小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測技術要點及注意事項

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小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測技術要點及注意事項

小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試驗采用的是中國動物衛生與流行病學中心研制的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，該試驗取得正確可靠的結果與試劑、血清的合理配備和正規的操作息息相關。下面筆者就自己的實踐經驗將幾項要點總結如下：

1　血樣采集與處理要點

常規采血大多數采取頸靜脈采血的方式，在常溫下采完的血樣要保持傾斜靜置，待采完最后一份血樣凝固后方可帶走。為了確保血清質量應避免下列情況：

1.1若用注射器采血，有時血流較快呈柱狀進入注射器，這樣會產生泡沫漂浮在上層，由于表面張力的作用使得這樣的血樣一般不會析出血清。若要避免產生汽泡就要在采血時放慢抽血速度，讓血液緩慢流入注射器。如果已經產生泡沫了，可將針頭向上，推動活塞將泡沫排出，然后拉回活塞吸進部分空氣后再進行放置。

1.2炎熱的天氣，外界溫度超過32℃以上時，要將血樣避開強光直射，否則血液凝固而不出血清。

1.3外界氣溫在0℃以下時要防止凍結，更不能將剛采的血樣放入冰箱內保存，避免造成溶血或不出血清。若條件有限沒有溫暖的環境，可以用手捂熱采血器至血液完全凝固。

1.4采回的血樣若有血清析出要及時進行分離保存，否則時間一長也會有溶血現象發生。若血清析出不明顯可以室溫靜置一夜。

1.5當得到血清后不要盲目的進行試驗，以避免不合格的血清影響檢測結果的準確性和對試驗試劑的浪費。合格的血清要具備未腐敗、無溶血、清亮透明、未凝固或未完全凝固、體積足夠檢測與樣品備份這些條件。

2　試劑的準備

試驗要在室溫下進行，試劑盒要選擇在有效期內的，開封時間不長，無渾濁無雜質的。試劑取出后要恢復到室溫后再進行使用。底物溶液要始終避光，各種試劑要先定量再配制，現用現配，現用現取，不造成浪費并保證質量。

3　操作技巧與注意事項

在操作過程中保持安靜，精神集中，動作要穩，盡量避免外界干擾。一旦不注意很有可能造成試驗結果不準確而影響真實性。

3.1血清樣本的擺放。整齊有規律的擺放血清可以提高操作的準確性和試驗效率。如果有擺放麥道管的板子，可以將裝有待檢血清的麥道管按照酶標板設計的布局擺放在板子上。如果沒有板子可以按照一定的規律把血樣擺在操作臺上，比如每10份為1組，或者前2份為1組，剩下的每組放8份。

3.2酶標板下面放置數字墊板。可以在白紙上按照酶標板各孔的位置畫出96個孔的排列順序和編號，然后將酶標板放在白紙上，使各孔與紙上的數字一一對應，這樣每個孔的編號清晰可見，加樣的時候哪個血樣加到哪個孔一目了然。與第一條配合應用工作效率會明顯提升。

3.3洗板后的殘留氣泡巧處理。酶標板用洗液清洗過后在濾紙上拍干，然而有時候總有頑固的氣泡經過多次拍打后依然在孔底不破。如果氣泡不破就繼續加試劑的話肯定會影響試劑的作用，所以要想辦法把它弄掉。可以用一個1000μl的單道移液器帶上接頭后往孔里吹氣，將氣泡吹破，然后再進行徹底拍干。注意吹的時候不要碰到孔底和孔壁。

4　試驗結果判定方法

陰、陽性對照成立后對待檢血清進行判定。樣品阻斷率＞50的為陽性，樣品阻斷率≤50的為陰性。計算的時候把阻斷率為50記為待檢血清的OD值臨界點，算出這個臨界點數值，然后去和待檢血清OD值去對比，如果待檢血清OD值≥臨界點，則該血清為陰性，如果待檢血清OD值＜臨界點，則該血清為陽性。這樣只要用這個臨界點數值去和每份血清OD值進行對比就能快速得出結論，不必再逐個計算了。

試驗本身就是科學嚴謹的，試驗的結果要求及時、準確、有效。所以操作人員就要盡量減少試劑和人為因素對試驗的影響，以提高檢測效率。

067400河北省承德縣農牧局任利強