C反應蛋白基因rs2808630、吸煙與非小細胞肺癌易感性的相關性

李玉濤， 王　一， 徐月娟， 張艷紅， 郭士成,4， 趙振宏, 李　強, 盧大儒,6, 金　力,6,王久存,6, 錢　成, 吳俊杰,*

1.復旦大學現代人類學教育部重點實驗室，上海　200433 2.東南大學第二人民醫院腫瘤內科，南京　210003 3.復旦大學校醫院，上海　200433 4.Department of Bioengineering, University of California at San Diego, CA 92093, USA 5.第二軍醫大學長海醫院呼吸內科，上海　200433 6.復旦大學(泰州)健康科學研究院，泰州　225300 7.復旦大學附屬中山醫院胸外科，上海　200032

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·論著·

C反應蛋白基因rs2808630、吸煙與非小細胞肺癌易感性的相關性

李玉濤1， 王一1， 徐月娟2， 張艷紅3， 郭士成1,4， 趙振宏1, 李強5, 盧大儒1,6, 金力1,6,王久存1,6, 錢成7*, 吳俊杰1,5*

1.復旦大學現代人類學教育部重點實驗室，上海200433 2.東南大學第二人民醫院腫瘤內科，南京210003 3.復旦大學校醫院，上海200433 4.Department of Bioengineering, University of California at San Diego, CA 92093, USA 5.第二軍醫大學長海醫院呼吸內科，上海200433 6.復旦大學(泰州)健康科學研究院，泰州225300 7.復旦大學附屬中山醫院胸外科，上海200032

目的： 探討C反應蛋白(CRP)基因rs2808630多態性與非小細胞肺癌(NSCLC)的相關性。方法： 根據連接酶連接反應原理，對上海及江蘇泰州地區974例NSCLC患者和1 005例健康人進行CRP基因rs2808630基因分型，分析該位點與NSCLC的相關性。結果： CRP基因rs2808630位點TC較TT患NSCLC風險增加(P=0.034)，但校正后不相關。吸煙人群中該位點攜帶TC 基因型者較攜帶 TT基因型者患NSCLC風險增加 [比值比(OR)=1.329，95% 可信區間(CI) 1.017～1.736，P=0.037]，攜帶TC基因型者患鱗癌的風險是攜帶TT基因型者的1.383倍(95% CI 1.023～1.870，P=0.035)；進一步分層分析發現，吸煙人群中攜帶TC基因型者患NSCLC的風險是攜帶TT基因型者的1.479倍(95% CI 1.058～2.067，P= 0.022)。 結論： CRP基因rs2808630 T>C可能與吸煙協同導致NSCLC，尤其是鱗癌的發生。

C反應蛋白；rs2808630位點；病例-對照研究；吸煙；非小細胞肺癌

肺癌是全球患病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，起病較為隱匿，大部分患者發現時已為晚期，且5年生存率低于20%[1-2]。吸煙是肺癌發生的危險因素，與肺癌患者預后相關[2-3]。肺癌分為小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)兩大類，其中NSCLC發病率占肺癌的85%～90%[2]。NSCLC主要分為腺癌、鱗癌兩種病理類型，其中鱗癌與吸煙密切相關[4]。

肺癌、肝癌、食管癌等多種癌癥的發生與炎癥反應密切相關[5-6]。炎癥微環境有利于誘導基因突變和表觀遺傳學特征的改變，促進細胞增殖、抗凋亡、促進癌細胞擴散[7-8]。C反應蛋白(Creactive protein，CRP)是一種敏感的非特異性炎癥標志物，最初從急性肺炎球菌性肺炎患者血漿中分離得到，因其對肺炎鏈球菌C多糖有高親合性，故命名為CRP。CRP屬于pentraxin(PTX)蛋白家族，參與機體防御，能識別外來病原體和宿主的受損細胞，并通過體液和細胞免疫將其清除。巢式病例對照研究[9]顯示，CRP水平升高與肺癌風險增加有關。在惡性腫瘤如肺癌、肝癌、大腸癌、食管癌等患者血清中CRP水平升高，且與預后較差相關[10-13]。CRP基因rs2808630的單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphisms，SNP)與非西班牙裔黑人血清中CRP水平降低相關[14]。歐洲人群的全基因組關聯分析顯示，rs2808630增加肺癌風險[15]。因此，探索rs2808630及吸煙與中國人群肺癌發生的相關性至關重要。

1　資料與方法

1.1一般資料2009年1月—11月在第二軍醫大學長海醫院、江蘇省泰州市第一人民醫院等醫院收集NSCLC患者的血液樣本。納入標準：經病理組織學檢查確診的新發NSCLC患者，無其他器官惡性腫瘤史，無年齡、性別限制。對照組按年齡、性別和地區進行頻數匹配，選擇同一時期相應地區或社區健康體檢者的血液樣本。本研究通過復旦大學生命科學學院倫理委員會審核批準；流行病學調查資料收集及血液樣本采集均獲得研究對象知情同意。1.2DNA提取及基因分型檢測采用Qiagen血液DNA提取試劑盒(德國Qiagen公司)，提取全血基因組DNA。基因分型檢測參照Zhang等[16]的方法進行。基因分型質量控制按照質量控制(QC)流程進行，包括>95%的基因分型檢出率、重復檢出的基因型、內部陽性對照樣品檢測。

1.3統計學處理采用SPSS 19.0軟件進行處理。人口統計變異值、人群吸煙狀況、癌癥家族史、對照組與病例組等位基因頻率差異及哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)檢驗采用χ2檢驗分析。分別對等位基因模型、基因型模型、顯性模型和隱性模型進行非條件Logistic回歸分析，計算比值比(odds ratios，OR)和95%可信區間(95%CI)，校正年齡、性別、吸煙狀況和癌癥家族史后進一步計算OR和95%CI。按年齡、性別、吸煙情況、家族史和肺癌組織學類型對各種模型分別進行分析。檢驗水準(α)為0.05。

2　結　果

2.1研究對象的一般情況納入NSCLC病例974例，其中第二軍醫大學長海醫院536例，復旦大學(泰州)健康科學研究院352例，上海其他醫院86例；對照組1 005例。結果(表1)顯示：病例組和對照組研究對象的年齡分布和性別構成差異無統計學意義；病例組吸煙者占70.03%，對照組吸煙者占49.95%，差異有統計學意義(P<0.001)；病例組中有癌癥家族史者占34.60%，對照組中有癌癥家族史者占14.63%，差異有統計學意義(P<0.001)。

2.2rs2808630位點多態性與NSCLC易感性相關性CRP基因rs2808630位點TT基因型1 395個、TC基因型528個、CC基因型56個，基因型檢出率為100%。CRP基因rs2808630 T/C位點基因型頻率符合HWE定律(P=0.457)，說明調查群體達到遺傳平衡，即本次群體調查數據可信。

表1　研究對象的一般情況

*部分患者的年齡和吸煙情況缺失，故未能納入統計

結果(表2)顯示：rs2808630位點等位基因T和C頻率在病例組中分別是82.9%和17.1%，在對照組中分別為84.7%和15.3%，兩組間等位基因頻率差異無統計學意義。TC基因型個體較TT基因型個體患NSCLC的風險明顯增加(P=0.034)，但經性別、年齡、吸煙情況和癌癥家族史校正后兩者差異無統計學意義(P=0.082)。顯性模型中，TC+CC基因型個體患NSCLC的風險較野生純合TT基因型攜帶者增加，但差異無統計學意義(校正后P=0.095)。隱性模型中，CC基因型個體與TT+TC基因型個體患NSCLC的風險差異無統計學意義(校正后P=0.976)。上述結果說明，rs2808630位點T>C突變與NSCLC患病風險關系不明顯。2.3rs2808630位點多態性與NSCLC易感性的分層分析校正后分層分析顯示，等位基因T>C突變吸煙者患NSCLC風險增加(P=0.036)，且鱗癌風險也增加(P=0.039，表3)。基因型模型中，與TT基因型吸煙者相比，TC基因型吸煙者患NSCLC的風險增加1.329倍(OR=1.329，95%CI 1.017～1.736，P= 0.037)，且攜帶TC基因型者患鱗癌風險增加1.383倍(OR=1.383，95%CI 1.023～1.870，P= 0.035)；攜帶CC基因型者與攜帶野生型TT基因型者的各因素差異均無統計學意義，表明TC是rs2808630位點的NSCLC風險基因型(表4)。顯性模型中，TC+CC基因型吸煙者較TT基因型吸煙者患NSCLC風險顯著升高1.335倍(P=0.030)，且攜帶TC+CC基因型者鱗癌風險是攜帶TT基因型者的1.381倍(P=0.030，表5)。隱性模型中未見陽性結果(表6)。

表2　CRP基因rs2808630多態性與NSCLC易感性相關性分析

a校正性別、年齡、吸煙情況和癌癥家族史

進一步分層分析，吸煙者等位基因T>C的突變使患鱗癌風險顯著上升(P=0.010)，TC基因型吸煙者患鱗癌風險是TT基因型吸煙者的1.479倍(OR=1.479，95%CI 1.058～2.067，P=0.022；表7)。

表3　等位基因模型中CRP基因 rs2808630多態性與NSCLC易感性的相關性

a校正性別、年齡、吸煙情況和癌癥家族史中其他3種. ADC：腺癌；SCC：鱗癌

表4　基因型模型中CRP基因 rs2808630多態性與NSCLC易感性的相關性

a校正性別、年齡、吸煙狀況和癌癥家族史中其他3種. ADC：腺癌；SCC：鱗癌

表5　顯性模型中CRP 基因rs2808630多態性與NSCLC易感性的相關性

a校正性別、年齡、吸煙情況和癌癥家族史中其他3種. ADC：腺癌；SCC：鱗癌

表6　隱性模型中CRP 基因rs2808630多態性與NSCLC易感性的相關性

a校正性別、年齡、吸煙情況和癌癥家族史中其他3種. ADC：腺癌；SCC：鱗癌

表7　吸煙分層各模型中CRP基因 rs2808630多態性與鱗癌易感性的相關性

a校正性別、年齡和癌癥家族史

3　討　論

CRP能抑制MCA-38小鼠結腸腺癌細胞上皮間充質轉化[17]；人頭頸部鱗癌細胞系BHY、PCI 1和PCI 13等細胞系分泌的CRP能降低髓樣樹突狀細胞的遷移能力[18]；膠質母細胞瘤細胞通過分泌白細胞介素-6(IL-6)誘導肝細胞產生CRP，后者可促進小膠質細胞釋放IL-1β，進而促進腫瘤血管生成[19]。因此認為，CRP參與癌癥的發生發展。

小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型中，香煙煙霧提取物能促進炎癥因子釋放[20]。吸煙可導致人肺部炎癥和氧化應激，增加COPD風險[21]。CRP、纖維蛋白原和白細胞水平的同時上升與COPD 急性加重風險增加相關[22]。COPD患者氣道出現過度炎癥及基質破壞，一些蛋白家族如解毒酶、蛋白酶、抗蛋白酶和細胞因子的SNP被認為參與COPD和肺癌的發生[23]。CRP基因rs2808630位點位于3′非翻譯區(3′untranslated region，3′UTR)遠端，處于非進化保守區域[14]。中國人群中，rs2808630與rs1205強連鎖(D’=1.0)，而rs1205 CC+CT 與COPD風險增加相關[24]。結果提示，CRP rs2808630可能在中國人群中參與COPD、吸煙相關腫瘤的發生。

陜西省[25]、湖北省[26]人群的病例-對照研究中，CRP T>C突變與肺癌的患病風險無顯著相關性，但這些研究中樣本量較小，且未考慮該位點在不同致病因素(如吸煙等)暴露下與肺癌易感性的關系，結果可能存在偏倚。本研究擴大樣本量，通過吸煙、家族史、癌癥類型等分層分析，發現rs2808630位點TC基因型在吸煙史者中患NSCLC的風險增加，TC基因型攜帶者患鱗癌風險也明顯增加；進一步分層分析顯示，攜帶TC基因型的吸煙者更易患鱗癌。此位點突變可能通過影響血清CRP蛋白水平[14]，并與吸煙共同導致氣道炎癥如COPD等[20-22]的發生，最終導致肺癌尤其是鱗癌[4]的發生。

綜上所述，CRP基因rs2808630位點TC基因型與中國人群吸煙者NSCLC發生風險升高有關，而且，攜帶該基因型的吸煙者罹患鱗癌的風險更顯著，提示該位點與吸煙協同參與肺癌尤其是鱗癌的發生發展，但機制有待進一步研究。

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[本文編輯]姬靜芳

C-reactive protein rs2808630 T>C in smokers increases non-small cell lung cancer susceptibility

LI Yu-tao1, WANG Yi1, XU Yue-juan2, ZHANG Yan-hong3, GUO Shi-cheng1,4, ZHAO Zhen-hong1, LI Qiang5, LU Da-ru1,6, JIN Li1,6, WANG Jiu-cun1,6, QIAN Cheng7*, WU Jun-jie1,5*

1. Ministry of Education Key Laboratory of Contemporary Anthropology, Fudan University, Shanghai 200433, China 2. Department of Oncology, The Second People’s Hospital of Nanjing, Southeast University, Nanjing 210003, Jiangsu, China 3. Hospital of Fudan University, Shanghai 200433, China 4. Department of Bioengineering, University of California at San Diego, CA 92093, USA 5. Department of Respiratory Medicine, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China 6. Fudan Institute of Health Sciences, Taizhou 225300, Jiangsu, China 7. Department of Thoracic Surgery, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China

Objective： To explore the association between C reactive protein (CRP) rs2808630 and non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods： CRP rs2808630 Genotyping of 974 NSCLC patients and 1 005 healthy controls from Shanghai and Taizhou of Jiangsu Province based on double ligation and multiplex fluorescence PCR. The effect of rs2808630 on NSCLC susceptibility was analyzed. Results： Compared with TT genotype, rs2808630 TC genotype significantly increased NSCLC risk (P=0.034), but this association became insignificant after adjusting with age, gender, smoking status, and family history. However, in the subgroup of smokers, TC genotype was significantly associated with increased NSCLC risk after adjustment (OR=1.329, 95% CI 1.017-1.736,P=0.037). In addition, TC genotype exhibited a significantly elevated risk of squamous cell carcinoma (OR=1.383, 95% CI 1.023-1.870,P=0.035). Further stratified analysis revealed that TC genotype posed a much higher risk of squamous cell carcinoma among smokers (OR=1.479, 95% CI 1.058-2.067,P=0.022). Conclusions： The interaction between rs2808630 T>C and smoking behavior might play an important role in leading to NSCLC especially squamous cell carcinoma.

C-reactive protein; rs2808630; case-control study; smoking; non-small cell lung cancer

2015-12-31[接受日期]2016-03-28

國家自然科學基金(81372236)，國家科技支撐計劃重點項目(2011BAI09B00)，上海博士后科學基金(12R21411500)，上海市科學技術委員會科研計劃項目(12nm0500900)，上海國際合作基金項目(14430712002)，復旦大學高端計算中心支持項目. Supported by National Natural Science Foundation of China (81372236), Key Projects in the National Science & Technology Pillar Program (2011BAI09B00), Shanghai Postdoctoral Science Foundation (12R21411500), Shanghai Science and Technology Research Program (12nm0500900), Shanghai Foundation for International Cooperation (14430712002) and Fudan University High-End Computing Center Fund.

李玉濤，碩士. E-mail:18721714989@163.com

Corresponding authors). Tel: 021-64041990, E-mail: qian.cheng@zs-hospital.sh.cn; Tel: 021-31162477, E-mail: wjjxcc@126.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20151059

R 734.2

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