脊髓灰質(zhì)炎病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法的應(yīng)用與發(fā)展

唐海淑，杜相品，甫爾哈提·吾守爾，范新春，關(guān)　靜 綜述,崔　惠 審校

(新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科，烏魯木齊 830011)

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·綜述·

脊髓灰質(zhì)炎病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法的應(yīng)用與發(fā)展

唐海淑，杜相品，甫爾哈提·吾守爾，范新春，關(guān)靜 綜述,崔惠 審校

(新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科，烏魯木齊 830011)

脊髓灰質(zhì)炎病毒；實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR；應(yīng)用發(fā)展

1996年美國(guó)Applied Biosystems公司推出了實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，該技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法[1-2]。該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，可動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)檢測(cè)核酸產(chǎn)物的形成，無(wú)需后處理過(guò)程，避免了擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，而且具有直觀、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)、敏感性高、定量準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高、速度快、全封閉和易操作等優(yōu)點(diǎn)，因而目前已得到廣泛應(yīng)用[3-4]。

2011年8月新疆維吾爾自治區(qū)局部地區(qū)發(fā)生輸入性脊髓灰質(zhì)炎野病毒(WPV)的疫情后，為了縮短檢測(cè)時(shí)限，中國(guó)決定從2013年起在脊髓灰質(zhì)炎(下稱脊灰)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)啟用世界衛(wèi)生組織推薦的脊灰病毒(PV)分離新的檢測(cè)流程。新檢測(cè)流程要求省級(jí)脊灰實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)培訓(xùn)考核合格后，使用美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心研制的實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(rRT-PCR)試劑和方法，對(duì)分離出的PV進(jìn)行型內(nèi)鑒定(ITD)。

1　實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法

1.1工作原理根據(jù)原理的不同，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法主要分為利用與靶序列特異雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物增加的探針類和利用熒光染料或者特殊設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加非探針類2種[5]。……