高效液相色譜法測定藥品中的二硫蘇糖醇和氧化型二硫蘇糖醇

羅 寧， 劉平懷*， 吳曉娜， 陳 晨， 張 玲， 何沂飛， 李 昂

(熱帶作物種質資源保護與開發利用教育部重點實驗實，海南大學材料與化工學院，海南海口 570228)

二硫蘇糖醇(DTT)屬于常用的巰基試劑，其揮發性低、難聞氣味較少，而且氧化電位低。DTT的氧化態(DTTox)為環狀結構，其結構穩定，所以具有較高的還原性。在DNA提取實驗中常常添加DTT打斷蛋白質之間的二硫鍵，使DNA充分游離，提高DNA的提取效率[1,2]。DTT也常常被用于蛋白質中二硫鍵的還原，可用于阻止蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵，因此，在蛋白質提取中添加DTT可以保護蛋白質結構不被破壞[3,4]。

試驗藥品有效成分為工程菌的代謝產物，是一種活性蛋白。在生產過程中添加DTT用來保護目標蛋白結構，維持藥物活性。DTT屬于巰基化合物，還原性較強，在體內可能會破壞蛋白質結構，從而引起酶失活等現象，目前常用凝膠過濾[5]和透析[6]去除DTT。DTTox會使肌酸激酶結構發生變化，達到一定濃度時甚至會使肌酸激酶完全失活[7]。因此必需對該藥品中的DTT和DTTox進行檢測。目前有報道用二硫蘇糖醇分光光度計測定鈷離子含量[8]，但DTT極容易被氧化，且滴定法靈敏度不高，所以不能采用鈷離子來反滴定DTT。DTTox也沒有有效檢測方法。高效液相色譜法在藥品檢測中應用較廣[9,10]。因此，本文采用高效液相色譜法同時對藥品中DTT和DTTox進行檢測，確保藥品的安全性。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

大連依利特高效液相色譜儀，包括DAD230+二極管陣列檢測器，P230高壓恒流泵，EC2000工作站，柱溫箱，在線脫氣機；……