VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表達與淋巴轉移

丁旭青　韓玉培　楊鯤鵬

1) 河南南陽市第二人民醫院胸外科　南陽　473012　2) 鄭州大學第二附屬醫院胸外科　鄭州　450014

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·論著·

VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表達與淋巴轉移

丁旭青1)2)韓玉培1)楊鯤鵬2)

1) 河南南陽市第二人民醫院胸外科南陽4730122) 鄭州大學第二附屬醫院胸外科鄭州450014

目的探討VEGF-C及VEGFR-3與NSCLC淋巴轉移間的關系，為了解患者預后提供依據。方法采用免疫組化法檢測65例NSCLC中VEGF-C及VEGFR-3的表達，結合臨床病理特征進行分析。結果NSCLC中VEGF-C和VEGFR-3的陽性率明顯高于正常肺組織(P<0.05)。二者在Ⅲ期NSCLC中的表達率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，且隨病理分級的增高而顯著增加(P<0.05)，在有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴結轉移者(P<0.05)。結論VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表達，與其臨床分期、病理分級、病理類型和淋巴結轉移均密切相關。

VEGF-C；VEGFR-3；NSCLC；免疫組化；淋巴轉移

淋巴轉移是多種人體惡性腫瘤的重要預后因素，血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族及其受體是淋巴轉移的重要調節通路之一。VEGF-C可通過自分泌途徑激活其受體VEGFR-3，誘導淋巴管內皮細胞擴增而形成新生淋巴管，進而促進腫瘤的淋巴轉移[1]。本研究旨在探討VEGF-C及其受體VEGFR-3在非小細胞肺癌組織(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表達和淋巴轉移間的關系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取南陽市第二人民醫院胸外科2010-06—2015-12間收治的NSCLC患者，隨機抽取術后病理組織標本65例作為實驗組，取腫瘤周圍正常肺組織(顯微鏡下證實)16例為對照組。所有病例術前均未做任何治療。實驗組中男48例，女17例；鱗癌40例，腺癌25例。高分化8例，中分化23例，低分化28例，未分化6例。TNMⅠ期10例、Ⅱ期21例、III期34例(Ⅰ/Ⅱ期為臨床早期組，III期為臨床晚期組)。有淋巴結轉移組41例，無轉移組24例。中心型37例，周圍型28例。所有病例均經過HE染色，光鏡下由兩位經驗豐富的病理科醫生進行病理確診，并選擇腫瘤細胞壞死少及炎癥反應輕的部位進行免疫組化染色分析。患者均知情同意，并獲得南陽市第二人民醫院醫學倫理委員會的同意。

1.2方法采用免疫組化S-P法，以 PBS代替一抗作陰性對照，所用兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGFR-3多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3結果判斷VEGF-C及VEGFR-3染色結果判定：VEGF-C定位于癌細胞胞漿，VEGFR-3定位于癌細胞胞漿及癌巢周圍間質內皮細胞，均呈棕黃或棕褐色顆粒狀。取染色均勻區域400倍視野下，以著色細胞占視野細胞總數的多少分級。0級：0。1級：<25%。2級：26%～50%。3級：> 50%。0級為陰性，1級以上為陽性[2]。微淋巴管密度(Microlymphatic vessel density，LVD)測定：在低倍鏡下尋找VEGFR-3陽性脈管密集區，百倍視野下計數10個熱區中VEGFR-3陽性脈管數，取均值為其LVD。腫瘤區內單個或成叢的內皮細胞，不管成堆與否均視為脈管計數，凡伴有肌層的脈管不予計數[3]。

1.4統計學處理全部數據應用SPSS14.0版軟件包，根據數據類型分別進行χ2檢驗、獨立樣本t檢驗和Spearman相關分析進行統計學分析，α=0.05。

2　結果

2.1VEGF-C的表達及其與NSCLC臨床病理特征的關系棕黃色VEGF-C陽性顆粒均勻分布于癌細胞胞漿內(圖-1)。65例NSCLC組織VEGF-C陽性率為72.3% (47/65)，明顯高于對照組12.5%(2/16)，2組差異顯著 (P<0.05)。結合臨床病理特征分析發現：VEGF-C陽性表達率臨床早期組為54.84%，顯著低于臨床晚期組的84.24%。有淋巴結轉移組為87.7%，明顯高于無淋巴結轉移組的45.83%，(P<0.05)。而VEGF-C表達與患者性別、年齡、臨床類型、病理類型和分化程度之間的差異均無統計學意義(P>0.05)。

圖-1　VEGF-C陽性表達 (SP×400)

2.2VEGFR-3的表達及微淋巴管密度的測定VEGFR-3主要表達于淋巴管內皮上，而癌組織內部表達較少，陽性產物呈棕褐色顆粒。65例NSCLC中，VEGFR-3陽性表達35例(35/65，53.85%)，而對照組僅1例(1/16，6.3%)，2者差異顯著 (P<0.05)。VEGFR-3染色陽性淋巴管散在分布于癌組織間質中，以腫瘤組織周邊與正常組織交界處的浸潤區域及增生活躍區域為主，常可見癌栓形成(圖-2)。VEGFR-3標記的LVD為(29.32±7.14)，明顯高于對照組(10.63±5.80) (P<0.001)。

圖-2　VEGFR-3陽性淋巴管 (SP×100)

2.3LVD與淋巴轉移的關系在65例NSCLC中VEGFR-3標記的LVD與淋巴結轉移、TNM分期、病理類型、分化程度均有顯著相關。其中淋巴結轉移組為(32.74±5.90)，明顯高于無淋巴結轉移組(23.46±4.98)(P<0.05)。臨床晚期組為(31.99±6.65)，明顯高于臨床早期組(26.39±6.58)(P<0.05)。鱗癌組為(31.26±9.67)，明顯高于腺癌組(26.20±6.39)(P<0.05)。低-未分化組為(31.23±5.93)，明顯高于高-中分化組(27.22±7.84)(P<0.05)。相反與患者的年齡、性別和臨床分型無相關性。

3　討論

在VEGF家族成員中，VEGF-C是新近發現的特異性促淋巴管生成因子，與其受體VEGFR-3結合后，可通過MEK/ERK和PI3-激酶-Akt途徑引起淋巴內皮細胞增生。其蛋白水解后的成熟形式還可結合并激活VEGFR-2，作用于血管、淋巴管內皮細胞刺激血管、淋巴管新生[4]。

人類多種腫瘤組織均表達VEGF-C，且水平與腫瘤淋巴管生成及淋巴轉移呈正相關。VEGF-C 可增加淋巴管的滲透性和腫瘤間質壓力，有利于腫瘤細胞進入淋巴管和靜脈[5]。胃癌組織VEGF-C陽性表達與TNM分期、淋巴管浸潤及淋巴結轉移有關，VEGFR-3陽性表達與TNM分期及淋巴結轉移有關，其LVD計數與VEGF-C的表達呈正相關[6]。劉新蘭[7]等采用組織微陣列技術研究了胃癌組織中VEGF-C和VEGFR-3的表達和微淋巴管密度，發現胃癌組織中VEGF-C和VEGFR-3均呈高表達，與淋巴管生成有關并參與了胃癌的發生、浸潤和轉移。胃癌細胞非攝入性高表達的 VEGF-C和 VEGF-D 與淋巴結轉移密切相關, 可作為評估胃癌患者預后的重要參考指標[8]。Wang[9]等分別用免疫組化和RT-PCR技術檢測了VEGF-C和VEGFR-3在正常喉組織、原發喉癌及其淋巴結中的表達，結果發現他們的表達與喉癌淋巴結轉移密切相關。Naruse T[10]等對口腔舌鱗癌的研究顯示VEGF-C/VEGFR-3軸可通過淋巴管的再生而與淋巴結轉移相關，確定VEGF-C/VEGFR-3表達狀態有助于預測哪些病人會出現局部復發，同時可以為舌癌淋巴結轉移的治療提供新的靶點。劉樹庫[1]等發現VEGF-C和VEGFR-3 m-RNA的表達與非小細胞肺癌的淋巴結轉移有關。在本實驗中，VEGF-C和VEGFR-3均呈現高表達，且與NSCLC的TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤浸潤呈正相關。趙楊[11]等發現大腸癌組織VEGF-C、VEGFR-3表達與LVD值存在顯著正相關，可促進淋巴結轉移。Kadota[12]等的實驗發現淋巴管生成尤其是微淋巴管和微血管的生成是非小細胞肺癌獨立的不良預后因素。Zhao[13]等發現乳腺癌組織中的VEGF-C在淋巴結轉移前即誘導了前哨淋巴結的淋巴管生成。

本研究發現，NSCLC組織LVD 為(29.32±7.14)，顯著高于對照組(10.63±5.80)。相關分析顯示：LVD與NSCLC的TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤浸潤正相關，而與其分化程度負相關。同時，LVD與VEGF-C和VEGFR-3呈現正相關關系。65例NSCLC中，VEGF-C和VEGFR-3高表達的組織淋巴管密度明顯增高，說明VEGF-C和VEGFR-3能促進NSCLC淋巴管形成。這可能是VEGF-C通過自分泌作用于淋巴管內皮上的VEGFR-3，促使微淋巴管內皮細胞的增生和微淋巴管的延伸、增多，致使腫瘤細胞進入淋巴管的機會增多，從而使淋巴結轉移的可能性增大。

總之，VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表達，與其臨床分期、病理分級、病理類型和淋巴結轉移均密切相關。VEGF-C和VEGFR-3與NSCLC淋巴管生成及淋巴結轉移密切相關，VEGF-C及LVD可作為判斷NSCLC淋巴轉移及判斷預后的重要指標給臨床提供幫助。

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(收稿2016-03-22)

Expression of VEGF-C and VEGFR-3 in Non-Small Cell Lung Cancer and Its Relationship with Lymphatic metastasis

DingXuqing，HanYupei,YangKunpeng.

1)ThoracicDepartment,theSecondHospitalofNanyangCity,Henan, 473012,China； 2)ThoracicDepartment,theSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou, 453014,China)

ObjectiveTo study relationship between VEGF-C, VEGFR-3 expression and lymphatic metastasis in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) to know the prognosis of patients. MethodsImmunohistochemical staining was used to detect the expression of VEGF-C and VEGFR-3 in 65 cases of NSCLC. The significance of VEGF-C and VEGFR-3 expression was analyzed with their clinicopathological parameters. ResultsThe postive rates of VEGF-C and VEGFR-3 expression were higher in NSCLC than those in nomal lung tissue (P<0.05). The expression rates of VEGF-C and VEGFR-3 were higher in clinical stage Ⅰ, Ⅱ than those in stage Ⅲ, and which were increased with the grading (P<0.05). And the expressions were higher in patients with lymph node involvement than those without metastasis (P<0.05). ConclusionIn NSCLC, the abnormal expressions of VEGF-C and VEGFR-3 had obvious relationship to clinical stage, pathological grade, lymph node involvement.

VEGF-C; VEGFR-3; NSCLC; Immunohistochemical; Lymphatic Metastasis

R446.6

A

1077-8991(2016)06-0001-03