羊肚菌菌絲體富硒條件優化及其硒多糖抗氧化活性研究

冮潔，麥海美，解彬，韓琳，冀春陽，曹蕾

(大連民族大學 生命科學學院， 遼寧 大連，116600)

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羊肚菌菌絲體富硒條件優化及其硒多糖抗氧化活性研究

冮潔*，麥海美，解彬，韓琳，冀春陽，曹蕾

(大連民族大學 生命科學學院， 遼寧 大連，116600)

對羊肚菌菌絲體液體深層發酵富硒條件進行優化，考察培養基中硒濃度、溫度、裝液量和pH值對富硒率的影響。采用Fenton 法、鄰苯三酚自氧化法和DPPH(1，1-二苯基-2-苦基肼)還原法對羊肚菌菌絲體多糖的體外抗氧化活性進行了研究。羊肚菌菌絲體富硒的適宜培養條件為：亞硒酸鈉質量濃度為10 mg/L，溫度25 ℃，裝液量100 mL/250 mL，初始pH值7。在此條件下，富硒率最大達9.10%。羊肚菌菌絲體多糖和羊肚菌菌絲體硒多糖清除羥自由基(·OH)IC50分別為：0.62 mg/mL和0.42 mg/mL；清除超氧陰離子(O2-·)IC50分別為：0.85 mg/mL和0.59 mg/mL；清除DPPH自由基IC50分別為：0.66 mg/mL和0.49 mg/mL。羊肚菌菌絲體多糖具有較強的體外抗氧化活性，且隨著多糖濃度的增大其抗氧化活性逐漸增強，羊肚菌菌絲體硒多糖抗氧化作用更強。

羊肚菌；菌絲體多糖；富硒率；抗氧化作用

羊肚菌(Morchellaesculenta)，隸屬子囊菌門(Ascomycota)、盤菌綱(Pezizomycetes)、盤菌目(Pezizales)、羊肚菌科(Morchellaceae)，是一種名貴野生食藥用真菌[1-2]。羊肚菌中重要的功效成分是其多糖。羊肚菌多糖對小鼠的肝臟損傷有明顯保護作用[3]；能夠顯著提高人皮膚成纖維細胞的增殖活力，促進膠原蛋白的合成，延緩細胞衰老[4]；具有提高小鼠腦SOD的活性、減少脂褐質的沉積等功效[5]；對胃潰瘍[6]、胃黏膜[7]、輻射危害[8]具有保護作用；能顯著抑制S-180腫瘤的生長[9]；具有抗氧化、抗炎癥和抗腫瘤的作用[10-11]。但羊肚菌大規模人工栽培目前仍較難實現[12]。羊肚菌菌絲體液體培養時，生長速度快，高效經濟，適合工業化生產，且液體發酵培養的食用菌菌絲體與其子實體在化學組成上、生理功能上都很相似[13]。因此，采用菌絲體的液體發酵培養方法是目前主要培養羊肚菌的方法[14]。硒是人體必需的微量元素，與人類健康有密切關系，研究發現貧血、大骨節病、糖尿病、癌癥等疾病都與人體內缺乏硒元素相關[15]。從地理條件分析，我國是一個缺硒大國，糧食等天然食物中硒含量較低，尤其是華北、東北、西北地區屬于嚴重硒匱乏地區，開發高效的富硒食品具有重要的意義[16]。多糖和硒結合成為硒多糖，是一種多糖有機硒化合物，其生物藥理活性普遍高于多糖和硒，更容易被機體吸收和利用[17]。食用菌因具有較強的富硒能力，通過菌絲細胞內物質代謝，使無機硒安全有效地轉化為有機硒多糖，同時營養成分因富硒得到改善[18-19]。羊肚菌對硒具有較強的的富集和轉化作用[20-21]。羊肚菌菌絲體富硒培養后獲得的硒多糖的抗氧化性強于普通多糖[22]。香菇富硒培養的菌絲體提取物抗氧化、清除自由基的活性顯著增加[23]。硒與食用菌蛋白之間在清除自由基方面存在協同作用[24]。以金針菇為載體進行硒的生物有機化不僅成本低，含硒量高，而且硒的主要存在形態安全無毒、人體利用率高[25]。本文對羊肚菌菌絲體液體深層培養富硒條件進行了優化，并研究其硒多糖的抗氧化活性。

1　材料與方法

1.1實驗材料

羊肚菌(Morchellaesculenta)，遼寧朝陽食用菌研究所提供；3,3’-二氨基聯苯胺，阿拉丁試劑(上海)有限公司；二苯代苦味?；杂苫?DPPH)，美國Sigma公司；馬鈴薯，市購；亞硒酸鈉、苯酚、H2SO4、HNO3、NaOH、HCl、甲苯、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙醇、Tris-HCl、硫酸亞鐵銨、鄰二氮菲、VC、鄰苯三酚、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂粉、KH2PO4等均為分析純試劑。

1.2實驗儀器

PL203電子精密天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；HYG-3多功能搖床，杰瑞爾電器有限公司；RE-52AA旋轉蒸發儀，亞榮生化儀器廠；UV2800型紫外可見分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司；GRP-9080恒溫培養箱，森信實驗儀器有限公司；TGL-16C高速臺式離心機，江蘇省興化市分析儀器廠；KDB-III COD微波消解儀，青島科迪博電子科技有限公司；MLS-3750高壓滅菌鍋，日本三洋；SW-CJ-1C無菌操作臺，蘇州凈化設備有限公司。

1.3實驗方法

1.3.1硒含量的測定

采用3,3’- 二氨基聯苯胺比色法[26]。

(1)

式中：Wi為富硒菌絲體硒含量，μg/g，W0為空白(不添加硒)菌絲體硒含量，μg/g，Mi為富硒菌絲體干重，g/100 mL，Wj為培養基內添加的初始硒含量，μg/100 mL。

1.3.2多糖的提取及測定

熱水浸提法提取多糖：稱取干燥粉碎后的羊肚菌菌絲體樣品5.0 g，加入120 mL的去離子水，置于250 mL錐形瓶中，在90 ℃的水浴鍋中保溫120 min，殘渣重復提1次。合并上清液，用旋轉蒸發儀濃縮至適當體積，加3倍體積的無水乙醇進行醇沉，4 ℃靜置過夜，3 500 r/min離心20 min，棄去上清液，沉淀用無水乙醇洗2次后，置于60 ℃烘干，即為粗多糖。

(2)

將粗多糖用蒸餾水配制成1 mg/mL的樣品溶液，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量[27]。

1.3.3羊肚菌菌種制備

培養基：斜面培養基(綜合PDA培養基)：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、KH2PO41.5，MgSO41.0，瓊脂粉20 g、水1 000 mL，pH 自然。液體種子和發酵培養基：不加瓊脂的綜合PDA培養基。

菌種活化：將保存菌種用接種針接入斜面培養基中，25 ℃恒溫培養7 d。

液體菌種培養：將活化的斜面菌種4塊(黃豆粒大小)接種到裝有100 mL液體PDA綜合培養基的250 mL三角瓶中，置25 ℃，150 r/min恒溫振蕩培養5 d。

1.3.4羊肚菌菌絲體液體培養

將液體菌種接入裝100 mL發酵培養基的250 mL三角瓶中，接種量為10%， 25 ℃，150 r/min振蕩培養7 d。培養結束后將菌絲體過濾，蒸餾水洗滌2遍，60 ℃烘干，稱重后測定菌絲體中硒含量。

1.3.5單因素法優化羊肚菌菌絲體的富硒培養條件

硒濃度的選擇：向PDA液體培養基中加入亞硒酸鈉制備含不同硒濃度的培養基，硒濃度(mg/L)分別為：5，10，20，30，40，50，60，70，80，以不加亞硒酸鈉為空白對照。

培養溫度的選擇：分別取22，25，28 ℃。

裝液量的選擇：分別取50，100，150 mL于250 mL三角瓶中。

pH的選擇：分別取5，6，7，8，9。

1.3.6正交試驗優化羊肚菌的富硒培養條件

采用4因素3水平正交試驗優化羊肚菌的富硒培養條件。分別考察培養基中硒濃度、pH值、裝液量和溫度4方面對羊肚菌富硒率的影響。

表1　羊肚菌富硒培養條件正交試驗因素水平表

1.3.7羊肚菌菌絲體多糖抗氧化性的研究

1.3.7.1清除羥自由基(·OH)試驗

取8支10 mL刻度管，依次加入1 .0 mL的Tris-HCl溶液(pH 8.2)，0.3 mL硫酸亞鐵銨(5.0 mmol/L)和0.3 mL的鄰二氮菲溶液(7.5 mmol/L)，1號為空白，3～7號管分別加入0.2，0.4，0.6，0.8 mL和 1.0 mL 的樣品溶液(1 mg/mL)，8號管加入1.0 mL的 VC溶液(0.2 mg/mL)，最后向 2～8號管分別加入1.0 mL H2O2溶液(7.5 mmol/L)，定容至刻度。在37℃水浴鍋中反應 1.0 h 。以Tris-HCl 溶液調零，在510 nm 處測吸光度A，計算對·OH 的清除率。

(3)

式中：A1和A2分別是體系不加 H2O2及加入 H2O2的吸光值;A3是加入樣品溶液以后的吸光值。

1.3.7.2抑制超氧陰離子(O2-·)試驗

取5支10 mL刻度管，均加入4.5 mL的Tris-HCl緩沖液(0.05 mol/L)，置于25 ℃水浴中預熱25 min，分別加入0.1 mL不同濃度的樣品溶液和0.4 mL鄰苯三酚溶液(0.5 mmol/L)，于25 ℃水浴中反應4.0 min，加入8.0 mol/L HCl 2滴終止反應。以Tris-HCl溶液調零，在320 nm 處測定吸光度(Ai)，空白對照組以相同體積的蒸餾水代替。

(4)

式中：A0為空白的吸光度；Ai為多糖的吸光度。

1.3.7.3清除DPPH·試驗

吸取樣品2.0 mL，加入2.0 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L)，搖勻，避光靜置30 min。以無水乙醇調零，測定 517 nm 波長處的吸光度(A樣品)。測定樣品2.0 mL與無水乙醇2.0 mL混合液在517 nm 處的吸光度(A對照)，再測定2.0 mL DPPH溶液與2.0 mL無水乙醇在517 nm波長處的吸光度(A空白)。計算DPPH·的清除率。

(5)

IC50值是清除率為50%時對應的樣品濃度。

1.4數據分析

每個試驗處理3次重復，用Microsoft Excel軟件計算平均值和標準偏差。

2　結果與分析

2.1羊肚菌菌絲體富硒培養條件優化的單因素實驗

2.1.1羊肚菌菌絲體富硒培養適宜硒濃度的選擇

結果如表2所示，硒的濃度(5～10 mg/L)范圍內促進菌絲體生長，在高濃度(大于10 mg/L)范圍內則抑制菌絲體生長，硒對羊肚菌菌絲體具有促進生長與抑制生長的雙重性。硒濃度為5 mg/L時，菌絲體生物量為7.48 g/L，硒含量為0.07 mg/g，富硒率為7.48%；硒濃度為10 mg/L時，菌絲體生物量為6.72 g/L，硒含量為0.11mg/g，富硒率為6.05%。雖然硒濃度為5 mg/L時的富硒率高于硒濃度為10 mg/L時，但考慮到菌絲體中的硒含量，選擇的硒濃度為10 mg/L。

表2　羊肚菌菌絲體富硒培養適宜硒濃度的選擇

2.1.2羊肚菌菌絲體富硒培養適宜溫度的選擇

培養基中硒濃度為10 mg/L，將已接種好的三角瓶置于18、22、25、28 ℃培養，測定菌絲體生物量和硒含量，計算富硒率，結果如表3所示。培養溫度對菌絲體硒含量的影響效果不顯著，但對菌絲體生物量的影響比較大，羊肚菌菌絲體干重隨溫度的升高呈現先增大后減小的趨勢，且溫度為25 ℃時菌絲體生物量和富硒率最大。因此，選擇25 ℃為最佳培養溫度。

表3　羊肚菌菌絲體富硒培養適宜溫度的選擇

2.1.3羊肚菌菌絲體富硒培養適宜裝液量的選擇

裝液量影響菌絲體液體培養過程中發酵液的溶氧狀態，因此可以考察該菌生長和富硒對氧的需求程度。裝液量對羊肚菌菌絲體富硒培養的影響(表4)，裝液量對菌絲體硒含量的影響效果不顯著， 但對菌絲體生長的影響效果顯著。羊肚菌菌絲體在250 mL三角瓶中裝液量為100 mL時，菌絲干重達到最大值7.85 g/L，此時菌絲體的富硒率為7.85%。從裝液量來看，并不是溶氧越大越有利于羊肚菌菌絲生長和富硒。

表4　羊肚菌菌絲體富硒培養適宜裝液量的選擇

2.1.4羊肚菌菌絲體富硒培養適宜pH的選擇

培養基配制后滅菌前，自然pH值為6.85，pH對羊肚菌菌絲體富硒培養的影響結果如表5所示。羊肚菌富硒培養時，初始pH值小于6或大于7菌絲體生長都受到抑制，當pH為 7.0以上時， 菌體干重開始急劇下降，pH在6～7范圍內比較適合菌絲體生長。當pH為7時菌絲體生物量最高，pH為7時富硒率最高。因此，初步選擇初始pH值為7。

表5　pH值對羊肚菌菌絲體富硒培養的影響

2.2正交試驗優化羊肚菌菌絲體富硒的培養條件

優化得到的羊肚菌菌絲體富硒培養條件方案為：A2B3C2D2，即培養基中硒濃度10 mg/L、pH值7.0、裝液量100 mL/250 mL、溫度25 ℃。實驗因素對羊肚菌菌絲體富硒影響的大小順序為：硒濃度﹥溫度﹥裝液量﹥pH值。經方差分析，正交試驗的4個因素在所選實驗濃度范圍內，對富硒率無顯著影響。通過驗證試驗，在上述優化的適宜條件下得到菌絲體生物量為8.27 g/L、硒含量0.13 mg/g，富硒率為9.10%，比優化前的富硒率6.05%提高50.41%。

表6　羊肚菌菌絲體富硒培養條件正交試驗結果

2.3富硒羊肚菌菌絲體多糖抗氧化性的研究

2.3.1羊肚菌菌絲體多糖提取及富硒率的測定

采用液體深層發酵技術進行羊肚菌菌絲體富硒培養，其菌絲體多糖提取和富硒率計算結果如表7所示。羊肚菌菌絲體多糖的純度和提取率分別為88.07 %和10.94 %，硒多糖的純度和提取率分別為 90.18 %和11.64 %，在相同的培養條件下得到硒多糖的量比羊肚菌菌絲體多糖的量高6.40 %，表明羊肚菌菌絲體富硒培養，在一定程度上可以促進菌絲體產糖，且提高多糖的提取率。

表7　羊肚菌菌絲體多糖提取

2.3.2羊肚菌菌絲體多糖清除羥自由基(·OH)

通過H2O2/Fe2+體系測定羊肚菌富硒菌絲體多糖和沒加硒的菌絲體多糖清除羥自由基(·OH)實驗，結果如圖2所示。Vc的線性回歸方程為：y=52.5x+31.2(R2=0.990 9)，IC50為0.36 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=43.35x+31.735(R2=0.986 3)，IC50為0.42 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=51.3x+18.33(R2=0.936 4)，IC50為0.62 mg/mL。對羥自由基的清除作用大小為：Vc>羊肚菌富硒菌絲體多糖>羊肚菌菌絲體多糖。在一定的多糖濃度范圍內，3者的羥自由基清除能力與樣品多糖濃度成正相關。實驗表明羊肚菌富硒后，其多糖的羥自由基清除能力增強，羊肚菌富硒菌絲體多糖清除·OH的活性比羊肚菌菌絲體多糖提高52.38 %。

圖2　羊肚菌菌絲體多糖對·OH清除率Fig.2　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on hydroxyl free radicals

2.3.3羊肚菌菌絲體多糖清除超氧陰離子(O2-·)

通過測定Vc、羊肚菌富硒菌絲體多糖和沒添加硒源的菌絲體多糖對鄰苯三酚的自氧化抑制作用來表明它們清除O2-·活性，結果如圖3所示。

圖3　羊肚菌菌絲體多糖對O2-·的清除率Fig.3　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on superoxide anion free radicals

由圖3可見，清除O2-·活性，Vc的線性回歸方程為：y=59.55x+26.855(R2= 0.991 8)，IC50為0.39 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=59.9x+14.69(R2=0.993 6)，IC50為0.59 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=47.65x+9.515(R2=0.967 6)，IC50為0.85 mg/mL，對O2-·清除作用大小為：Vc >羊肚菌富硒菌絲體多糖 > 羊肚菌菌絲體多糖。羊肚菌富硒菌絲體多糖清除O2-·活性比羊肚菌菌絲體多糖提高44.07 %。

2.3.4羊肚菌菌絲體多糖清除DPPH·

DPPH在有機溶劑中呈現深紫色，通過測定顏色的褪色程度來評價多糖對DPPH·的清除效果，其測定結果如圖4所示。

圖4　羊肚菌菌絲體多糖對DPPH·的清除率Fig.4　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on DPPH free radicals

由圖4清除DPPH·實驗結果表明，Vc對DPPH·的清除率的線性回歸方程為：y=72.15x+27.715(R2= 0.956 1)，IC50為0.31 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=39.4x+30.74(R2=0.998 6)，IC50為0.49 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=37.1x+25.36(R2=0.972 8)，IC50為0.66 mg/mL。對DPPH·清除作用大小為：Vc >羊肚菌富硒菌絲體多糖 > 羊肚菌菌絲體多糖。羊肚菌富硒菌絲體多糖清除DPPH·活性比羊肚菌菌絲體多糖提高34.69 %。

3　結論

羊肚菌菌絲體具有較強的富硒能力，通過優化獲得的適宜富硒條件為：硒濃度10 mg/L、pH值7.0、裝液量100 mL/250 mL、溫度25 ℃。菌絲體中硒含量可達0.13 mg/g，富硒率為9.10%，提高了50.41%。通過清除·OH、O2-·和DPPH·證明了羊肚菌菌絲體多糖具有較強的體外抗氧化性，由于多糖和硒的雙重作用，通過富硒培養獲得的羊肚菌富硒菌絲體多糖比羊肚菌菌絲體多糖具有更強的體外抗氧化活性，其中清除·OH的活性提高了52.38 %，清除O2-·活性提高了44.07 %，清除DPPH·活性提高了34.69%。富硒羊肚菌多糖可作為天然抗氧化劑和補硒制劑開發利用。

[1]HIBBETT D,BINDER M,BISCHOFF JF,et al. A higher-level phylogenetic classification of the fungi[J]. Mycological Research,2007,111(5): 509-547.

[2]杜習慧,趙琪,楊祝. 羊肚菌的多樣性、演化歷史及栽培研究進展[J]. 菌物學報,2014,33(2):183-197.

[3]孫玉軍,陳彥,周正義,等. 羊肚菌胞內多糖對小鼠急性肝損傷的影響[J]. 中國食用菌,2008,27(2):41-45.

[4]馬利,李霞,張松. 尖頂羊肚菌胞外多糖提取物對皮膚成纖維細胞增殖和衰老的影響[J]. 菌物學報,2014,33(2):385-393.

[5]潘志福,蘭瑛,張松. 尖頂羊肚菌胞外多糖提取物抗氧化作用的研究[J]. 華南師范大學學報(自然科學版),2011(2):124-128.

[6]高明燕,鄭林用,余夢瑤. 尖頂羊肚菌菌絲體水提液對實驗型胃潰瘍的作用[J]. 菌物學報,2011,30(2):325-330.

[7]魏巍,余夢瑤,許曉燕. 不同羊肚菌菌株的遺傳差異性與胃黏膜保護作用的比較研究[J]. 食品科學,2014,35(7):160-163.

[8]呂曉蓮,郭宏,賈建會. 羊肚菌發酵產物功能性研究[J]. 食品科學,2013,34(1):311-314.

[9]陳彥,潘見,周麗偉,等. 羊肚菌胞外多糖抗腫瘤作用的研究[J]. 食品科學,2008,27(9):555-558.

[10]NITHA B,MEERA C K,JANARDHANAN K K. Anti-inflammatory and antitumor activities of cultured mycelium of morel mushroomMorchellaesculenta[J]. Curr Sci,2007,92(2):235-239.

[11]MAU Jeng-leun,CHANG Chieh-no,HUANG Shih-jeng,et al. Antioxidant properties of methanolic extracts fromGrifolafrondosa，MorchellaesculentaandTermitomycesalbuminosusmycelia[J]. Food Chemistry,2004,87(1):111-118.

[12]熊川,李小林,李強,等. 羊肚菌生活史周期、人工栽培及功效研究進展[J]. 中國食用菌,2015,34 (1):7-12.

[13]楊建,張光宇,杜秀娟. 羊肚菌液體發酵培養基成分及培養條件的優化[J]. 中國釀造,2013,32(10) :113-116.

[14]康小虎,蔡亞東,孫宜法,等. 甘南州尖頂羊肚菌菌絲體液體發酵培養研究[J]. 中國食用菌,2012,31(6):40-43.

[15]顏炳祥,潘道東,曾小群. 乳酸菌胞外多糖硒化修飾及其抗氧化活性研究[J]. 中國食品學報,2012,12(2):15-23.

[16]李麗輝,林親錄,陳海軍. 硒的生理學功能及富硒強化食品的研究進展[J]. 現代食品科技,2005,21(3):198-200.

[17]SHANG De-jing,LI Yang,WANG Che,et al. A novel polysaccharide from Se-enrichedGanodermaluciduminduces apoptosis of human breast cancer cells[J]. Oncology Reports,2011,25(1):267-272.

[18]余杰,崔鵬舉,崔仕超,等. 雞腿菇菌絲深層培養富硒的研究[J]. 食品與發酵工業,2008,34(7): 93-97.

[19]高慧娟,袁承玲,趙麗,等. 響應面法優化富硒荷葉離褶傘菌絲體胞內粗多糖發酵條件[J]. 菌物學報,2016,35(1): 86-93.

[20]丁健峰,孫永海,付天宇,等. 響應曲面法優化羊肚菌富硒深層發酵條件[J]. 吉林大學學報(工學版),2013,43(增刊):557-563.

[21]黃春燕,張柏松,萬魯長,等. 食用菌富硒培養研究進展[J]. 山東農業科學,2012,44(7):81-87.

[22]黃玲玲,蘇彩霞,張宗申,等. 硒、鋅元素對羊肚菌多糖抗氧化性的影響[J]. 食品與發酵工業,2015,41(7):122-125.

[23]JADWIGA T,BOZENNA G,FRANCISZEK H.Effect of selenium enrichment on antioxidant activities and chemical composition ofLentinulaedodes(Berk.) Pegl. mycelial extracts[J]. Food and Chemical Toxicology,2010,48:1 085-1 091.

[24]楊奇,郭陽,徐銳,等. 富硒食用菌硒蛋白清除氧自由基作用研究[J]. 食品研究與開發,2014,35(13):1-5.

[25]李華為,鐵梅,張崴,等. 金針菇子實體富硒栽培特性及 HPLC-ICP-MS 法對硒的分布研究[J]. 菌物學報,2012,31(1):86-91.

[26]賈姍姍,朱連勤,朱風華,等. 3,3'-二氨基聯苯胺分光光度法檢測硒[J]. 畜牧與獸醫,2012,44 (6):74-75.

[27]王文平,郭祀遠,李琳,等. 苯酚-硫酸法測定野木瓜中多糖含量的研究[J]. 食品科學,2007,28(4):276-278.

Optimization of Se-rich culture conditions and antioxidant activities of polysaccharides fromMorchellaesculentamycelium

GANG Jie*,MA Hai-mei,XIE Bin,HAN Lin,JI Chun-yang,CAO Lei

(College of Life Sciences,Dalian Nationalities University,Dalian 116600，China)

The cultivation conditions for a selenium-accumulating ofMorchellaesculentamycelium was optimized using submerged liquid culture. The influences of selenium concentration,temperature,liquid volume,pH value of cultivation medium on selenium accumulation rate were studied. The results showed that the optimum conditions were as follows: the selenium concentration in cultivation medium was 10 mg/L,temperature was 25 ℃,liquid volume was 100 mL/250 mL and initial pH was 7.0. Under such conditions,the selenium-rich rate can reach 9.10%. The crude polysaccharides were isolated fromMorchellaesculentamycelium,and their antioxidant abilities in scavenging hydroxyl radical, inhibiting superoxide anion, scavenging DPPH radical were studied. The IC50values of ·OH clearance forMorchellaesculentamycelium polysaccharide and mycelium selenium-accumulating polysaccharide were 0.62 mg/mL and 0.42 mg/mL respectively. The IC50values of O2-·clearance were 0.85 mg/mL and 0.59 mg/mL respectively. The IC50values of DPPH· clearance were 0.66 mg/mL and 0.49 mg/mL, respectively.Morchellaesculentamycelium polysaccharides exerted antioxidant activities in a concentration-dependent manner, and the antioxidant activities of mycelium selenium-rich polysaccharides were higher than those of mycelium polysaccharides without selenium-rich culture.

Morchellaesculenta; mycelium polysaccharide; selenium accumulation rate; antioxidant activity

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201609021

博士，教授(本文通訊作者， E-mial:gangjie@dlnu.edu.cn)。

遼寧省自然科學基金資助項目(2015020676)；財政專項-中央高?；究蒲袠I務費資助項目(DC201501020301)

2016-02-26，改回日期：2016-05-23