血清巨噬細胞抑制因子-1在肝癌患者中的臨床診斷價值△

王騰　田海梅　李茉　張超　李艷芬　劉靜　王小兵　齊軍　吳健雄　張偉#

北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院1生物檢測中心，2檢驗科，3腹外科，北京　100021

血清巨噬細胞抑制因子-1在肝癌患者中的臨床診斷價值△

王騰1田海梅1李茉1張超1李艷芬1劉靜1王小兵1齊軍2吳健雄3張偉1#

北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院1生物檢測中心，2檢驗科，3腹外科，北京100021

目的初步探討血清中巨噬細胞抑制因子-1（M IC-1）的濃度在肝癌患者中的臨床應(yīng)用價值。方法分別采用雙抗體夾心ELISA法和電化學發(fā)光免疫分析儀檢測271例未經(jīng)治療的肝癌患者，48例肝臟良性疾病患者，30例乙肝攜帶者及104例健康對照者的血清M IC-1濃度和血清甲胎蛋白（AFP）濃度。結(jié)果在肝癌患者中血清M IC-1濃度比較，男性患者高于女性患者，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.255）；有病毒性肝炎史患者高于無病毒性肝炎史患者，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.038）；M IC-1濃度隨肝癌患者臨床巴塞羅那分期（BCLC）進展而升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同分化程度組差異無統(tǒng)計學意義（P=0.146）；不同病理類型，肝細胞癌組高于膽管細胞癌組，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.044）；M IC-1在早期肝癌患者（0期和A期）中顯示出良好的診斷敏感度，優(yōu)于AFP。肝癌患者組血清M IC-1濃度高于肝臟良性疾病組、乙肝攜帶者組及健康對照者；根據(jù)肝癌患者及健康對照者的受試者操作特性曲線（ROC）設(shè)定1.8 ng/m l作為M IC-1診斷肝癌的界值時，特異度和敏感度分別為96.2%和97.4%，高于AFP的96.2%和73.1%。結(jié)論本研究結(jié)果顯示M IC-1可成為理想的癌篩查及診斷血清腫瘤標志物，在肝癌診斷特別是早期診斷方面顯示出良好應(yīng)用前景。

肝癌；巨噬細胞抑制因子-1；腫瘤標志物；臨床價值

Oncol Prog，2016，14（4）

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer）指起源于肝細胞和肝內(nèi)膽管上皮細胞的惡性腫瘤，其中肝細胞癌占90%以上［1］。肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居我國惡性腫瘤第四位，病死率居第二位，僅次于肺癌［2］。全世界肝癌患病和死亡案例中，50%發(fā)生在我國［3］。肝癌早期癥狀不明顯，大部分患者就診時已是中晚期，失去手術(shù)治療機會且預(yù)后差。如果能夠做到早期發(fā)現(xiàn)診斷給予有效的治療，可以顯著提高患者生存率，延長生存時間，提高患者生存質(zhì)量。目前，臨床廣泛應(yīng)用的肝癌輔助診斷標志物為甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP），但受多種因素影響，AFP在肝癌早期診斷中敏感度僅為40%～60%［4-5］。因此僅使用AFP作為篩查和診斷工具會有較高的漏診率［6-9］。超聲是肝癌診斷中最常用最有效的無創(chuàng)檢查手段，但診斷依賴醫(yī)師知識經(jīng)驗及設(shè)備狀態(tài)，難以對腫物良惡性進行區(qū)分，此外超聲存在檢測盲區(qū)，對早期肝癌的檢出率不高［10］。因此，臨床上迫切需要找到一種更加靈敏的血清腫瘤標志物以輔助檢測早期原發(fā)性肝癌。

巨噬細胞抑制因子-1（macrophage inhibitory cytokine-1，M IC-1）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型免疫相關(guān)腫瘤標志物［11］，有研究表明M IC-1在肝癌細胞中高表達并分泌至細胞外，因此可成為早期肝癌較好的診斷標志物［12-13］。本研究通過在較大樣本中檢測肝癌、肝臟良性疾病、乙肝攜帶者及正常人群血清M IC-1水平，并分析肝癌患者M IC-1水平與其臨床特征的關(guān)系，旨在探討M IC-1在肝癌診斷中的臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年7月至2015年2月中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院門診及住院的肝癌和肝良性疾病患者的血清標本。肝癌及肝良性疾病患者均經(jīng)腫瘤醫(yī)院病理科組織病理學診斷確診，且首次采血前未接受過任何治療。其中肝癌患者271例，年齡22～83歲，平均年齡（55.7±10.3）歲，具體資料見表1。肝部良性疾病患者48例，其中男性12例，女性36例，年齡24～74歲，平均年齡（49.2±11.5）歲；病理分類為肝血管瘤21例，肝囊腫12例，肝硬化結(jié)節(jié)7例，肝細胞壞死3例，肝細胞炎癥2例，肝血管平滑肌脂肪瘤2例，神經(jīng)鞘瘤1例。采集中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院防癌科同期的體檢人群中具有完整體檢報告的健康成人和乙肝攜帶者的血清標本。其中乙肝攜帶組男性30例，年齡33～62歲，平均年齡（44±9.3）歲。健康對照組104例，其中男性51例，女性53例，年齡19～74歲，平均年齡（47.2± 12.7）歲。

1.2血清樣品的采集

采用帶有惰性分離膠的進口真空采血管采集入組患者和體檢者空腹靜脈血4 m l，自然凝集30 m in、8℃，4000 rpm離心15 m in分離血清，分裝并-80℃保存待測。

1.3MIC-1的測定方法

M IC-1檢測試劑盒由中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院生物檢測中心研發(fā)，北京金紫晶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)并提供。采用生物素-親和素放大系統(tǒng)的ELISA雙抗體夾心兩步法，以伯樂公司imark酶標儀，450 nm、655 nm雙波長檢測各孔OD值。操作嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行。

1.4AFP的測定方法

采用Cobas 601電化學發(fā)光免疫分析儀及配套試劑盒（Roche公司）進行檢測。操作嚴格按照儀器和試劑盒使用說明書進行，高、低質(zhì)控品值均在要求范圍內(nèi)。

表1　271例肝癌患者的基本臨床特征

1.5統(tǒng)計學方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計算各組的血清M IC-1濃度均值（±s）和中位數(shù)。Mann-Whitney U檢驗分析各組M IC-1濃度，Wilcoxon檢驗分析配對樣本，ROC曲線分析M IC-1檢測效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1肝癌組內(nèi)的MIC-1濃度比較2.1.1根據(jù)性別分組肝癌組男性患者血清M IC-1濃度為（6.33±3.72）ng/m l，女性為（5.66±3.31）ng/m l，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.255）。

2.1.2根據(jù)有無肝炎病史分組肝癌組有病毒性肝炎史的患者血清M IC-1濃度為（6.40±3.80）ng/m l，高于無病毒性肝炎史患者的（5.12±2.42）ng/m l，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.038）。

2.1.3根據(jù)臨床分期分組肝癌組中，0期（極早期）患者血清M IC-1濃度為（3.73±0.56）ng/m l；A期（早期）患者血清M IC-1濃度為（4.54±2.31）ng/m l；B期（中期）患者血清M IC-1濃度為（5.96±3.75）ng/m l；C期（晚期）患者血清M IC-1濃度為（6.65±3.78）ng/m l。M IC-1濃度隨患者臨床BCLC分期增高而升高（P＜0.01）。其中，C期患者的血清M IC-1濃度高于0期和A期患者的血清M IC-1濃度（P＜0.05）。B期患者血清M IC-1濃度高于0期患者的血清M IC-1濃度（P＜0.05）。（圖1）

圖1　肝癌組不同臨床分期患者血清M IC-1濃度比較

2.1.4根據(jù)分化程度分組根據(jù)臨床病理診斷將肝癌組患者分為3組，低分化+中低分化組24例，中分化組47例，高分化組20例。ELISA檢測結(jié)果顯示，低+中低分化組血清M IC-1濃度為（4.39±2.15）ng/m l，中分化組血清M IC-1濃度為（4.77±2.32）ng/m l，高分化組血清M IC-1濃度為（4.22±1.84）ng/m l。各亞組的血清M IC-1濃度差異無統(tǒng)計學意義（P=0.146）。

2.1.5根據(jù)病理類型分組根據(jù)病理類型分組，肝細胞癌組254例，膽管細胞癌組14例，肝細胞癌組的M IC-1濃度為（6.30±3.74）ng/m l，高于膽管細胞癌組的（4.17±0.28）ng/m l，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P=0.044）。

2.2肝癌、肝良性疾病、健康對照及乙肝攜帶組間MIC-1濃度比較

比較肝癌、肝良性疾病、健康對照及乙肝攜帶組的血清M IC-1濃度，結(jié)果顯示肝癌組M IC-1水平均顯著高于其他3組（P＜0.01）；肝良性疾病組M IC-1濃度顯著高于乙肝攜帶組（P＜0.01）及健康對照組（P＜0.01）；乙肝攜帶組M IC-1濃度顯著高于健康對照組（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2　肝癌、肝良性疾病、健康對照及乙肝攜帶組的M IC-1濃度中位數(shù)及四分位間距值（ng/m l）

2.3MIC-1和AFP診斷肝癌的價值比較

分別以肝癌和正常對照組的M IC-1和AFP濃度繪制ROC曲線，M IC-1的曲線下面積顯著優(yōu)于AFP，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。以1.80 ng/m l M IC-1水平作為診斷肝癌的界值時，約登指數(shù)最大，特異度和敏感度分別為96.2%、97.4%；以4.94 ng/m l AFP水平為診斷界值時，約登指數(shù)最大，特異度和敏感度分別為96.2%、73.1%；M IC-1的敏感度高于AFP，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（圖2、表3）

2.4MIC-1與AFP在肝癌早期的診斷效能

通過檢測早期肝癌患者（BCLC分期中0和A期）血清M IC-1與AFP濃度，比較兩種標志物在早期肝癌的檢出率。結(jié)果顯示M IC-1在早期肝癌患者中有良好的診斷敏感性，遠優(yōu)于AFP（P＜0.01），提示M IC-1在肝癌早期診斷中具有較好的診斷價值。（表4）

圖2　M IC-1和AFP肝癌診斷效能的ROC曲線

3　討論

M IC-1作為TGF-β家族成員，廣泛參與細胞凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學過程。正常人血清中的成熟M IC-1蛋白呈低水平穩(wěn)定表達，在某些病理狀態(tài)下如腫瘤、急性損傷及炎癥時其表達可顯著升高［14］。對多種類型腫瘤患者的血清M IC-1濃度進行檢測，發(fā)現(xiàn)腫瘤患者血清M IC-1濃度高于正常對照，其升高時間早于其他通用的腫瘤標志物，有望成為具有能早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的新腫瘤標志物［15-18］。

本研究應(yīng)用自主研發(fā)的血清M IC-1檢測試劑盒，對肝癌患者、肝臟良性疾病患者、乙肝攜帶者及健康對照者血清M IC-1濃度進行了檢測。檢測結(jié)果顯示肝癌患者血清M IC-1濃度顯著高于健康對照組、乙肝攜帶者組和肝臟良性疾病組；肝臟良性疾病患者血清M IC-1濃度也有增高，說明血清M IC-1濃度可提示疾病的嚴重程度和對肝臟的損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)在肝癌患者中，血清M IC-1濃度隨肝癌進展程度而逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學意義（結(jié)果見圖2），顯示血清M IC-1濃度與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為評估肝癌發(fā)生及進展的檢測指標應(yīng)用于臨床。

表3　M IC-1和AFP的診斷效能指標

表4　肝癌組早期患者M IC-1與AFP的陽性檢出率［n（%）］

為了獲得血清M IC-1檢測肝癌的最佳臨界值，本研究基于肝癌組（包括早期肝癌患者和中晚期肝癌患者）的血清M IC-1濃度繪制了ROC曲線，綜合血清標志物檢測的靈敏度和特異度，選擇1.80 ng/m l作為M IC-1檢測肝癌的界值。在該界值下，M IC-1檢測肝癌的靈敏度為97.4%，特異度為96.2%，AFP靈敏度為73.1%，特異度為96.2%，M IC-1檢測結(jié)果顯著高于AFP。ROC曲線的分析結(jié)果進一步證明，M IC-1對于肝癌的診斷能力顯著優(yōu)于AFP（P＜0.01）。

作為早期篩查使用的腫瘤標志物，要求在腫瘤發(fā)生的早期就有較好的敏感度和特異度，本研究比較了M IC-1和AFP在早期（0期及A期）肝癌患者中的診斷能力。結(jié)果顯示，在特異度相同的情況下M IC-1檢測早期肝癌的陽性率為97.3%，顯著高于AFP（63.7%）。對肝癌患者的早期篩查具有重要意義。

在研究M IC-1與肝癌組織分化程度與病理類型中發(fā)現(xiàn)，M IC-1在不同肝癌組織分化程度和病理類型之間差異并無統(tǒng)計學意義，表明M IC-1對不同分化程度及病理類型的肝癌都有較高的檢出效能。

綜上所述，血清M IC-1濃度的檢測對于肝癌的診斷效能優(yōu)于AFP，可以有效補充AFP的不足，作為一種新的腫瘤標志物在輔助肝癌早期診斷中具有重要價值。

［1］衛(wèi)生部.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）［J］.臨床腫瘤學雜志，2011，16（10）:929-946.

［2］陳萬青，鄭榮壽，曾紅梅，等.2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析［J］.中國腫瘤，2015，24（1）:1-10.

［3］Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics［J］.CACancer J Clin，2011，61（2）:69-90.

［4］Yokoyama N，Shirai Y，Ajioka Y，et al.Immunohistochemically detected hepatic m icrometastases predict a high risk of intrahepatic recurrence after resection of colorectal carcinoma liver metastases［J］.Cancer，2002，94（6）:1642-1647.

［5］Lee CY，K HCP.Liver transplantation for hepatocellular carcinoma:an appraisal of current controversies［J］.Liver Cancer，2012，1（3-4）:183-189.

［6］Braillon A.Is the american association for the study of liver diseases recommendation for hepatocellular carcinoma screening a cul-de-sac［J］.World J Gastroenterol，2013，19（21）:3369-3370.

［7］Daniele B，Bencivenga A，Megna AS，et al.Alpha-fetoprotein and ultrasonography screening for hepatocellular carcinoma［J］.Gastroenterology，2004，127（5 Suppl 1）:108-112.

［8］Sterling RK，Wright EC，Morgan TR，et al.Frequency of elevated hepatocellularcarcinoma（HCC）biomarkersin patients w ith advanced hepatitis C［J］.Am J Gastroenterol，2012，107（1）:64-74.

［9］Tamura Y，Igarashi M，Suda T，et al.Fucosylated fraction of alpha-fetoprotein as a predictor of prognosis in patients w ith hepatocellular carcinoma after curative treatment［J］. Dig Dis Sci，2010，55（7）:2095-2101.

［10］郭萬學，燕山，楊浣宜，等.超聲醫(yī)學［M］.6版.北京:人民軍醫(yī)出版社，2011:84.

［11］Bootcov MR，Bauskin AR，Valenzuela SM，et al.M IC-1，a novel macrophage inhibitory cytokine，is a divergent member of the TGF-beta superfam ily［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，1997，94（21）:11514-11519.

［12］Liu X，Chi X，Gong Q，et al.Association of serum level of grow th differentiation factor 15 w ith liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma［J］.PLoS One，2015，10（5）: e0127518.

［13］劉開坤，查斌山，劉悅芳，等.GDF15在大鼠早期肝癌和人小肝癌組織中的表達［J］.南京醫(yī)科大學學報（自然科學版），2008（4）:439-444.

［14］Bauskin AR，Brown DA，Kuffner T，et al.Role of macrophage inhibitory cytokine-1 in tumorigenesis and diagnosis of cancer［J］.Cancer Res，2006，66（10）:4983-4986.

［15］付超，齊軍，張偉.M IC-1作為腫瘤標志物的研究進展［J］.癌癥進展，2011，9（4）:355-360.

［16］付超，王小兵，田海梅，等.肺癌患者血清中巨噬細胞抑制因子-1水平初探［J］.癌癥進展，2011（4）:384-388.

［17］趙文雅，王小兵，田海梅，等.巨噬細胞抑制因子-1聯(lián)合多種標志物在結(jié)直腸癌診斷中的價值研究［J］.癌癥進展，2014（3）:291-297.

［18］王小兵，付超，吳凡，等.胰腺癌患者血清中巨噬細胞抑制因子-1的大樣本臨床研究［J］.癌癥進展，2011，9（4）: 367-373.

Clinical value of serum M IC-1 level in patients w ith liver cancer△

WANG Teng1TIAN Hai-mei1LI Mo1ZHANG Chao1LI Yan-fen1LIU Jing1WANG Xiao-bing1QI Jun2WU Jian-xiong3
ZHANG Wei1#1Tumor Marker Research Center，2Clinical Laboratory，3Department of Abdom inal Surgery，Cancer Institute&Hospital，Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100021，China

Objective To study the clinical value of serum macrophages inhibitory cytokine-1（M IC-1）in patients w ith liver cancer.Method Serum levels of M IC-1 and AFP in 271 patients w ith liver cancer were detected by double-antibody ELISA Kit and Roche Cobas 601 ECL analyzer，in which 48 cases were w ith benign liver disease，30 were HBV carriers，and there were 104 healthy subjects.Results M IC-1 level in male patients was higher than that in females，w ith no significant differences observed（P=0.255）；And patients w ith history of viral hepatitis had higher M IC-1 level than those w ithout（P=0.037）；M IC-1 level elevated as the clinical progression of BCLC increased（P＜0.05）；The M IC-1 levels in all subgroups of differentiation were sim ilar（P=0.146）；While in respect of pathological types，M IC-1 was significantly higher in hepatocellular carcinoma than in cholangiocarcinoma（P=0.044）；It was demonstrated that M IC-1 was of superior sensitivity compared w ith AFP in diagnosing patients w ith liver cancer in early stage（stage 0 and A）；When the cutoff value of M IC-1 was set at 1.8 ng/m l in ROC curve of liver cancer patients vs healthy subjects，the specificity and sensitivity of M IC-1 were 96.2%and 97.4%，and were better than AFP at 96.2%and 73.1%，respectively.Conclusion Our results suggest that M IC-1 may be an ideal serum marker for screening and diagnosis of liver cancer，especially in the early stage.

liver cancer；macrophage inhibitory cytokine-1；tumor marker；clinical value

R735.7

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.10

2015-12-22）

國家自然科學基金（81441080；81502023）；北京市科技計劃課題（Z121107001012066）

（corresponding author），郵箱：zhangww1954@126.com