液相色譜—串聯質譜聯用技術測定酒類產品中γ—氨基丁酸

伊芳

摘要 建立液相色譜—四極桿串聯質譜聯用技術，測定酒類產品中γ-氨基丁酸。結果表明：γ-氨基丁酸的濃度在0.01～0.50 mg/L范圍內呈現良好的線性關系，相關系數r2=0.999 1。食品中γ-氨基丁酸的檢出限為0.003 mg/L，加標回收率在85%以上。該方法快速、靈敏、準確。

關鍵詞 γ-氨基丁酸；酒類；液相色譜-四極桿串聯質譜聯用技術

中圖分類號 TS262.2；TS261.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）06-0272-02

γ-氨基丁酸（GABA）是一種天然存在的非蛋白組成氨基酸，廣泛分布在動植物體中，是很重要的抑制性神經遞質，可改善腦、腎、肝等器官的生理活性，還能促進人體內氨基酸代謝的平衡，調節免疫功能。γ-氨基丁酸在2009年經衛生部批準為一種新資源食品，能夠被應用于飲料、巧克力及其制品、烘烤食品、糖果、可可制品等食品中，但不用于嬰幼兒食品。《國家食品安全標準食品添加劑使用標準（GB2760-2011）》將γ-氨基丁酸列入“表B.3允許使用的食品用合成香料名單”，并規定：食品用香料、香精在各類食品中按生產需要適量使用。因此，γ-氨基丁酸在食品行業得到更廣泛的研究和應用。在酒類產品中，γ-氨基丁酸也得到了廣泛研究，酒中添加適當劑量的GABA，起到鎮定、醒酒、促進乙醇代謝、增加飲用者酒量的作用。葡萄酒和果酒中添加適當劑量的GABA，配制成GABA酒，可以滿足更多消費群體的需求，如適合女性、中老年人群、白領人士享用的中高檔花色果酒中可以添加GABA。

GABA具有對電化學、紫外、可見光不靈敏的特點，對其測定不能使用直接測定的方法。關于GABA 的測定，近年來國內外有氨基酸分析儀測定[1-3]、柱層析熒光測定法、比色法[4]、薄層法[5]、紙電泳法[6]、毛細管電泳法[7]、離子色譜法[8]、高效液相色譜法[9- 10]、液質聯用法[11]等。但酒基體比較復雜，一般由生物發酵而成，干擾較嚴重。本文探索液相色譜—質譜聯用法測定酒類中γ-氨基丁酸含量的方法，該技術無須衍生化等特殊條件，精密度和準確度符合要求。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器和試劑

試驗用液質聯用儀：液相色譜四極桿串聯質譜（電噴霧電離源（ESI））安捷倫6410，液相色譜系統包括自動進樣器。

試驗試劑：γ-氨基丁酸標準樣品（含量為99%，SIGMA公司生產），甲醇（色譜純）。

1.2 儀器分析條件

1.2.1 液相色譜條件。流動相組成：0.1%乙酸水溶液+甲醇（4+6，體積比）；流速：200 μL/min；注射體積：20 μL；柱溫：26 ℃。

1.2.2 質譜條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；干燥氣溫度：350 ℃；干燥氣流速：10 L/min；霧化器壓力；275.8 kPa；毛細管電壓：4 000 V。

1.3 試驗方法

白酒：直接移取1 mL試樣過0.22 μm濾膜；葡萄酒和果酒：移取5 mL試樣冷凍離心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），取上清液過0.22 μm濾膜，根據其含量直接或稀釋液相色譜—質譜/質譜測定。

2 結果與分析

2.1 γ-氨基丁酸分析條件確定

γ-氨基丁酸化分子量103，在液質里選擇正離子模式，得到母離子[M+1]為103.9，在一定碰撞電壓和能量下，失去NH3得到子離子M/Z：86.9，再失去1個H2O得到子離子M/Z：68.9，具體碰撞條件見表1，母離子和子離子在液質中形成見圖1，色譜圖見圖2。

2.2 前處理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量較低，一般直接過0.22 μm濾膜進樣測定。葡萄酒和果酒冷凍離心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），去除部分酒石酸鹽類、單寧、果膠、色素等，取上清液過0.22 μm濾膜，根據其含量直接或稀釋進樣。

2.3 線性關系和檢出限

配制不同濃度梯度的γ-氨基丁酸溶液，其濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在試驗設定條件，將γ-氨基丁酸的質量濃度（mg/L）作為橫坐標X，將γ-氨基丁酸的峰面積作為縱坐標Y進行線性回歸，確定回歸方程為Y=177.4X，回歸系數r2=0.999 1，具有良好的線性關系。當信噪比（S/N）=3時，儀器檢出限為0.003 mg/L。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 mL作為空白基質，分別添加5 mg/L標液0.08、0.20、0.40 mL共3組，每組6份，進行平行試驗。按照試驗方法進行前處理和儀器分析測定，計算回收率和精密度試驗數據，結果見表2。

從表2可以看出，采用該方法能夠使回收率達到85%以上，相對標準偏差RSD小于6%。采用該方法能夠獲得較高的測量精密度和準確度。

2.5 樣品測定

依據《國家食品安全標準 食品添加劑使用標準（GB2760-2014）》，化學合成的γ-氨基丁酸可作為在食品生產中能夠作為香料使用，但要控制使用量和使用范圍。在白酒中，γ-氨基丁酸是按生產需要適量使用。在市場抽取白酒樣品近50組，運用液相色譜—四極桿串聯質譜聯用技術測定，共檢出5組樣品含有γ-氨基丁酸，含量為0.1～0.8 mg/L。

3 結論

運用液相色譜—四極桿串聯質譜聯用技術測定酒類中γ-氨基丁酸，當濃度在0.01～0.50的范圍內，表現出良好的線性關系。該方法具有前處理方法簡單、測定過程快速、靈敏度高、測定結果準確等優點。

4 參考文獻

[1] 任紅波.氨基酸分析儀快速測定糙米中的γ-氨基丁酸[J].雜糧作物，2003，23（4）：246-247.

[2] 夏虹，彭茂民，周有祥.發芽米中γ-氨基丁酸含量的測定[J].食品與機械，2009，25（4）：100-102.

[3] 李常鈺，王超超，楊慧萍.發芽糙米中γ-氨基丁酸的富集與測定[J].糧食與飼料工業，2011（2）：5-7.

[4] 趙大偉，普曉英，曾亞文，等.大麥籽粒γ-氨基丁酸含量的測定分析[J].麥類作物學報，2009，29（1）：69-72.

[5] 黃美娥，彭勝，陳陽波，等.南瓜葉中γ-氨基丁酸的提取及薄層掃描測定[J].天然產物研究與開發，2012（24）：1284-1287.

[6] 湯茶琴，張定，陳暄，等.茶葉中γ-氨基丁酸及谷氨酸的紙電泳測定[J].江蘇農業學報，2007，23（2）：135-138.

[7] 孔令瑤，汪云，曹玉華.毛細管電泳-電化學法對發芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的檢測[J].分析測試學報，2008（5）：527-530.

[8] 李炳坤，衷明華.離子色譜法測定桑葉中γ-氨基丁酸[J].韓山師范學院學報，2009，30（6）：62-65.

[9] 李波，李磊，鄧旭衡，等.葡萄酒發酵過程中γ-氨基丁酸含量變化的研究[J].中國釀造，2011（7）：171-173.

[10] 徐自奧，張軍忠，趙成仕.HPLC-ELSD法測定食品中γ-氨基丁酸含量[J].化學分析計量，2012（5）：49-51.

[11] 趙健，李鳳華，楊麗，等.超高效液相色譜-質譜/質譜聯用法測定泰山白首烏中γ-氨基丁酸含量及其相關藥效分析[J].世界科學技術（中醫藥現代化），2012（5）：2029-2035.