慢性乙型肝炎肝硬化3項指標與HBV-DNA載量分析*

鄧小燕,楊　靜,馮桂玲,卓樹洪,劉小敏

(1.廣州醫科大學附屬第二醫院　510260;2廣州醫科大學金域檢驗學院　510182)

?

·臨床研究·

慢性乙型肝炎肝硬化3項指標與HBV-DNA載量分析*

鄧小燕1,楊靜1,馮桂玲1,卓樹洪1,劉小敏2

(1.廣州醫科大學附屬第二醫院510260;2廣州醫科大學金域檢驗學院510182)

目的通過檢測慢性乙型肝炎肝硬化不同病毒載量患者和健康對照組血漿D-二聚體、纖維蛋白原和抗凝血酶，探討上述指標與HBV-DNA載量的關系研究。方法收集慢性乙型肝炎后肝硬化患者103例為研究組，健康人群50例作為對照組，分別測定血清中D-二聚體、纖維蛋白原含量、抗凝血酶活性和HBV-DNA載量。結果慢性乙型肝炎后肝硬化患者不同HBV-DNA載量組的D-二聚體、纖維蛋白原和抗凝血酶活性與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，D-二聚體含量隨病毒載量的增高而升高，纖維蛋白原和抗凝血酶活性隨HBV-DNA載量的增高而降低。結論慢性乙型肝炎后肝硬化中病毒載量患者以抗凝系統受損為主，高病毒載量患者則存在纖溶和抗凝失衡狀態，建議中病毒復制量患者應盡早進行抗病毒干預，維持機體纖溶和抗凝的動態平衡。

乙型肝炎；肝硬化；病毒載量；D-二聚體；纖維蛋白原；抗凝血酶

慢性乙型肝炎患者由于乙肝病毒(HBV)長期、反復損害肝臟，引起廣泛的肝實質損害，肝細胞壞死，纖維組織增生，質地變硬，最終導致肝硬化。肝臟是多數凝血因子、蛋白和酶合成的場所，因此往往存在凝血障礙、蛋白酶含量異常，容易出現出血的癥狀，對患者的生命健康造成威脅。D-二聚體、纖維蛋白原和抗凝血酶活性分別是反映體內纖溶狀態和凝血-抗凝功能較靈敏、準確的指標。本文通過對慢性乙型肝炎不同病毒載量患者和健康對照組的血漿中抗凝血酶、D-二聚體和纖維蛋白原進行檢測，探討慢性乙型肝炎不同病毒載量患者抗凝和纖溶系統的變化，為病情預后的判斷及治療時機的選擇提供指導依據。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇臨床診斷為慢性乙型肝炎后肝硬化住院或者門診患者103例，其中男69例，女34 例,診斷必須符合以下條件：患者必須具有血清HBsAg陽性、肝組織病理學表現為彌散性肝纖維化及結節形成，兩者同時具備才納入病例組。對照組50例，均為同期性別、年齡、種族匹配的體檢健康志愿者。

1.2標本采集標本嚴格按照1∶9抗凝比例，空腹采集靜脈血1.8 mL，加入濃度為0.109 mol/L含有0.2 mL的枸櫞酸鈉抗凝，充分混勻后置于離心機中，3 000 r/min離心20 min，離心后，分離貧血小板血漿待檢D-二聚體含量、抗凝血酶活性和纖維蛋白原含量。采集空腹靜脈血3 mL，離心分離血清置于-20 ℃凍存待檢HBV-DNA。

1.3檢測方法

1.3.1采用實時熒光定量PCR技術檢測HBV-DNA載量，試劑由凱杰生物工程(深圳)有限公司提供，儀器采用羅氏lc480熒光定量PCR儀。按HBV-DNA載量，將研究對象分為低載量組(<103copy/mL)30例，中載量組(103～105copy/mL)41例及高載量組(>105copy/mL)32例。

1.3.2D-二聚體含量、抗凝血酶活性、纖維蛋白原定量采用東亞CA7000全自動凝血分析儀檢測，上述檢測操作步驟及結果判斷嚴格按照試劑盒說明書進行。試驗同時做陽性、陰性定量參考品，在采血后4 h內完成。

2　結　　果

不同HBV-DNA病毒載量組患者D-二聚體含量、纖維蛋白原含量和抗凝血酶活性與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。各HBV-DNA病毒載量組的D-二聚體含量顯著高于對照組(P<0.05)，而抗凝血酶活性、纖維蛋白原含量均顯著低于對照組(P<0.05)，其中高載量組的D-二聚體含量與低載量組相比差異有統計學意義(P<0.05)，高、中載量組的抗凝血酶與低載量組相比差異均有統計學意義(P<0.05)。其余各項指標組間差異無統計學意義，見表1。

表1　　不同HBV-DNA血清3項指標比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與低載量組比較，#P<0.05。

3　討　　論

HBV-DNA侵犯人的肝細胞后，控制從復制、裝備到釋放病毒的全過程，陽性說明體內有活性病毒的復制，而病毒載量的高低決定了病毒復制的高低，病毒載量高則傳染性越大。因此，HBV-DNA的檢測對于監控HBV在人體內的復制情況和病毒數量具有重要的臨床應用價值。近年來，國內對乙肝患者HBV-DNA載量與凝血4項進行了大量的探討，而較少關注HBV-DNA病毒載量與纖溶狀態和抗凝系統的關系[1-2]。眾所周知，肝臟是凝血酶原、凝血因子和抗凝血酶的合成器官，也是合成和滅活纖維蛋白溶解物與抗纖溶物質的主要場所，與凝血-抗凝血、纖溶-抗纖溶的關系極為密切，肝臟發生病變必將對機體正常時所維持的凝血和纖溶兩系統間的平衡造成不利的影響[3]。乙肝后，肝硬化患者更是存在復雜的止血功能紊亂，而纖溶活性升高及其繼發于凝血系統活化是肝硬化的常見并發癥[4]。有研究顯示，纖溶活性隨肝臟的損傷程度加重而增高[5]。本研究以慢性乙型肝炎后肝硬化為研究對象，探討不同HBV-DNA載量分級的慢性乙型肝炎后肝硬化患者中纖維蛋白原、D-二聚體和抗凝血酶的臨床變化規律，評估病毒載量與纖溶或抗凝的關系。

本文結果顯示，各HBV-DNA病毒載量組的纖維蛋白原和D-二聚體與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。纖維蛋白原含量低于對照組，隨著HBV-DNA病毒載量的升高呈下降趨勢，而D-二聚體含量高于對照組，隨著HBV-DNA病毒載量的升高而呈增高趨勢，其中高病毒載量組與低病毒載量組差異有統計學意義(P<0.05)。此現象提示在慢性乙型肝炎后肝硬化患者中，一方面，因肝臟蛋白合成受抑制導致纖維蛋白原合成減少；另一方面可能是HBV的長期存在誘導血管內皮細胞的炎性反應，導致內皮系統受損，纖溶酶原激活增多，纖溶抑制物減少，從而引起纖溶亢進，纖維蛋白過早、過度破壞和纖維蛋白原大量降解，使血漿D-二聚體含量升高[6]。本研究結果提示，慢性乙型肝炎后肝硬化患者在HBV-DNA高載量組的纖溶活性呈現明顯亢進現象，可以推測HBV病毒復制量達到高拷貝水平時，繼發性活化肝臟纖溶系統，纖維蛋白原在纖溶酶的作用下使之降解，導致含量下降，引發D-二聚體含量升高，此時機體處于纖溶活性增強。

抗凝血酶是由肝細胞和血管內皮細胞合成的一種廣譜絲氨酸蛋白酶，是體內最重要的生理抗凝物，主要功能為抑制或滅活凝血酶、因子Ⅻa、Ⅺa、Ⅹa和Ⅶa。本研究發現，各HBV-DNA病毒載量組的抗凝血酶活性與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)，隨著HBV-DNA病毒載量的升高呈下降趨勢，當HBV-DNA含量>103copy/mL時，抗凝血酶活性顯著低于低載量組。此現象說明HBV-DNA含量>103copy/mL時，患者的抗凝系統嚴重受損，容易誘發微血栓的形成。其降低的原因是肝細胞受損合成減少，另一方面是消耗性減少，因此，可以推測在慢性乙型肝炎后肝硬化患者中，中病毒載量有可能是觸發抗凝系統損害的主要因素之一。

綜上所述，慢性乙型肝炎后肝硬化患者處于纖溶和抗凝的雙重激活平衡狀態， HBV-DNA病毒載量處于中復制水平時，患者以抗凝系統受損為主，當病毒載量處于高復制水平時，患者同時存在纖溶活性的亢進和抗凝系統的嚴重受損。因此，為維持慢性乙型肝炎后肝硬化患者纖溶和抗凝的微妙平衡，建議臨床上對于中病毒復制量的慢性乙型肝炎后肝硬化患者應盡早進行抗病毒干預，動態監控抗病毒治療后D-二聚體、纖維蛋白原和抗凝血酶的水平變化，避免在HBV-DNA病毒載量的高水平引發纖溶和抗凝系統的紊亂，預防慢性乙型肝炎后肝硬化出血和DIC并發癥的發生。

[1]楊娜，蒲澤宴，劉祿，等．141例慢性重度乙型肝炎患者凝血功能與HBV標志物模式HBV-DNA載量相關性研究[J]．中國保健營養，2013，22(11)：67-68．

[2]安宏亮，江海燕，伍華林，等．常用凝血指標對慢乙肝肝纖維化的診斷價值[J]．中國衛生檢驗雜志，2014，24(13)：1919-1921．

[3]鐘洪明，黃宇清，曾荔山．D-二聚體、抗凝血酶Ⅲ、凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅸ檢測對肝臟疾病診斷的意義[J]．國際檢驗醫學雜志，2010，31(7)：707-709．

[4]叢玉隆，魏玉香，殷宗健，等．肝硬化患者纖溶活性升高機制的研究[J]．中華檢驗醫學雜志，2005，28(5)：504-507．

[5]尤德宏，張根興，鄧歷．肝硬化患者血漿D-二聚體的變化及其意義[J]．現代中西醫結合雜志，2012，21(25)：2826-2827．

[6]宋向芹，司秀文，張芳，等．慢性乙肝病毒感染者血清血管內皮生長因子的研究[J]．中西醫結合肝病雜志，2012，22(4)：234-235．

廣東省廣州市醫藥衛生科技項目(20151A010099)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.039

A

1673-4130(2016)18-2606-02

2016-02-13

2016-05-22)