白介素17基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的相關性研究

袁 陸，張麗杰，李 鷗，楊艷艷，張 琪，王新月，耿美麗，姜春陽，王 洋，馬 冬

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白介素17基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的相關性研究

袁 陸，張麗杰，李 鷗，楊艷艷，張 琪，王新月，耿美麗，姜春陽，王 洋，馬 冬

目的探討白介素17(IL-17)基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的相關性，為臨床診斷和免疫治療宮頸癌提供新思路。方法選取2011年3月—2012年5月在唐山工人醫院住院部就診的宮頸癌患者43例(宮頸癌組)、癌前病變患者62例〔其中宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅰ級23例(CINⅠ組)、CINⅡ～Ⅲ級39例(CINⅡ～Ⅲ組)〕，另選取本院同期因子宮肌瘤行全子宮切除術的患者43例作為對照組。4組患者宮頸組織標本均經手術獲得。提取4組宮頸組織DNA并進行高危型人乳頭瘤病毒(HPV)16 DNA檢測，采用CpG島甲基化特異性PCR(MSP)法檢測IL-17基因啟動子區CpG島甲基化狀態，采用半定量反轉錄PCR(RT-PCR)法檢測IL-17 mRNA表達水平，分析IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17 mRNA表達水平的相關性及其與HPV16 DNA陽性率的關聯性，并分析不同年齡、臨床特征宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率。結果4組HPV16 DNA陽性率比較，差異有統計學意義(P<0.001)。CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率低于對照組(P<0.01)；CINⅠ組與對照組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組和宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平均高于對照組(P<0.05)；CINⅠ組與CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。根據IL-17基因啟動子區CpG島甲基化檢測結果將所有患者分為IL-17基因啟動子區CpG島甲基化患者(93例)和非甲基化患者(55例)，IL-17基因啟動子區CpG島非甲基化患者IL-17 mRNA表達水平高于甲基化患者(P<0.05)。所有患者宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17 mRNA表達水平呈負相關(rs=-0.627，P<0.05)。所有患者宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率和HPV16 DNA感染陽性率存在關聯性(χ2=33.209，P<0.05,r=-0.474)。臨床分期為Ⅱ期、Ⅲ期的宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率低于臨床分期為Ⅰ期的宮頸癌患者(P<0.05)；不同年齡、病理分級、腫瘤直徑及有無淋巴結轉移的宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論IL-17基因啟動子區CpG島甲基化與高危型HPV16感染具有關聯性，IL-17基因啟動子區CpG島低甲基化可能與宮頸癌發生、發展存在相關性。

宮頸腫瘤；白細胞介素17；DNA甲基化；CpG島；人乳頭瘤病毒16

袁陸，張麗杰，李鷗，等.白介素17基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的相關性研究[J].中國全科醫學，2016，19(27)：3300-3305.[www.chinagp.net]

YUAN L,ZHANG L J,LI O,et al.Correlation between CpG island methylation in IL-17 gene promoter and cervical cancer[J].Chinese General Practice，2016，19(27)：3300-3305.

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染在宮頸癌的發生、發展過程中起重要作用[1-2]，同時宿主遺傳、自身免疫反應[3-4]等因素對宮頸癌的發生、發展亦十分重要。白介素(IL)-17是一類促炎性細胞因子，主要由活化的CD4+T淋巴細胞產生，在調節輔助性T細胞(Th)1/Th2免疫平衡和清除細胞外病原體方面發揮重要作用，與自身免疫和腫瘤發生、發展密切相關[5]。相關臨床研究顯示，IL-17可能參與宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的發生、發展過程[6]。CpG島是指在基因組中長度為300～3 000 bp富含CpG二核苷酸的區域，啟動子區CpG島的甲基化狀態是基因轉錄所必需的，而CpG序列中C的甲基化是導致基因轉錄被抑制的可能機制之一[7]，但其在宮頸癌進展中的變化及臨床意義尚未見報。本研究采用甲基化特異性PCR(MSP)法研究IL-17基因啟動子區CpG島甲基化狀態，結合宮頸癌的臨床病例特征與HPV檢測結果，探討IL-17基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的關系。

1　資料與方法

1.1納入與排除標準納入標準：(1)年齡28～69歲，臨床資料及病理資料完整；(2)無子宮切除史；(3)納入研究時未妊娠；(4)手術標本均經病理證實，且患者術前未行化療、放療或免疫治療。排除標準：(1)術前3個月行陰道藥物治療及任何宮頸手術者；(2)卵巢癌、子宮內膜異位癥、子宮內膜癌等患者；(4)存在供血不足的慢性疾病史：(5)肝硬化、腎衰竭、心血管疾病、有藥物依賴者；(6)精神疾病患者。

1.2臨床資料選取2011年3月—2012年5月在唐山工人醫院住院部就診的宮頸癌患者43例(宮頸癌組)、癌前病變患者62例〔其中CINⅠ級23例(CINⅠ組)、CINⅡ～Ⅲ級39例(CINⅡ～Ⅲ組)〕，另選取本院同期因子宮肌瘤行全子宮切除術的患者43例作為對照組。4組患者宮頸組織標本均經手術獲得，于-80 ℃冰箱保存。宮頸癌患者的臨床分期參照國際婦產科聯盟子宮頸癌的臨床分期標準[8]，病理類型參照WHO制定的相關標準[9]。本研究經唐山工人醫院倫理委員會批準，臨床資料的收集和組織標本的采集均經研究對象知情同意。

1.3方法

1.3.1宮頸組織DNA的提取及HPV16 DNA檢測[10]采用飽和酚三氯甲烷抽提法提取宮頸組織細胞DNA，PCR擴增HPV16 DNA基因片段，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR結果。

1.3.2MSP法檢測IL-17基因啟動子區CpG島甲基化狀態[7]按照EZ DNA Methylation-GoldTMKit試劑盒說明書對DNA進行甲基化修飾及純化。檢索NCBI(AY630567)IL-17基因序列，確定啟動子區，采用Methyl Primer Express v1.0軟件分析IL-17基因啟動子區CpG島并設計甲基化與非甲基化兩對引物(由北京賽百盛基因技術有限公司合成)。IL-17啟動子甲基化上游引物5′-TTTTTATGATTTTATTGGGGGC-3′，下游引物5′-ATAAACAAAATATAACGCTATCGTC-3′，產物長度138 bp。非甲基化上游引物5′-TTTATGATTTTATTGGGGGTGG-3′，下游引物5′-AATAAACAAAATATAACACTATCATC-3′，產物長度137 bp。PCR反應體系為2×Taq PCR Master Mix 12.5 μl，上下游引物(10 μmol/L)各3 μl，DNA模板2 μl，超純水25 μl。PCR反應條件：95 ℃預熱3 min，94 ℃變性45 s，55 ℃退火60 s，72 ℃延伸45 s，共35個循環；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。2%瓊脂糖凝膠電泳。結果判定標準：電泳結果只出現非甲基化條帶視為非甲基化結果；電泳結果同時出現甲基化和非甲基化條帶或只出現甲基化條帶視為甲基化結果。PCR產物送北京賽百盛基因技術有限公司進行測序，驗證甲基化或非甲基化檢測結果。

1.3.3半定量反轉錄PCR(RT-PCR)法檢測IL-17mRNA表達水平Trizol法提取宮頸組織細胞總RNA，人IL-17mRNA序列(NM 002190)下載自NCBI網站，采用Primer 5軟件設計引物，由北京賽百盛基因技術有限公司合成，采用β-actin(其序列下載自NCBI網站)作為內參基因。IL-17mRNA上游引物5′-GAAGGCAGGAATCACAAT-3′，下游引物5′-AGCCCACGGACACCAGTA-3′，產物長度138 bp。β-actin上游引物5′-TGCCGACAGGATGCAGAAG-3′，下游引物5′-CTCAGGAGGAGCAATGATCTTGA-3′，產物長度76 bp。RT-PCR反應體系為2×Reaction Mix 25 μl，總RNA 1 μl，上下游引物(10 μmol/L)各1 μl，RT/Platinum?Taq Mix 1 μl，超純水50 μl。RT-PCR反應條件：45 ℃反轉錄30 min，94 ℃預熱2 min，進行1個循環；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min。共進行40個循環。1.5%瓊脂糖凝膠電泳，行半定量分析，IL-17 mRNA與β-actin 的綜合光密度(OD)比值代表相對表達水平。

2　結果

2.14組患者一般資料比較對照組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組及宮頸癌組年齡、婚史、初潮年齡、經期時長、月經周期、流產次數、吸煙率、飲酒率比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表1)。

2.2HPV16 DNA檢測結果對照組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組HPV16 DNA陽性率分別為16.3%(7/43)、47.8%(11/23)、69.2%(27/39)、90.7%(39/43)。4組HPV16 DNA陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=52.108，P<0.001)。

2.3IL-17基因啟動子區CpG島甲基化檢測結果MSP檢測結果見圖1～2(本文圖1～2彩圖見本刊官網www.chinagp.net電子期刊相應文章附件)。對照組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率分別為81.4%(35/43)、73.9%(17/23)、51.3%(20/39)和48.8%(21/43)。4組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異有統計學意義(χ2=13.389，P=0.004)。其中CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率低于對照組(χ2值分別為4.850、6.835，P<0.01)；CINⅠ組與對照組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異無統計學意義(χ2值分別為1.319、0.606、1.235，P>0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異無統計學意義(χ2=0.150，P>0.05)。

表1　4組患者一般資料比較

注：a為χ2值；CIN=宮頸上皮內瘤變；吸煙定義為每天吸煙至少1支，連續吸煙6個月以上；飲酒定義為每周飲酒至少1次(≥250 ml/次)，連續6個月以上

2.4IL-17 mRNA表達水平比較對照組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組及宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平分別為(0.50±0.18)、(0.62±0.26)、(0.70±0.19)和(0.76±0.29)。4組IL-17 mRNA表達水平比較，差異有統計學意義(F=10.026,P<0.05)。其中CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組和宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平均高于對照組，差異有統計學意義(t值分別為-3.331、-2.584、-2.550，P<0.05)；CINⅠ組與CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平比較，差異無統計學意義(t值分別為0.609、1.843，P>0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平比較，差異無統計學意義(t=1.117，P>0.05)。根據IL-17基因啟動子區CpG島甲基化檢測結果將所有患者分為IL-17基因啟動子區CpG島甲基化患者(93例)和非甲基化患者(55例)，其IL-17 mRNA表達水平分別為(0.50±0.16)、(0.90±0.17)。IL-17基因啟動子區CpG島非甲基化患者IL-17 mRNA表達水平高于甲基化患者，差異有統計學意義(t=13.928，P<0.05)。

2.5IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17 mRNA表達水平的相關性所有患者宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率為62.8%(93/148)，IL-17 mRNA表達水平為(0.65±0.29)。所有患者宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17 mRNA表達水平呈負相關(rs=-0.627，P<0.05)。

2.6IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與HPV16 DNA陽性率的關聯性分析所有患者宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率和HPV16 DNA感染陽性率存在關聯性(χ2=33.209，P<0.05,r=-0.474，見表2)。

2.7不同年齡和臨床特征宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較不同臨床分期的宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異有統計學意義(P<0.05)；其中臨床分期為Ⅱ期、Ⅲ期的宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率低于臨床分期為Ⅰ期的宮頸癌患者，差異有統計學意義(P<0.05)；不同年齡、病理分級、腫瘤直徑及有無淋巴結轉移的宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表3)。

注：N為空白對照，1為對照組，2為宮頸癌組，3為CINⅠ組，4為CINⅡ～Ⅲ組，U表示非甲基化，M表示甲基化；CIN=宮頸上皮內瘤變

圖1MSP法檢測IL-17基因啟動子區CpG島甲基化狀態的2%瓊脂糖凝膠電泳結果

Figure 12% agarose gel electrophoresis results of CpG island methylation status in IL-17 gene promoter was detected by MSP

注：MSP=甲基化特異性PCR

圖2MSP測序驗證

Figure 2Sequencing verification of MSP

表2宮頸組織中IL-17基因啟動子區CpG島甲基化狀態與HPV16 DNA感染的結果

Table 2Correlation between CpG island methylation status of IL-17 gene promoter and HPV16 DNA infection in cervical tissues

IL-17基因啟動子區CpG島甲基化HPV16DNA+ -合計+3657 93 -48 7 55 合計8464148

注：IL-17=白介素17；HPV=人乳頭瘤病毒

表3不同年齡和臨床特征宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率比較〔n(%)〕

Table 3Comparsion of CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter of cervical cancer patients in different ages and clinical features

項目例數IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率χ2值P值年齡(歲)0.1960.658 <501910(23.3) ≥502411(25.6)病理分級4.5620.109 高分化鱗癌76(14.0) 中分化鱗癌239(20.9) 低分化鱗癌136(14.0)臨床分期8.7680.014 Ⅰ期2517(39.5) Ⅱ期113(7.0)a Ⅲ期71(2.3)a腫瘤直徑(cm)1.9830.203 <32912(27.9) ≥3149(20.9)淋巴結轉移0.6010.438 有127(16.3) 無3114(32.6)

注：病理分級及臨床分期的兩兩比較采用Fisher′s確切概率法，其余采用χ2檢驗；與臨床分期為Ⅰ期的患者比較，aP<0.05

3　討論

宮頸癌是由慢性宮頸炎癥經歷各種癌前病變演變而成。高危型HPV持續感染是宮頸癌發病的主要影響因素，而單獨HPV感染不足以引起宮頸癌。IL-17是主要由Th亞群分泌的促炎性細胞因子，具有強大的招募、激活中性粒細胞的功能，在促進細胞增殖及新生血管生成過程中發揮重要作用。目前，IL-17在宮頸癌變過程中發揮腫瘤促進作用還是抑制作用尚存在爭議[11]。細胞因子DNA甲基化能改變腫瘤細胞的惡性程度[12]。HASHIMOTO等[13]研究證實，IL-8基因甲基化水平降低能促使IL-8水平升高，促進腫瘤的發生、發展。CAMPOS等[14]研究顯示，干擾素γ(IFN-γ)基因甲基化水平升高能使具有病毒、抗腫瘤和免疫調節功能的IFN-γ水平下降，促使牙根尖腫物的形成。因此本研究從IL-17基因啟動子區CpG島甲基化角度探討其在宮頸癌病變過程中的表達情況及其與高危型HPV感染的關系，為宮頸癌的發生、發展提供科學理論依據。

本研究結果顯示，CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率低于對照組；CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組、宮頸癌組IL-17 mRNA表達水平均高于對照組，且IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17mRNA表達水平呈負相關，IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率和HPV 16 DNA感染陽性率存在關聯性。因此推測IL-17在宮頸癌變過程中發揮腫瘤促進作用，分析原因為：IL-17一方面可以促進宮頸癌細胞分泌IL-6和IL-8，協同促進腫瘤細胞的生長，加速腫瘤周圍血管的形成；另一方面與存在于細胞膜上的跨膜蛋白白介素17受體C(IL-17RC)特異性結合，激活多條信號轉導通路,促進腫瘤細胞的生長與增殖。青文婕等[15]研究表明，在裸鼠體內植入人宮頸癌細胞，發現IL-17可促進人宮頸癌細胞增生，在腫瘤部位促進IL-6分泌，激活巨噬細胞浸潤及抑制抗腫瘤功能。IL-17可促進人宮頸癌細胞增長，使腫瘤體積明顯增大。鄧康麗[16]的研究亦表明，IL-17能促進人宮頸癌HeLa細胞株的體外增殖、抑制人宮頸癌HeLa細胞的凋亡。IL-17RC啟動子區CpG島的低甲基化在眼局部炎癥、滲出、新生血管形成的過程中發揮了一定作用[17]。同時BENARD等[18]、張哲雄等[19]和薛紀森等[20]研究均表明，HPV感染陽性患者、宮頸癌患者的IL-17水平均較HPV陰性患者明顯增高，提示IL-17與宮頸癌的發生、發展存在一定關系，本研究亦證實該觀點。因此本研究認為，IL-17基因啟動子區CpG島的低甲基化狀態可能與HPV感染協同促進了宮頸癌的發生、發展。但由于本研究樣本量較少，且本研究僅針對唐山地區婦女，因此可能存在一定偏倚，仍需以后繼續擴大樣本量及地域范圍深入研究。

分析宮頸癌患者IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與年齡、臨床特征的關系，結果顯示，IL-17基因啟動子區CpG島的甲基化率與年齡、病理分級、腫瘤直徑、淋巴結狀態無關，但與臨床分期存在一定聯系，提示IL-17基因啟動子區CpG島甲基化與宮頸癌的惡性進展可能有關。宋利[21]研究亦證實IL-17表達水平和宮頸癌的臨床分期有關，宮頸癌晚期患者的IL-17表達水平高于宮頸癌早期患者，而IL-17基因啟動子區CpG島甲基化水平的降低是其表達水平升高的重要因素。IL-17基因啟動子區CpG島的低甲基化可能是促使宮頸癌病情進展的一個重要因素，IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率可作為預測宮頸癌預后的早期指標。

綜上所述，宮頸癌組織IL-17基因啟動子區CpG島甲基化率與IL-17 mRNA表達水平呈負相關，與HPV16 DNA陽性率存在關聯性，推測IL-17基因啟動子區CpG島低甲基化狀態可抑制宮頸癌患者免疫功能，為臨床診斷和免疫治療宮頸癌提供參考。

作者貢獻：袁陸進行試驗設計與實施、撰寫論文、成文并對文章負責；張麗杰、李鷗、楊艷艷、張琪、王新月、耿美麗、王洋進行試驗實施、資料收集，姜春陽進行文章評估，馬冬進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

[1]DIMAIO D,LIAO J B.Human papillomaviruses and cervical cancer[J].Adv Virus Res,2006,66:125-159.

[2]薛旻,俞文菊,朱凱.宮頸癌及癌前病變中IL-17表達和HPV感染的相關性研究[J].中華腫瘤防治雜志,2011,18(9):701-703.

XUE M，YU W J，ZHU K.Expression of IL-10 in cervical cancer and precancerous lesion and its correlation with HPV infection[J].Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment,2011,18(9):701-703.

[3]WOODMAN C B,COLLINS S I,YOUNG L S.The natural history of cervical HPV infection:unresolved issues[J].Nat Rev Cancer,2007,7(1):11-22.

[4]SHEU B C,CHANG W C,LIN H H,et al.Immune concept of human papillomaviruses and related antigens in local cancer milieu of human cervical neoplasia[J].J Obstet Gynaecol Res,2007,33(2):103-113.

[5]楊麗娟.Th17 細胞抗腫瘤作用及其機制研究[D].石家莊：河北醫科大學,2010.

[6]童丹,宋文靜.IL-17、IL-6和TGF-β1在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達及臨床意義[J].中國婦幼保健,2014,29(24):3984-3986.

TONG D，SONG W J.Expressions and clinical significances of IL-17,IL-6 and TGF-β1 in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer[J].Maternal & Child Health Care of China,2014,29(24):3984-3986.

[7]DAS P M，SINGAL R.DNA methylation and cancer[J].J Clin Oncol，2004,22(22):4632-4642.

[8]謝幸，茍文麗.婦產科學[M].北京:人民衛生出版社，2013：306-307.

[9]朱雄增.學習和掌握腫瘤的WHO分類,提高病理診斷和研究的水平[J].中華病理學雜志,2006,35(11):646-650.

ZHU X Z.Understanding WHO classification of tumors[J].Chinese Journal of Pathology,2006,35(11):646-650.

[10]馬冬,于曉牧,吳尚青,等.IL-10-592多態性與唐山地區漢族女性HPV相關性宮頸癌[J].中國婦幼保健,2011,26(2):172-175.

MA D，YU X M，WU S Q，et al.Study on IL-10-592A/C polymorphism in high risk-HPV16/18-associated cervical carcinoma in Tangshan[J].Maternal & Child Health Care of China,2011,26(2):172-175.

[11]WILKE C M,KRYCZEK I,WEI S,et al.Th17 cells in cancer:help or hindrance?[J].Carcinogenesis,2011,32(5):643-649.

[12]CHERNOV A V,STRONGIN A Y.Epigenetic regulation of matrix metalloproteinases and their collagen substrates in cancer[J].Biomol Concepts,2011,2(3):135-147.

[13]HASHIMOTO K,OTERO M,IMAGAWA K,et al.Regulated transcription of human matrix metalloproteinase 13 (MMP 13) and interleukin-1β(IL1B) genes in chondrocytes depends on methylation of specific proximal promoter CpG sites[J].J Biol Chem,2013,288(19):10061-10072.

[14]CAMPOS K,GOMES C C,DE FTIMA CORREIA-SILVA J,et al.Methylation pattern of IFNG in periapical granulomas and radicular cysts[J].J Endod,2013,39(4):493-496.

[15]青文婕,呂莎,侯倩男,等.白細胞介素-17 在婦科腫瘤中的研究進展[J].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版),2010,6(5):363-366.

QING W J,LYU S,HOU Q N，et al.Updated progress of interleukin-17 in gynecological tumors[J].Chinese Journal of Obstetrics & Gynecology and Pediatrics(Electronic Edition)，2010,6(5):363-366.

[16]鄧康麗.IL-17對人宮頸癌細胞株HeLa體外增殖的影響及作用機制的研究[D].長春：吉林大學,2013.

[17]吳文婷.IL-17RC低甲基化影響葡萄膜炎的機制研究及中藥治療葡萄膜炎的臨床體會[D].北京：北京中醫藥大學,2014.

[18]BENARD V B,WATSON M,CASTLE P E,et al.Cervical carcinoma rates among young females in the United States[J].Obstet Gynecol,2012,120(5):1117-1123.

[19]張哲雄,徐承來,曹永濤.高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細胞中表達的相關性和臨床意義[J].中國實驗診斷學,2012,16(2):252-254.

ZHANG Z X,XU C L,CAO Y T.Correlations between human papillomavirus testing and Interleukin-17 in cervical exfoliated cells with cervical cancer and its clinical significonce[J].Chinese Journal of Laboratory Diagnosis,2012,16(2):252-254.

[20]薛紀森,陳騁,朱華,等.IL-17 在高危型HPV陽性宮頸癌中的表達[J].溫州醫科大學學報,2016,46(1):24-27.

XUE J S,CHEN C,ZHU H，et al.The expression of IL-17 in the cervical cancer with high-risk human papillomavirus infection[J].Journal of Wenzhou Medical University,2016,46(1):24-27.

[21]宋利.宮頸癌患者血清中IL-17水平的檢測及臨床意義[J].現代預防醫學,2012,39(19):4966-4967.

SONG L.Detection and clinical significance of cervical cancer patients′ serum IL-17 level[J].Modern Preventive Medicine,2012,39(19):4966-4967.

(本文編輯：毛亞敏)

Correlation between CpG Island Methylation in IL-17 Gene Promoter and Cervical Cancer

YUANLu,ZHANGLi-jie,LIOu,YANGYan-yan,ZHANGQi,WANGXin-yue,GENGMei-li,JIANGChun-yang,WANGYang,MADong.

NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,KeyLaboratoryofHebeiCoalOccupationalHealthandSafety,Tangshan063000,ChinaCorrespondingauthor:MADong,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,KeyLaboratoryofHebeiCoalOccupationalHealthandSafety,Tangshan063000,China;E-mail:mamamadong@163.com

ObjectiveTo investigate the correlation between CpG island methylation of IL-17 gene promoter and cervical cancer,and to provide new ideas for clinical diagnosis and immunotherapy of cervical cancer.Methods43 cervical cancer patients (cervical cancer group) and 62 patients with precancerous lesions〔23 cases with CINⅠ(CINⅠ group),39 cases with CINⅡ～Ⅲ(CINⅡ～Ⅲ group)〕 who received treatment in Inpatient Department of Tangshan Gongren Hospital from March 2011 to May 2012 were selected,and another 43 patients who had undergone total abdominal hysterectomy in this hospital at the same period due to uterine fibroids were enrolled as control group.Cervical tissue specimens of patients in four groups were obtained by surgery.DNA in cervical tissue of patients in four group was extracted to make a detection of HPV16 DNA,CpG island methylation status in IL-17 gene promoter was detected by using CpG island methylation specific PCR (MSP),IL-17 mRNA expression levels were detected by semi-quantitative reverse transcription PCR (RT-PCR),correlation between CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter and IL-17 mRNA expression levels,and the relevance of this rate to the positive rate of HPV16 DNA were analyzed,and CpG island methylation status of IL-17 gene promoter in cervical cancer patients of different ages and clinical features were also analyzed.ResultsHPV16 DNA positive rates in four groups were significantly different (P<0.001).CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter in CINⅡ～Ⅲ group and cervical cancer group was significantly lower than that in control group(P<0.01);CpG island methylation rates of IL-17 gene promoter in CINⅠ group and control group,CINⅠ group,CINⅡ～Ⅲ group,cervical cancer group were not significantly different (P> 0.05);CpG island methylation rates of IL-17 gene promoter between CINⅠgroup and CINⅡ～Ⅲ group were not significantly different (P>0.05).The expression levels of IL-17 mRNA in CINⅠ group,CINⅡ～Ⅲ group and cervical cancer group were higher than those in control group (P<0.05);the expression levels of IL-17 mRNA in CINⅠgroup,CINⅡ～Ⅲ group and cervical cancer group was not significantly different (P>0.05);the expression level of IL-17 mRNA between CINⅡ～Ⅲ group and cervical cancer group was not significantly different (P>0.05).According to the detected results of CpG island methylation in IL-17 gene promoter,all patients were divided into patients with CpG island methylation of IL-17 gene promoter (93 cases) and non-methylation patients (55 cases),IL-17 mRNA expression level of patients with CpG island non-methylation in IL-17 gene promoter was higher than that in methylation patients (P<0.05).In all patients′ cervical tissues,CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter was negatively correlated with its mRNA expression level(rs=-0.627,P<0.05).There was correlation between CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter in all patients′ cervical tissue and infection positive rates of HPV16 DNA (χ2=33.209,P<0.05,r=-0.474).CpG island methylation rate of IL-17 gene promoter in cervical cancer patients at Ⅱ and Ⅲ clinical stages were lower than that of patients at Ⅰ clinical stage (P<0.05);CpG island methylation rates of IL-17 gene promoter among cervical cancer patients of different ages,pathological grading,tumor diameter,and with or without lymph node metastasis were not significantly different (P>0.05).ConclusionCpG island methylation of IL-17 gene promoter is related with high-risk HPV16 infection,CpG island methylation of IL-17 gene promoter may be associated with the occurrence and development of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms；Interleukin-17；DNA methylation；CpG islands；Human papillomavirus 16

國家自然科學基金資助項目(81541149)；河北省青年科學自然基金(H 2016209046)

063000河北省唐山市，華北理工大學，河北省煤炭職業衛生與安全重點實驗室(袁陸，張琪，王新月，王洋，馬冬)；唐山工人醫院婦科(張麗杰，李鷗，楊艷艷，耿美麗)；天津市人民醫院胸外科(姜春陽)

馬冬，063000河北省唐山市，華北理工大學，河北省煤炭職業衛生與安全重點實驗室；E-mail：mamamadong@163.com

R 737.33

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.27.009

2016-03-06；

2016-08-12)