外周血T淋巴細胞亞群檢測在胃癌病情監測及預后評價中的意義

王展梅　曹芳麗　曲琳莉　王歡

山東大學齊魯醫院（青島）化療科，山東　青島　266000

外周血T淋巴細胞亞群檢測在胃癌病情監測及預后評價中的意義

王展梅曹芳麗曲琳莉#王歡

山東大學齊魯醫院（青島）化療科，山東青島266000

目的探討外周血T淋巴細胞亞群檢測在胃癌病情監測及預后評價中的價值。方法選擇100例胃癌患者作為胃癌組，患者采用mFOLFOX6方案，2周為1個療程，每位患者化療4個療程以上。另選擇同期在醫院體檢的健康人群80例作為對照組，采用流式細胞儀技術檢測兩組外周血T淋巴細胞亞群水平。結果化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01）。Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統計學意義（P＜0.01）。不同療效的胃癌患者化療前外周血T淋巴細胞亞群水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），化療后CR+ PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，差異有統計學意義（P＜0.01），且CR+ PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論通過檢測血清外周血T淋巴細胞亞群水平能夠有助于評估胃癌的病情和預后。

T淋巴細胞；胃癌；臨床分期；預后

Oncol Prog，2016，14（4）

胃癌是臨床上常見的消化系統腫瘤［1］，化療是治療胃癌的主要手段之一。然而臨床上依然存在部分患者對化療不敏感或療效不佳，若能在此時及時調整治療方案對臨床治療具有重要的指導意義。目前用于評價胃癌臨床療效及預后的指標較多，包括癌胚抗原、糖類抗原等血清生物標志物，但是這些指標均存在敏感性不高等缺點［2-3］，限制了其臨床應用。目前研究證實胃癌的發生、發展與免疫功能密切相關，當機體免疫功能失調可以在一定程度上預測腫瘤的預后及進展。國外研究顯示，宿主對腫瘤組織存在自然抵抗作用，機體的免疫應答能夠部分清除腫瘤細胞；其中由T淋巴細胞所介導的細胞免疫在抗腫瘤方面發揮著重要作用［4］。鑒于此，本研究對擬行化療的胃癌患者化療前后外周血T淋巴細胞亞群水平進行檢測，評估外周血T淋巴細胞亞群在胃癌的療效、預后評價中的價值，現將研究結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2011年3月至2013年5月醫院收治的100例胃癌患者作為胃癌組，男57例，女43例，年齡27～82歲，平均（59.3±7.5）歲；按照國際抗癌聯盟腫瘤TNM分期［5］：Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ期62例。納入標準：①經病理學證實為原發性胃癌初治患者；②患者擬行新輔助化療，對于有手術指征者，待4個療程化療結束后再擇期行手術切除；③化療前卡氏評分≥60分，預計生存期≥3個月；④告知患者及家屬治療目的、方案及不良反應，經患者同意并簽署知情同意書。排除標準：①合并代謝性疾病或自身免疫性疾病者；②患者入組前1個月內使用免疫抑制劑者；③肝、腎功能嚴重衰竭或其他重要臟器疾病者；④合并全身嚴重感染或治療中途自愿放棄治療者。另選擇同期在醫院體檢的健康人群80名作為對照組，納入標準：①體格檢查正常；②告知受試者研究目的，并取得受試者知情同意。排除標準：①凝血功能異常，長期服用糖皮質激素或免疫抑制劑；②肝腎功能損害或其他臟器疾病。對照組男43名，女37名，年齡22～85歲，平均（60.1±8.3）歲。胃癌組與對照組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法胃癌組采用mFOLFOX6方案：奧沙利鉑85 mg/m2，d1，靜脈滴注；亞葉酸鈣400 mg/m2，d1，靜脈滴注2 h；氟尿嘧啶400 mg/m2，d1，靜脈推注，后2400 mg/m2，加入Baxter輸液泵持續靜脈輸注46 h；每2周為1個療程，每位患者化療4個療程以上。患者化療前常規進行止吐等預處理，化療后門診定期檢查血常規、肝腎功能。

1.2.2檢查方法胃癌組分別于化療前與化療4個療程后抽取肘靜脈血3 ml，對照組于體檢時抽取肘靜脈血3 ml，置于抗凝管中；分離單個核細胞，并用PBS緩沖液將細胞懸液配制成2×105/ml；1500 r/min離心5min后再分別滴加鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體；加入1 ml PBS緩沖液混勻后于2 h內上機檢測，采用貝克曼CytoFLEX流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD4+、CD8+水平。

1.3評價標準

參考實體瘤療效評價標準RECIST1.1版［6］進行評價。完全緩解（CR）：瘤體完全消失并持續4周以上；部分緩解（PR）：瘤體最大單徑之和減少30%以上并保持4周以上，病灶周圍未發現新病灶；穩定（SD）：腫瘤最大單徑之和減少不超過30%或增加不超過20%并保持4周以上；疾病進展（PD）：腫瘤最大單徑之和增加20%以上或出現新病灶。其中客觀有效率=（CR+PR）例數/總例數×100%。

1.4統計學方法

采用SPSS19.0統計-學軟件進行檢驗，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，治療前后比較采用配對t檢驗，兩組間比較采用成組t檢驗，多組間比較采用one-way ANOVA單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1化療前兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），詳見表1。

表1　化療前兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

表1　化療前兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

組別胃癌組（n=100）對照組（n=80）t值P值CD3+（%）0.81±0.17 1.60±0.34 20.033＜0.01 CD4+（%）0.52±0.12 0.88±0.23 13.525＜0.01 CD8+（%）0.85±0.21 0.54±0.14 11.338＜0.01 CD4+/CD8+0.63±0.21 1.58±0.52 16.658＜0.01

2.2胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細胞亞群水平比較

Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統計學意義（P＜0.01），詳見表2。

表2　胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

表2　胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（n=38）Ⅲ～Ⅳ期（n=62）t值P值CD3+（%）1.05±0.32 0.56±0.11 13.805＜0.01 CD4+（%）0.69±0.22 0.48±0.10 7.906＜0.01 CD8+（%）0.73±0.31 1.19±0.21 11.349＜0.01 CD4+/CD8+0.98±0.21 0.46±0.10 20.369＜0.01

2.3胃癌組化療療效

化療4個療程后，胃癌組CR 3例，PR 34例，SD 37例，PD 26例，客觀有效率為37.0%（37/100）。

2.4胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細胞亞群水平比較

不同療效的胃癌患者化療前外周血T淋巴細胞亞群水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），化療后CR+PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，差異有統計學意義（P＜0.01）；且CR+PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，差異有統計學意義（P＜0.01），詳見表3。

3　討論

我國是胃癌的高發區域，其病死率居各類惡性腫瘤的第2位［7］。在胃癌的綜合治療中，化療發揮著重要作用，目前已經將化療應用于聯合手術、放射治療等。Schumacher等［8］證實對于中晚期胃癌患者，在根治性切除后聯合化療能夠顯著提高患者的生存期，并降低腫瘤局部復發和轉移的風險。但是由于化療的個體差異較大，且隨著化療方案的不斷更新，選擇敏感的化療方案對提高患者預后具有重要意義。雖然目前臨床上用于評估化療療效的生化指標較多，然而大多數腫瘤標志物敏感性不高，或特異性較低，當臨床證實化療效果不佳時常已是幾個療程之后，部分患者甚至因此而錯過最佳的治療時機。

表3　胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

表3　胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細胞亞群水平比較（±s）

注：a與化療前比較，P＜0.01；b與PD組比較，P＜0.01；c與SD組比較，P＜0.01

療效CR+PR組（n=66）SD組（n=23）PD組（n=11）F值P值CD3+（%）化療前0.91±0.33 0.84±0.27 0.79±0.20 0.989 0.376化療后0.77±0.14abc0.47±0.09ab0.45±0.05a69.301＜0.01 CD4+（%）化療前0.65±0.13 0.69±0.15 0.61±0.09 1.509 0.226化療后0.37±0.06abc0.24±0.04ab0.21±0.03a77.520＜0.01 CD8+（%）化療前0.83±0.22 0.84±0.25 0.81±0.20 0.066 0.936化療后1.15±0.10abc1.48±0.23ab1.50±0.27a48.511＜0.01 CD4+/CD8+化療前0.69±0.22 0.71±0.26 0.68±0.31 0.079 0.924化療后0.32±0.06abc0.16±0.03ab0.15±0.03a110.503＜0.01

目前研究已證實，腫瘤前期，機體自身免疫系統會通過特異性免疫作用將腫瘤突變細胞殺滅或清除；而惡性腫瘤的發生、發展、復發、轉移均與機體免疫功能降低、腫瘤細胞從機體免疫監控中逃逸有關［9-10］。在機體眾多免疫細胞中，T淋巴細胞所介導的細胞免疫在腫瘤細胞的免疫監控中起著重要作用。Aizawa等［11］報道存在浸潤的腫瘤周圍淋巴細胞中，CD3+、CD4+、CD8+等T淋巴細胞亞群水平出現異常，并認為T淋巴細胞在抗腫瘤免疫效應中起到主要作用。T淋巴細胞的免疫調節作用主要由CD4+、CD8+參與完成，其中CD4+能夠誘導B細胞分化，并產生相應抗體；而CD8+則主要抑制B細胞抗體的合成和T淋巴細胞的增殖。正常情況下CD4+、CD8+保持平衡，共同維持機體正常的免疫應答反應；當細胞發生惡變時，CD4+、CD8+平衡被打破，導致腫瘤細胞逃脫免疫監控，進而形成惡性腫瘤。本研究中，化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，提示相比較于正常人群，胃癌患者的免疫功能顯著減退，其機制可能與腫瘤在形成過程中產生大量免疫抑制因子有關。此外本研究還顯示Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，說明隨著病情的不斷加重，患者的免疫功能進一步降低，患者體內淋巴細胞的活化和增殖受到明顯抑制，機體對突變的腫瘤細胞清除能力也受到抑制。Ubukata等［12］亦證實隨著腫瘤TNM分期的升高，其免疫功能明顯減退，導致對腫瘤的抑制作用也降低，最終疾病不斷惡化。

在療效評估方面，化療后CR+PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，說明化療藥物在發揮抗腫瘤治療的同時也會抑制機體的免疫系統，導致免疫細胞受到損傷。劉驊等［13］報道稱胃癌患者化療3周后CD3+、CD4+會顯著降低，患者免疫功能受到抑制。然而本研究中化療后CR+PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+依然顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，說明不同療效患者外周血T淋巴亞群水平依然存在差異，化療效果越好，免疫損傷程度越低。這亦說明通過檢測外周血T淋巴亞群水平能在一定程度上反映出化療的療效。當然本研究僅對外周血T淋巴細胞亞群水平進行初步分析，本指標的檢測效能以及與其他指標聯合檢測能夠提高其臨床價值，尚需要深入研究。

綜上所述，通過檢測血清外周血T淋巴細胞亞群水平能夠有助于監測胃癌的病情和預后，T淋巴細胞亞群檢測有望成為腫瘤評估的一項簡單、易操作的檢查項目。

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（收稿日期：2015-09-24）

Clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets as prognostic markers in patients with gastric cancer

WANG Zhan-mei CAO Fang-li QU Lin-li#WANG Huan
Department of Oncology，Qilu Hospital of Shandong University，Qingdao 266000，Shandong，China

ObjectiveTo explore the clinical value of peripheral blood T lymphocyte subsets as markers for surveillance and prognosis in patients with gastric cancer（GC）.MethodA total of 100 cases of gastric cancer patients were enrolled as GC group，treated with mFOLFOX6 regimen，with 2 weeks as 1 cycle，and each patient was given 4 cycles of chemotherapy at least.Another 80 cases of healthy adults in clinic during the same period were included as the control group，and the level of T lymphocyte subsets in peripheral blood of the two groups were detected by flow cytometry.ResultBefore chemotherapy，the CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+were significantly lower，and CD8+was higher in GC group compared with that of control group（P＜0.05）；The CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+in GC patients of I-II stage were significantly higher than those of III-IV stage，while the CD8+in the former was significantly lower than that in the latter（P＜0.01）. There was no significant difference in T lymphocyte subsets level in peripheral blood of GC patients with different response before chemotherapy（P＞0.05），After treatment，the CR+PR group，SD group，PD group had decreased peripheral blood CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+，and increased CD8+（P＜0.01），CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+in CR+PR group were significantly higher than，while CD8+was significantly lower than those in SD group and PD group（P＜0.01）.ConclusionDetecting the T lymphocyte subsets in peripheral blood is beneficial in monitoring disease condition and predicting prognosis.

T lymphocytes；gastric cancer；clinical staging；prognosis

R735.2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.22

2016-01-13）

（corresponding author），郵箱：qulinli77@163.com