血液檢測HBsAg酶聯免疫吸附試驗拖帶現象分析

阮　忠，張加成

(湖北省孝感市中心血站　432000)

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·經驗交流·

血液檢測HBsAg酶聯免疫吸附試驗拖帶現象分析

阮忠，張加成

(湖北省孝感市中心血站432000)

目的通過對使用永久性鋼針在酶免檢測中出現陽性拖帶現象進行分析，以尋找解決拖帶現象的辦法。方法采用同一份標本和相同試劑進行手工反復檢測比較，分析酶免陽性標本拖帶污染對其他標本結果的影響。結果對Metis 200-8全自動血庫系統使用永久性鋼針時陽性標本產生拖帶污染的后續3個標本，經重新檢測，結果均為陰性，證實為拖帶現象所致。結論永久性鋼針在檢測過程中對其他標本會帶來不同程度的拖帶污染，可以通過對同一份標本進行對比檢測，以保證結果的可靠性。

永久性鋼針；拖帶污染；酶聯免疫吸附試驗

采供血機構是一個特殊行業，具有獨特的工作環境及工作模式。現在很多血站檢驗科在血液檢測過程中，使用一管血樣進行酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、血型、生化檢測，這在一定程度上減輕了操作人員的工作強度和降低了一定成本[1]，也避免了手工加樣而帶來的人為誤差，使檢測結果更加準確，更有可比性。采用全自動加樣儀進行分樣，當遇到滴度高的陽性標本時，永久性鋼針可造成同時用該陽性標本加樣針后幾個標本出現假陽性[2]，本文對實際工作中遇到的這種情況進行分析，現報道如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑儀器為奧斯邦酶免檢測系統STAR/FAME、愛康公司Metis200-8全自動血庫系統、東芝公司R40生化儀。試劑盒采用為國產ELISA診斷試劑。

1.2標本檢測流程用同一標本進行了分樣，先進行ELISA檢測分樣，再生化檢測，最后進行了血型檢測。

1.3方法根據試劑盒說明書在STAR/FAME、Metis200-8全自動血庫系統的儀器上編制各項試驗的工作程序。加樣的流程是第一步先用奧斯邦STAR加樣，FAME進行后處理、孵育、洗板、讀板；第二步，東芝R40生化儀再次進行分樣；第三步最后為Metis200-8全自動血庫系統進行分樣檢測血型[3-4]。加樣方法參照文獻[3]。

2　結　　果

分樣假陽性拖帶標本的確定，在檢測過程中FAME吐板[乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]，試驗中斷，重新再次進行分樣試驗(原標本已經通過了酶免分樣、生化分樣、血型分樣)，檢測完畢后出現F2、F3、F4、F5、F6孔陽性，OD值逐漸降低，分別為2.768、1.321、0.287、0.148、0.119。用同源血辨標本和同源核酸標本進行了復試。見表1。

表1　　拖帶陽性檢測結果

注：-表示檢測結果為陰性。

3　討　　論

目前，我國大多數血站都使用永久性鋼針設備對血液標本進行檢測，加樣系統采用的是非一次性的Teflon涂層鋼針，這些都容易造成標本攜帶污染[4-5]，但也極大提高了檢測效率，避了手工加樣的人為誤差，提高了血液檢測質量。永久性鋼針對標本的拖帶污染問題需引起關注。陽性拖帶現象的產生主要是由于鋼針處理強陽性標本后，不易被沖洗干凈，附著在針的內壁上，接著吸取下一個標本時發生污染，并且隨著鋼針被重復使用次數的增加，其內壁可能吸附蛋白質或脂質等污物，陽性拖帶現象會更加嚴重[6]。同一加樣針會使其后的多個標本出現不同程度的污染，引起假陽性結果。如果將假陽性的標本誤判為陽性將造成血液的浪費，同時也會給獻血者帶來心理負擔，因此設法避免該現象的發生成為大家關心的問題[7]。

從首次檢測結果來看，F2孔位標本為強陽性，F3、F4、F5、F6均為陽性，OD值逐漸降低，復試這5份標本，結果同首次一樣，但是與此同源的血辨標本結果為F2(樣品)強陽性，F3、F4、F5、F6(樣品)均為陰性，再次復試，筆者用同源核酸標本進行再次檢測，結果為F2(樣品)強陽性，F3、F4、F5、F6(樣品)均為陽性，另外M-208加樣順序為F1～F6，F1為陽性對照，F2為強陽性，F3～F6 OD值依次降低。可以確定，F3～F6標本陽性結果系鋼針拖帶所致。在檢測過程中，設備會在每一次加樣后對鋼針進行沖洗，通常可以避免標本加樣過程中的拖帶污染，但是對于高濃度抗原或抗體標本，拖帶污染還是不能完全控制，找到造成陽性拖帶的強陽性標本和不同陽性標本的區別方法，不僅能夠有效地減少再檢次數，節約試劑，還能夠做能迅速判斷拖帶現象并減少因拖帶導致的誤檢[8]。因此，在以后的檢測中，應該人為地減少這種拖帶現象的發生。筆者分析產生拖帶現象的主要原因有：參數設置不當,儀器維護保養不良和標本原因[9]。

筆者采取以下對應措施：(1)在條件允許情況下，盡量使用一次性加樣尖，或者加大沖針的水量和延長沖針時間。(2)血站可以在采標本的同時多加一個血樣留存，以便儀器出現故障之后的復查，這樣就能避免鋼針拖帶所致的污染。還需要找辮子血樣來做平行雙孔再檢，因為試管血樣已被污染，失去檢測意義，用血辮血樣再檢，不能輕易判定為假陽性，否則使陽性血流入臨床，造成嚴重后果[10]。當然考慮設備所致的污染同時，還應該加強自身建設，提高專業知識和檢驗技能，在檢測過程中提高警惕，減少不必要的故障，從而使檢測結果安全、準確、及時。

[1]王永勝．關于全自動酶聯免疫分析儀加樣攜帶污染的探討[J]．檢驗醫學與臨床，2011，8(16)：2029．

[2]朱金平，方麗婉，張莉．全自動酶標加樣儀的攜帶污染分析[J]．中國輸血雜志，2015，28(8)：914-915．

[3]陳新，許建軍．Microlab STAR液體處理工作站攜帶污染分析與對策[J]．中國實用醫藥，2014，9(32)：272-273．

[4]潘志勇．ELISA檢測中全自動加樣引起拖帶假陽性現象的對策分析[J]．中國實用醫藥，2011，6(27)：147．

[5]朱美芹，王莉莉．全自動酶聯免疫檢測儀與手工酶聯免疫檢測的比對評價[J]．檢驗醫學與臨床，2014，11(1)：21-22．

[6]朱安友，王鳳超，楊萍，等．全自動酶免分析儀加樣中拖帶陽性的解決方法探討[J]．蚌埠醫學院學報，2010，35(8)：817-819．

[7]修淑麗，李燕，吳碩，等．陽性拖帶現象產生的原因和解決方法[J]．中國輸血雜志，2006，19(3)：218-219．

[8]王宏．全自動加樣器陽性拖帶現象的分析[J]．中國實用醫藥，2014，9(7)：257-258．

[9]王林，張國平，韓惠云，等．全自動加樣系統出現強陽性標本拖帶現象分析[J]．當代醫學，2008，14(20)：47．

[10]趙旭勇，張寧寧，王棚，等．HBsAg檢測中強陽性拖帶污染的分析[J]．內蒙古中醫藥，2009，28(23)：90．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.059

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