HBsAg陽性產(chǎn)婦血清HBV-DNA水平與新生兒HBV感染的關(guān)系*

鮑麗雅, 朱　雙, 謝　淵

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 肝炎實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽　550004; 2.貴州省習(xí)水縣中醫(yī)院， 貴州 習(xí)水　564600; 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽　550001)

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HBsAg陽性產(chǎn)婦血清HBV-DNA水平與新生兒HBV感染的關(guān)系*

鮑麗雅1, 朱雙2, 謝淵3**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 肝炎實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽550004; 2.貴州省習(xí)水縣中醫(yī)院， 貴州 習(xí)水564600; 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽550001)

目的： 探討乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)陽性產(chǎn)婦血清乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)水平與新生兒乙型肝炎病毒(HBV)感染的關(guān)系。方法： 采集67例HBsAg陽性產(chǎn)婦分娩前的外周靜脈血及其分娩的67例新生兒臍血，用時間分辨免疫熒光法檢測乙肝5項(xiàng)指標(biāo)，實(shí)時熒光定量PCR法檢測產(chǎn)婦血清HBV-DNA含量，記錄e抗原陽性組和e抗原陰性組HBsAg陽性的產(chǎn)婦例數(shù)及臍血陽性的新生兒數(shù)，計(jì)算HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率；記錄HBV-DNA低水平組(拷貝數(shù)<106IU/L)、HBV-DNA中水平組(拷貝數(shù)為106～108IU/L)和HBV-DNA高水平組(拷貝數(shù)≥109IU/L)中HBsAg陽性的產(chǎn)婦例數(shù)和臍血陽性的新生兒數(shù)，比較HBV-DNA高、中、低水平組中的母嬰HBV傳播率。結(jié)果： 67例HBsAg陽性產(chǎn)婦的新生兒臍血中HBsAg陽性24例，母嬰傳播率為35.82%(24/67)， e抗原陽性組HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率(54.29%)高于e抗原陰性組產(chǎn)婦(15.639%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，χ2=10.87)；不同水平HBV-DNA拷貝數(shù)HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率從高到低依次為高水平組、中水平組及低水平組，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論： 產(chǎn)婦感染HBV可能引起母嬰垂直傳播，e抗原陽性及血清HBV-DNA含量高的產(chǎn)婦母嬰HBV傳播率高。

肝炎病毒，乙型； 肝炎表面抗原,乙型； 肝炎e抗原,乙型； 母嬰傳播； 產(chǎn)婦； 新生兒； 乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸

我國是乙型肝炎病毒(hepatitis b virus, HBV)感染的高發(fā)區(qū)，乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)攜帶率高達(dá)15%，母嬰傳播是HBV傳播的重要途徑之一[1]。我國每年約有80萬的乙肝患兒出生，這部分患兒可能會發(fā)展為慢性乙肝患者，最后發(fā)展為肝硬化或肝癌，嚴(yán)重影響患兒的身心健康，也給患兒家庭帶來精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。本文通過對HBsAg陽性產(chǎn)婦血清及其新生兒臍血進(jìn)行HBV血清標(biāo)志物和乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)進(jìn)行定量分析，報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

在知情同意的原則下，采集2014年1月～12月在產(chǎn)科分娩的HBsAg陽性產(chǎn)婦分娩前24 h內(nèi)的外周靜脈血及分娩的新生兒臍血各67例，產(chǎn)婦平均(27.4±5.6)歲，平均孕周(38.7±2.1)周。HBsAg、乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)以及乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)試劑盒購自廣州達(dá)瑞抗體工程技術(shù)有限公司，乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)定量檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。

1.2方法

1.2.1乙肝5項(xiàng)指標(biāo)檢測采用時間分辨免疫熒光法，使用PerinElmer公司的全自動AutoDELFIA1235型時間分辨熒光檢測儀檢測乙型肝炎血清學(xué)5項(xiàng)指標(biāo)：HBsAg、HBsAb、 HBeAg、HBeAb及HBcAb，按說明書進(jìn)行操作并判斷結(jié)果。

1.2.2HBV-DNA檢測采用熒光定量PCR法，常規(guī)法提取血清DNA，在ABI Prism 7500型實(shí)時熒光定量 PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增和結(jié)果分析，反應(yīng)條件為93 ℃ 2 min， 93 ℃ 45 s、 55 ℃ 1 min，共10次循環(huán)；然后再93 ℃ 30 s 、 55 ℃ 45 s循環(huán)30次；采用儀器自帶軟件計(jì)算并判斷結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo)

記錄e抗原陽性組[血清中HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb (+)/(-)]和e抗原陰性組[(HBsAg(+)、HBeAb(+)/(-)、HBcAb (+)]的HBsAg陽性產(chǎn)婦例數(shù)及臍血陽性的新生兒數(shù)，計(jì)算HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰傳播率，比較e抗原陽性組和e抗原陰性組的母嬰HBV傳播率；記錄HBsAg陽性產(chǎn)婦HBV-DNA低水平組(拷貝數(shù)<106IU/L)、HBV-DNA中水平組(拷貝數(shù)為106～108IU/L)和HBV-DNA高水平組(拷貝數(shù)≥109IU/L)的例數(shù)及臍血陽性的新生兒數(shù)，比較3組的母嬰HBV傳播率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件分析，計(jì)數(shù)資料用百分比或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率

67例HBsAg陽性產(chǎn)婦的新生兒臍血HBsAg陽性24例，母嬰傳播率為35.82%(24/67)， e抗原陽性組HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率高于e抗原陰性組產(chǎn)婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，χ2=10.87)；見表1。

2.2不同水平HBV-DNA拷貝數(shù)HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率

不同水平HBV-DNA拷貝數(shù)HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率從高到低依次為高水平組、中水平組及低水平組，兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見表2。

表1　HBsAg (+)產(chǎn)婦e抗原陽性組和e抗原陰性組母嬰HBV傳播率比較

(1)e抗原陽性組比較，P<0.01

表2　HBV-DNA高、中、低水平組的母嬰HBV傳播率比較

(1)與HBV-DNA低水平組比較，P<0.05；(2)與HBV-DNA中水平組比較，P<0.05

3　討論

HBV病毒是專一的嗜肝病毒，由其引起的乙肝是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，與肝硬化、肝癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[3]。乙型肝炎主要通過血液、母嬰垂直傳播和性傳播，其中母嬰垂直傳播占70%以上[4]。HBV病毒在母嬰之間的傳播主要有胎盤感染，分娩時胎兒接觸母親血液和羊水感染及產(chǎn)后通過母嬰親密接觸感染。宮內(nèi)感染是HBV病毒母嬰之間傳播的主要途徑， HBV是否發(fā)生母嬰傳播取決于產(chǎn)婦感染HBV病毒的狀態(tài)[5-7 ]。產(chǎn)婦外周血清中抗-HBc可于妊娠21周后經(jīng)胎盤主動運(yùn)轉(zhuǎn)至胎兒， 8月齡以下的嬰兒出現(xiàn)單抗-HBc陽性，不能認(rèn)為是HBV感染[8]。自1971年KEY 等[9]首次報(bào)道臍血中檢出HBsAg以來，HBsAg一直作為診斷HBV病毒垂直感染的指標(biāo)。血清HBeAg陽性是HBV感染慢性化和預(yù)后不良的標(biāo)志，HBeAg 作為一種小分子水溶性多肽，它比 HBsAg 更容易通過胎盤屏障[10]；此外，HBeAg 的存在代表 HBV 病毒復(fù)制增強(qiáng)，HBV-DNA拷貝數(shù)高、傳染性強(qiáng)、胎兒感染幾率高，并且結(jié)合狀態(tài)的 HBeAg 還可通過胎盤上的IgG受體轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入胎兒血液，干擾胎兒免疫細(xì)胞識別和殺傷病毒，影響特異性抗體的產(chǎn)生，從而無法清除母體的 HBV 病毒，導(dǎo)致胎兒的HBV慢性攜帶狀態(tài)[11]。本文以臍血檢出HBsAg為垂直感染指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)67例HBsAg(+)產(chǎn)婦所生新生兒臍血HBsAg(+)24例，母嬰HBV傳播率為35.82%(24/67)， e抗原陽性組的母嬰HBV傳播率高于e抗原陰性組(P<0.01)，驗(yàn)證了HBeAg 陽性是母嬰垂直傳播的主要危險因素。

HBV-DNA 檢測主要是用來判斷人體內(nèi)存在HBV病毒的多少和傳染程度，是衡量病毒復(fù)制和傳染性的最可靠的指標(biāo)[12-13]。臨床上一般以HBV-DNA含量≥106IU/L作為陽性統(tǒng)計(jì)結(jié)果，如果檢測值大于該值，提示有HBV病毒復(fù)制和有傳染性，HBV-DNA越高表示病毒復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。有研究表明, HBV母嬰傳播率隨產(chǎn)婦血清HBV-DNA測定值增高而上升[14]。本研究顯示，不同水平HBV-DNA拷貝數(shù)HBsAg陽性產(chǎn)婦的母嬰HBV傳播率從高到低依次為高水平組、中水平組及低水平組，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；表明胎兒垂直感染率隨產(chǎn)婦血中HBV-DNA含量增高而呈上升的趨勢，產(chǎn)婦血中HBV-DNA含量高低是母嬰傳播的重要因素。

綜上，HBV母嬰垂直傳播率極高，對育齡婦女孕前常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)HBV感染者，應(yīng)在妊娠期內(nèi)進(jìn)行HBV血清學(xué)指標(biāo)兩對半和HBV-DNA定量測定，監(jiān)測與評估母嬰傳播風(fēng)險。

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(2016-04-25收稿，2016-07-31修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 趙毅

Correlation between HBsAg Positive Mother's Body HBV-DNA Level and Newborn HBV Infection

BAO Liya1, ZHU Shuang2, XIE Yuan3

(1.LaboratoryofInfectiousDiseases,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.XishuiCountyHospitalofTCM,Xishui564600,Guizhou,China; 3.MolecularBiologyLaboratory,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To investigate the relationship between Hepatitis B virus surface antigen positive mothers's HBV-DNA content level and HBV infection in Newborn. Methods: Maternal venous blood was collected 24 hours before delivery, and neonatal umbilical cord blood was collected under sterile condition at the time of delivery. Then, immunofluorescence method was adopted to detect five indexes of hepatitis B virus by time differences; real-time fluorescence quantitative PCR method was used to detect the content of serum HBV-DNA. Recording number of puerpera and umbilical cord blood newborn of HBeAg+ group and HBeAg- group, calculating maternal infectious rate of HBV in HBeAg+ mothers; recording number of puerpera and umbilical cord blood newborn of HBeAg+ group in HBV-DNA low-level group, HBV-DNA medium level group and HBV-DNA high level group in order to compare maternal HBV transmission rate in three groups. Results: 67 HBsAg positive mothers, 24 cases of HBsAg positive in newborns, the rate of maternal transmission is 35.82%. HBsAg positive puerpera transmission rate(54.29%)is higher than HBsAg negative puerpera(15.639%), difference is statistically significant(P<0.01，χ2=10.87); HBsAg positive puerpera transmission rate in various levels of HBV-DNA copy numbers from high to low is high level group, medium level group and low level group, comparison of any two groups are statistically significant(P<0.05). Conclusions: Maternal HBV infection can cause maternal vertical transmission, HBsAg positive and high serum HBV-DNA content maternal HBV transmission rate is high.

hepatitis B virus; hepatitis B surface antigen; hepatitis B e antigen; maternal and infant transmission; maternal; newborn; hepatitis B virus DNA

貴州省2011協(xié)同創(chuàng)新中心支助項(xiàng)目[黔教合協(xié)同創(chuàng)新[(2014)06]

E-mail:xieyuan1974@163.com

R512.62

A

1000-2707(2016)09-1061-03

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.09.016

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網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-09-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160913.2240.020.html