MP1全自動干式生化分析儀總膽汁酸檢測性能的評價

李亞麗，沃燕波，趙春燕

(1.甘肅省金昌市疾病預防控制中心　737100；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江寧波 315100；3.寧波美康保生生物醫學工程有限公司，浙江寧波 315100)

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·臨床研究·

MP1全自動干式生化分析儀總膽汁酸檢測性能的評價

李亞麗1，沃燕波2，趙春燕3

(1.甘肅省金昌市疾病預防控制中心737100；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江寧波 315100；3.寧波美康保生生物醫學工程有限公司，浙江寧波 315100)

目的應用EP10-A2文件對MP1全自動干式生化分析儀總膽汁酸(TBA)檢測性能進行評價。方法按照美國國家臨床實驗室標準化委員會(CLSI)頒布的EP10-A2文件，按特定順序測定高、中、低濃度的TBA樣本，連續5 d，計算測定結果的偏差、總不精密度，對截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移進行多元回歸分析。結果低、中、高濃度TBA樣本偏差分別為-0.2、-0.2和-0.3 mol/L；總不精密度分別為1.8%、1.3%和1.2%；截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移分別為-0.051、0.995、0.641、0.000和0.031，其t值分別為-0.255、-1.076、0.340、-1.785和0.642，差異均無統計學意義(P>0.01)。結論MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測準確度、精密度良好，線性良好，攜帶污染率較低，穩定性好，能初步滿足臨床檢測的應用要求。

總膽汁酸；EP 10-A2；評價

健康者肝臟合成的膽汁酸有膽酸、鵝脫氧膽酸和代謝中產生的脫氧膽酸，還有少量石膽酸和微量熊脫氧膽酸，合稱為總膽汁酸(TBA)。健康者的周圍血液中TBA含量極微，當肝細胞受到損害或肝內、外阻塞時，膽汁酸代謝就會出現異常，TBA就會升高[1-2]。因此，TBA測定是1項比較敏感和有效的肝功能檢測項目。目前在生化分析儀上主要采用循環酶法檢測樣本中的TBA水平[3]。近年來，基于微流控芯片的便攜式即時檢測(POCT)已經成為國內外研究的熱點[4-5]。本文參照美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)頒布的《定量臨床檢驗方法的初步評價：批準指南EP10-A2》文件，對寧波美康保生生物醫學工程有限公司結合微流控芯片技術開發的MP1全自動干式生化分析儀檢測TBA的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移進行分析，對其臨床適用性進行了初步評估[6-7]。

1　材料與方法

1.1樣本分析樣本為購自Randox公司的定植質控，低值樣本(批號：942UN)，靶值為26.7 mol/L；高值樣本(批號：680UE)，靶值為47.9 mol/L。將上述高、低值樣本以1∶1比例混合，得到中值樣本，靶值為 37.3 mol/L。

1.2樣本測定按照EP10-A2文件要求，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序測定各濃度樣本，連續5 d。其中第1個中值作為測定起始用，不納入統計，其余9個數據若有1個不合格，則需棄掉該批數據重新進行測定。

1.3繪圖及數據處理以質控的靶值(X)作橫坐標、實測值與靶值的差值(Y-X)作縱坐標作偏倚圖；以質控的靶值(X)作橫坐標、實測值(Y)作縱坐標作散點圖；觀察有無離群點及其線性情況。偏差允許范圍設定為靶值±5%，總不精密度的允許范圍設定為5%。

1.4統計學處理采用Microsoft Excel2003統計軟件進行數據處理，計算偏差、總不精密度，對截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移作回歸分析。其校正回歸值作t檢驗，當t>4.6或t<-4.6時，P<0.01，差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1繪圖、目測觀察離群點和線性MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測結果的偏倚圖和散點圖見圖1、2，目測各濃度樣本測定結果無離群點，精密度良好，實測值與靶值間線性良好。

圖1　MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測實測值與靶值偏倚圖

圖2　MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測實測值與靶值散點圖

2.2數據分析依照EP10-A2文件所設計的數據處理表格進行計算，得出最后統計結果。

2.2.1偏差評估以各濃度5 d測定結果的均值與其相對應的靶值之差計算偏差，試驗結果顯示，TBA各濃度的偏差均未超過設定的±5%范圍，臨床均可接受。結果見表1。

2.2.2總不精密度分析按EP10-A2文件提供的方法，計算總不精密度。結果顯示TBA各濃度的總精密度均未超過允許不精密度，臨床均可接受。結果見表2。

2.2.3測定結果多重回歸分析對每天結果進行回歸分析，計算每天TBA測定結果的截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移，結果見表3。結果顯示，MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測結果的截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移差異均無統計學意義(-4.60.01)。

表1　　MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測結果偏差分析

表2　　MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測結果不精密度分析

表3　　MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測結果多元回歸分析

注：當t>4.6或t<-4.6時，P<0.01，差異有統計學意義。

3　討　　論

膽汁酸是內源性膽固醇在肝臟內的主要代謝產物，是膽汁中存在的一類膽烷酸的總稱，以鈉鹽或鉀鹽的形式存在，目前認為血清TBA水平是唯一可同時反映肝臟分泌、肝臟合成與代謝以及肝細胞損傷三方面的血清學指標[1-2]。臨床發現，TBA的測定與谷氨酸氨基轉移酶等生化檢查項目有同等的診斷效率，且體內TBA在反映肝功能改變上早于其他生化指標的變化，更具有特異性和靈敏性[8-9]。

目前檢測TBA的方法有氣相色譜、高效液相色譜、毛細管電泳(CE)和酶循環法[10]。不管是氣相或液相色譜法測定TBA都需要衍生和水解，較為繁瑣，不適合臨床檢測。而CE檢測大都采用紫外檢測，靈敏度較低。臨床使用的酶循環法普遍采用各種大型全自動生化分析儀檢測，由于大型全自動生化分析儀價格高，操作復雜，操作人員需要相關的專業知識和接受相應的培訓，并且其使用配套條件要求高，需配備穩壓電源、純水機，占地面積大，維護費用高，需要專業人員定期保養，因此基層醫療機構或家庭個人都沒有條件購買和使用。同時，大型醫院患者多，檢測手續繁瑣、流程長、等待時間長，這也給患者帶來了巨大的時間負擔。

POCT是1項新興的技術領域，主要特點是快速得出結果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術的進步，以及人們對疾病的認識及治療水平提高的要求，POCT逐漸受到關注[4-5]。微流控芯片技術是21世紀最為重要的前沿技術之一，它把生物和化學等領域中所涉及的樣品制備、反應、分離、檢測及細胞培養、分選、裂解等基本操作單元集成到一塊幾十平方厘米(甚至更小)的芯片上，由微通道形成網絡，以可控流體貫穿整個系統，是用以取代常規生物或化學實驗室的各種功能的1種技術[4-5]。微流控芯片系統微型化、集成化和自動化的特點使得它很適合應用于現場和個體分析[11]。寧波美康保生生物醫學工程有限公司開發的MP1全自動干式生化分析儀，結合了微流控芯片技術，可使以往實驗室繁復的全血定量、血細胞血清分離、血清稀釋等步驟在芯片上在線自動化完成，具有自動化程度高，靈敏度高，特異性好，標本采集后無需經過前處理、即時獲得檢驗結果的特點。

筆者參照EP10-A2文件對該儀器TBA檢測性能進行了初步評價，偏差評價結果顯示，低、中、高濃度的絕對偏差均在允許偏差范圍之內，故其偏差可接受，并且多元回歸分析結果亦顯示其斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之間，其差異無統計學意義(P>0.05)，說明MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測的準確度較好。對精密度分析結果顯示，低、中、高濃度的總不精密度均小于允許總不精密度，說明其精密度也符合臨床應用要求。多元回歸分析結果顯示，攜帶污染、非線性的差異均無統計學意義，說明其線性能力良好，攜帶污染率低。因此，從評估結果可見MP1全自動干式生化分析儀TBA檢測準確度、精密度良好，線性良好，攜帶污染率較低，穩定性好，能初步滿足TBA檢測的應用要求。由于EP10-A2文件的評價方法建立于初步評價的基礎之上，忽略了很多影響因素，因此該儀器TBA檢測的性能還有待于應用CLSI的其他文件進行進一步評價[12-13]。

隨著“十一五”計劃針對三級及二級醫院基礎設備的購置與加強，目前中級以上醫院已具備良好的軟硬件設施，但是基層醫療機構特別是衛生院、衛生所等單位全自動生化檢驗儀器設施普遍不足，也沒有足夠數目的檢驗專業人員。與傳統的全自動生化分析儀TBA檢測比較，MP1全自動干式生化分析儀定量測定TBA的方法不僅操作簡便，各項性能良好，并且由于測定所用的試劑盤片采用了真空冷凍干燥技術和微流控芯片技術，檢測試劑以凍干小球的形式存放于盤片中，攜帶方便，因此非常適用于在基層醫療機構推廣使用。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.040

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1673-4130(2016)18-2608-03

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2016-07-09)