。方法 離乳SD大鼠隨機分為輻照和高壓蒸汽滅菌飼料組，飼養(yǎng)2個月后按1∶1比例雌雄同籠交配，分別于0 d、7 d、12 d、16 d、20 d稱妊娠鼠體質(zhì)量，并于20 d時采血后處死妊娠鼠，解剖，取完整子宮稱重后取出胎仔， 對胎仔稱重， 量身長、尾長，觀察胎仔外觀、內(nèi)臟及骨骼發(fā)育； 雄性大鼠于試驗結(jié)束時稱體質(zhì)量，取睪丸及附睪稱重，計算臟器系數(shù)，測血清睪丸酮含量。結(jié)果 兩種飼料對妊娠鼠各階段體質(zhì)量無明顯影響（P＞0.05），仔鼠活胎率， 身長、尾長無差異（P＞0.05）， 骨骼及內(nèi)臟發(fā)育亦無明顯差異（P＞0.05）； 輻照飼料組交配成功率高于高壓飼料組（P＜0.05）， 但兩組雄鼠睪酮含量無明顯差別（P＞0.05）， 雄性大鼠睪丸及附睪系數(shù)亦無差異（P＞0.05）。結(jié)論 兩種不同滅菌處理飼料對妊娠大鼠及其胎仔發(fā)育影響無明顯差異，均無明顯致畸作用，但對親代大鼠早期性興奮影響可能有區(qū)別。

SD大鼠； 高壓滅菌飼料； 輻照滅菌飼料； 子代發(fā)育

隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展， 對實驗動物質(zhì)量的要求也不斷提高， 尤其是SPF級實驗動物的廣泛使用， 對相關(guān)的飼料、墊料， 飲水等也提出了更高的質(zhì)量要求。清潔級以上級別實驗動物飼料均需消毒滅菌后方可用于實驗動物飼喂。目前實驗動物飼料的消毒多采取高溫高壓滅菌法與60Co輻照滅菌法。對于兩種滅菌法的優(yōu)劣， 雖然有一些相關(guān)的文獻(xiàn)報道［1，2］， 但研究范圍及角度有限， 多集中于實驗動物生產(chǎn)繁殖性能和飼料利用效價方面。 本試驗采用兩種不同滅菌處理后的飼料分別飼喂離乳SD大鼠， 至大鼠性成熟交配、妊娠， 觀察其對母鼠和胎仔發(fā)育的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及飼養(yǎng)環(huán)境

SPF級離乳SD大鼠購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司［SCXK（滬）2012-0001］，體質(zhì)量45～55 g，雌性65只，雄性40只，飼養(yǎng)于SPF級動物實驗室［SYXK（閩）2012-0008］。

1.2 儀器和試劑

儀器: G&G電子天平（T1000）， 感量 0.01 g， 桂陸電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺（0～200 mm），BIO-RAD Model 680型酶標(biāo)儀。試劑: 茜素紅染料、甘油、甲醛、冰醋酸、苦味酸均購自國藥集團(tuán)， 為分析純； 大鼠雌激素（E）酶聯(lián)免疫分析試劑盒， 大鼠睪酮（T）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 鼠用生長繁殖飼料及滅菌方法

購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司［滬飼審（2014）04001］。高壓蒸汽滅菌方法，經(jīng)115 ℃、30 min高壓蒸汽滅菌，輻照滅菌方法: 經(jīng)25 kGy60Co輻照。

1.4 實驗方法

離乳SD大鼠檢疫間適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，進(jìn)入實驗室，隨機分為輻照飼料組（n=32）和高壓飼料組（n=33），苦味酸標(biāo)記，分別以相應(yīng)飼料飼養(yǎng)2個月后，按雌雄1∶1同籠交配，次日觀察陰栓，有陰栓脫落雌鼠為妊娠0 d，取出單籠飼養(yǎng)，并補充同組新雌鼠繼續(xù)交配，交配期間自由攝食飲水；飼料種類不變，各組雄鼠保持不變。分別于妊娠后0 d、7 d、12 d、16 d、20 d稱量妊娠鼠體質(zhì)量，并于20 d時采血并處死，解剖取完整子宮稱重后取出胎仔，并稱重，測量身長、尾長，同時觀察外觀生長發(fā)育情況；同窩仔鼠按稱重順序奇偶分兩部分，奇數(shù)部分浸泡固定液，固定一周后取出，進(jìn)行內(nèi)臟發(fā)育及畸形觀察并記錄，另一部分胎鼠剝?nèi)ネ馄?，去除?nèi)臟和脂肪后，浸入茜素紅染液中，經(jīng)甘油透明化處理后觀察，記錄第2、5胸骨發(fā)育及全身其他骨骼的發(fā)育及畸形情況。雄性大鼠交配結(jié)束后，稱體質(zhì)量（提前16 h禁食），采血后處死，解剖，取睪丸及附睪并稱重，計算臟器系數(shù)，血樣取血清測睪丸酮含量。

1.5 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 對親代妊娠率及雄鼠的影響

輻照組妊娠率率高于高壓組（P＜0.05）（表1）。

表 1 不同方法滅菌飼料對大鼠妊娠的影響

實驗結(jié)束時，兩組雄性大鼠（n=20）體質(zhì)量，睪丸、附睪重量及系數(shù)，性激素水平均無明顯差異（P＞0.05）（表2）。

由表3可見，無論高壓組還是輻照組，妊娠鼠體質(zhì)量均呈相同增長趨勢，且兩組間各階段體質(zhì)量無統(tǒng)計學(xué)差異。

由表4可見，兩組妊娠鼠間子宮連胎重、著床數(shù)及活胎數(shù)等均無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 對胎仔重量及形態(tài)發(fā)育的影響

胎仔體質(zhì)量、胎盤重、身長、尾長組間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（表5）。

各組胎仔發(fā)育畸形發(fā)生情況， 第2、5胸骨發(fā)育缺失發(fā)生情況， 囟門寬和長均無明顯差別（表6）。

表 2 不同飼料對成年雄性大鼠性器官發(fā)育及性激素的影響

表 3 不同飼料組妊娠鼠體質(zhì)量 g

表 4 不同飼料對大鼠妊娠鼠產(chǎn)仔影響

表 5 不同飼料對仔鼠發(fā)育的影響

3 討論

飼料的無菌處理是飼養(yǎng)高等級實驗動物的基礎(chǔ)和必要條件。60Co 輻射滅菌是利用60Co 產(chǎn)生的射線殺死微生物的一種冷滅菌方法， 能較好地保存飼料中的營養(yǎng)成分，但滅菌過程和滅菌效果不能自控。高壓蒸汽滅菌方法具有自身優(yōu)點，滅菌成本低廉、滅菌設(shè)備在動物實驗室配備，滅菌過程和滅菌效果可以自控。因此，飼料高壓蒸汽滅菌方法目前在各動物實驗室被大量采用。而針對高壓蒸汽滅菌飼料經(jīng)高溫消毒后，營養(yǎng)成分破壞較多，尤其是維生素含量下降大的問題，一般均采用增加營養(yǎng)成分投料量的方式來彌補這部分的損失［3］。

表 6 不同飼料對大鼠子代發(fā)育影響

有相關(guān)文獻(xiàn)報道［4，5］， 不同滅菌方法的飼料對動物的生長發(fā)育過程會產(chǎn)生不同的影響，但也有報道［6，7］，兩種飼料對大鼠的生長發(fā)育影響并無明顯差異。說明有必要對這兩種方法滅菌飼料對大鼠繁殖、發(fā)育的影響做進(jìn)一步研究。

作者使用不同方法滅菌后鼠生長繁殖顆粒飼料飼養(yǎng)大鼠，觀察妊娠及胎仔發(fā)育畸形等多方面情況，比較全面地探討了輻照顆粒料和高壓顆粒料對大鼠生殖的影響。從大鼠交配成功率看，輻照組大鼠交配成功率更高。兩組雄性大鼠睪酮水平、睪丸及附睪系數(shù)并無明顯差異。以往文獻(xiàn)［8］報道輻照飼料組妊娠鼠著床率及活胎數(shù)高于高壓飼料組，但本試驗中，著床數(shù)，活胎數(shù)等指標(biāo)均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，而通過對胎仔外形，器官、骨骼，囟門發(fā)育及第2、5胸骨缺失情況的觀察，各組仔鼠發(fā)育均無明顯差異，與前述結(jié)果表現(xiàn)一致，提示兩種飼料對大鼠胎仔發(fā)育影響無明顯差異。

［1］ 張大維， 邴國強， 甘振威， 等. 不同滅菌方法對實驗動物配合顆粒飼料營養(yǎng)成分的影響［J］. 飼料工業(yè)， 2012， 33（2）: 40-43.

［2］ 貴有軍， 侯巖巖， 史深， 等. 不同方法的滅菌飼料飼喂清潔級KM 小鼠的效價分析［J］. 地方病通報， 2010， 25（4）:41-43.

［3］ 任春磊， 楊國山， 閆傲霜.60Co-γ射線輻照技術(shù)在實驗動物飼料滅菌中的應(yīng)用［J］. 實驗動物科學(xué)， 2008， 5（4）:51-54.

［4］ 孫全文， 杜建華， 常寶.60Co 輻照日糧對KM小鼠繁育情況的影響［J］. 張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2003， 20（5）:30-31.

［5］ 周文江， 許蘭文， 顧兆江， 等.60Co 輻照飼料對KM 小鼠繁育情況的影響［J］. 上海實驗動物科學(xué)， 1998， 18（1）:33-35.

［6］ 張大維， 邴國強， 徐彩云， 等. 滅菌鼠全價顆粒飼料對大小鼠生長發(fā)育和繁殖性能的影響［J］， 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2010， 32（4）:437-439.

［7］ 施張奎， 余強， 盧立群， 等. 不同方法滅菌飼料對小鼠繁殖性能的影響［J］. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 16（10）:615-616.

［8］ 姚健， 胡櫻， 夏萍， 等. 三種處理飼料飼喂BALB/c小鼠的效價分析［J］. 上海實驗動物科學(xué)， 2005， 25（1）:47-48.

Q95-33 R-332

B

1674-5817（2016）01-0048-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.009

2015-07-14

福建省科技計劃重點項目（2013y0084）

趙康濤（1976-）， 男， 副主任技師， 研究方向: 實驗動物學(xué)、毒理學(xué)。E-mail: ktzhao@sohu.com

林 健， 主任技師。E-mail: 18786381@qq.com