肺耐藥相關蛋白在食管鱗狀細胞癌中的表達及其與多藥耐藥的相關性

劉　亮　左　靜　武中林　王光大　倪曉辰　趙　麗　左連富

(河北醫科大學第四醫院腫瘤研究所流式細胞室，河北　石家莊　050011)

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肺耐藥相關蛋白在食管鱗狀細胞癌中的表達及其與多藥耐藥的相關性

劉亮左靜1武中林2王光大3倪曉辰4趙麗左連富

(河北醫科大學第四醫院腫瘤研究所流式細胞室，河北石家莊050011)

目的檢測肺耐藥相關蛋白(LRP)在食管鱗狀細胞癌中的表達及其與食管癌多藥耐藥的相關性。方法通過免疫組化S-P法檢測LRP在食管鱗狀細胞癌及正常食管黏膜組織中的表達，并檢測LRP與食管鱗狀細胞癌不同臨床病理特征的相關性。結果LRP在食管鱗狀細胞癌中表達水平顯著高于正常食管組織(P<0.01)，食管鱗狀細胞癌組織中LRP陽性表達水平與各臨床病理特征無相關性(P>0.05)。結論LRP在食管鱗狀細胞癌組織中的高表達可能參與了食管鱗狀細胞癌多藥耐藥的形成。

食管鱗癌；免疫組化；多藥耐藥；肺耐藥相關蛋白

大多食管癌患者發現疾病時已是癌癥晚期，喪失了手術治療的機會，只能進行化療或放療，且化療是控制食管癌術后復發、轉移的重要手段，但目前藥物治療效果不理想。且腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性，嚴重影響了療效。肺耐藥相關蛋白(LRP)與腫瘤的多藥耐藥密切相關，廣泛分布在多種腫瘤組織中〔1～3〕。本文探討LRP在不同食管組織中的表達及其與食管鱗狀細胞癌耐藥的相關性。

1　材料與方法

1.1食管組織收集河北醫科大學第四醫院2008年1月至2009年12月經病理診斷證實的食管癌病例150例，從中選出80例食管鱗狀細胞癌和正常食管黏膜組織用于LRP蛋白的免疫組化檢測，男55例，女25例；年齡38～83〔平均(58.38±6.70)〕歲。

1.2主要試劑LRP抗體、二氨基聯苯胺(DAB)試劑盒、免疫組化二抗試劑盒均由北京中杉金橋生物技術有限公司生產。

1.3免疫組化方法檢測LRP蛋白按常規免疫組化S-P法操作，結果判定：細胞質和(或)細胞核出現棕黃色顆粒為陽性細胞。根據腫瘤細胞染色程度及陽性細胞所占百分比進行綜合評分，①陽性(+)，陽性細胞數>10%；②陰性(-)，無陽性細胞或陽性細胞數≤10%。

1.4統計學方法采用SPSS11.5統計軟件進行χ2檢驗。

2　結　果

圖1　不同食管黏膜組織中LRP蛋白表達(DAB，×200)

2.1LRP蛋白在不同食管黏膜組織中的表達圖1可見，LRP陽性產物定位于細胞質和細胞核，呈棕黃色顆粒狀，彌散或散在分布。食管正常黏膜中LRP蛋白表達陽性率35.00%(28/80)，明顯低于食管鱗狀細胞癌組織LRP蛋白陽性表達率55.00%(44/80)(P=0.005)。

2.2食管鱗狀細胞癌中LRP蛋白陽性表達與不同臨床病理特征的關系食管鱗狀細胞癌中LRP蛋白的陽性表達與癌組織分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移無相關性(P>0.05)，見表1。

表1　食管鱗癌中LRP蛋白表達與臨床病理特征的關系(n)

3　討　論

腫瘤細胞對化療藥物的耐藥一直是臨床最為重視的問題，它影響到治療效果和愈后情況，有觀點認為腫瘤細胞的耐藥性是腫瘤細胞在化療藥物的作用下所發生的生物學改變，如藥物外流的增多〔4〕，藥物吸收的減少〔5〕，藥物代謝酶的功能恢復，結合酶的活動〔6～8〕，DNA的修復使細胞對凋亡的敏感性降低〔9,10〕及藥物靶點的突變〔11～13〕等。近年研究的熱點集中在藥物外流增多，目前的研究機制認為化療藥物可通過細胞膜和(或)細胞核上的蛋白和(或)通道將藥物輸送到細胞外，從而使得腫瘤細胞內化療藥物的濃度降低，導致化療藥物不能殺傷腫瘤細胞，表現為腫瘤細胞對化療藥物的耐藥。在過去的研究中本研究小組發現具有藥物外排泵作用的三磷酸腺苷結合盒(ABC)B1及G2與食管鱗狀細胞癌的多藥耐藥有關〔14～16〕。

LRP是1993年Scheper等〔17〕在人非小細胞肺癌的P-gp陰性的多藥耐藥(MDR)細胞系SW-1573/2R120中首次發現，因此被命名為LRP。LRP基因定位于染色體16p13.1-16p11.2，編碼分子量110 000的蛋白。LRP蛋白含有896個氨基酸殘基，95%的LRP位于細胞質中，5%位于核膜的胞質和核膜孔附近。LRP廣泛分布在腫瘤組織中，且在腫瘤組織中表達率及表達強度明顯高于正常組織，但不同腫瘤其表達率不同。LRP可能通過兩種機制引起MDR，它可使以細胞核為靶點的藥物不能通過核孔進入細胞核，即使進入也在發生藥效前被泵出核外；或可使胞質中藥物進入囊泡，并通過胞吐作用排出細胞外，從而使細胞內抗癌藥的濃度降低，表現出抗癌藥對腫瘤細胞的作用降低，即腫瘤細胞對抗癌藥的耐藥。LRP雖然也具有將藥物排出的作用，但它沒有消耗ATP，而是主要通過“胞吐作用”將藥物排出細胞外，異于ABCB1及ABCG2引起耐藥的作用機制。本研究發現LRP可能與食管鱗狀細胞癌耐藥有關，但與食管癌的疾病程度無關。

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3Li S，Shi H，Ji F，etal.The human lung cancer drug resistance-related gene BC006151 regulates chemosensitivity in H446/CDDP cells〔J〕.Biol Pharm Bull,2010；33(8)：1285-90.

4van den Heuvel-Eibrink MM，Sonneveld P，Pieters R.The prognostic significance of membrane transport-associated multidrug resistance(MDR)proteins in leukemia〔J〕.Int J Clin Pharmacol Ther,2000；38(3)：94-110.

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7Hawtin RE，Stockett DE，Byl JA，etal.Voreloxin is an anticancer quinolone derivative that intercalates DNA and poisons topoisomerase Ⅱ〔J〕.PloS One，2010；5(4)：e10186.

8Chen Z，Liang X，Zhang H，etal.A new class of naphthalimide-based antitumor agents that inhibit topoisomerase Ⅱ and induce lysosomal membrane permeabilization and apoptosis〔J〕.J Med Chem，2010；53(6)：2589-600.

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10余景星，劉星，徐波.多西他賽誘導HL-60/ADR細胞凋亡及對P-gp、BCL-2、BAX蛋白表達的影響〔J〕.中國實驗血液學雜志，2010；18(2)：311-6.

11Schildkraut JM，Iversen ES，Wilson MA，etal.Association between DNA damage response and repair genes and risk of invasive serous ovarian cancer〔J〕.PloS One，2010；5(4)：e10061.

12蓋曉東，李國利，黃京子，等.野生型p53基因對肝癌細胞多藥耐藥的逆轉作用及其相關機制〔J〕.癌癥，2006；25(8)：954-9.

13Li YX，Lin ZB，Tan HR.Wild type p53 increased chemosensitivity of drug-resistant human hepatocellular carcinoma Bel7402/5-FU cells〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2004；25(1)：76-82.

14Liu L，Zuo LF，Guo JW.ABCG2 gene amplification and expression in esophageal cancer cells with acquired adriamycin resistance〔J〕.Mol Med Rep，2014；9(4)：1299-304.

15Liu L，Zuo LF，Guo JW.Reversal of multidrug resistance by the anti-malaria drug artesunate in the esophageal cancer Eca109/ABCG2 cell line〔J〕.Oncol Lett，2013；6(5)：1475-81.

16劉亮，左靜，趙麗，等.ABCB1、ABCG2與食管癌患者多藥耐藥的關系〔J〕.中國老年學雜志，2011；31(1)：15-7.

17Scheper RJ，Broxterman HJ，Scheffer GL，etal.Overexpression of a M(r)110，000 vesicular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance〔J〕.Cancer Res，1993；53(7)：1475-9.

〔2015-05-30修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

河北省自然科學基金(H2012206107)；河北省醫學科學研究重點課題(20160167)；河北省普通高等學校強勢特色學科腫瘤學建設經費〔冀教高(2005)52號〕

劉亮(1981-)，男，醫學博士，副教授，主要從事食管癌早期診斷及治療研究。

R735.1

A

1005-9202(2016)17-4141-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.002

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