卵巢癌個體化治療的可行性

劉賢英　程杰平　祁盛昆　陳　晗　向　梅　侯麗娜　于龍光

(吉林大學第二醫院，吉林　長春　130041)

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卵巢癌個體化治療的可行性

劉賢英程杰平祁盛昆1陳晗向梅侯麗娜2于龍光

(吉林大學第二醫院，吉林長春130041)

目的探討原代人卵巢癌細胞對4種化療藥物的敏感性。方法應用原代人卵巢癌細胞為靶點，觀察其對4種化療藥物的敏感性。MTT法檢測原代卵巢癌細胞的增殖抑制率，流式細胞儀檢測細胞周期進程的變化，透射電子顯微鏡觀察其亞細胞結構改變。結果MTT結果顯示，斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對培養的卵巢癌細胞敏感性較強，而紫杉醇、環磷酰胺敏感性次之，組間比較差異顯著(P<0.05)。流式細胞儀結果顯示不同的化療藥物誘導原代卵巢癌細胞周期分布表現為G0/G1期細胞增多，S期細胞減少，G2/M期細胞相對增多，細胞凋亡率升高，組間比較差異顯著(P<0.05)。透射電子顯微鏡下可見細胞核染色質趨邊凝集、線粒體腫脹，可見凋亡小體改變。結論原代人卵巢癌細胞培養及藥物敏感性實驗為卵巢癌術后個體治療提供重要參考依據。此對降低化療藥物的毒副作用，避免多藥耐藥的產生，尤其對遠端微小轉移灶的治療有重要意義。

卵巢癌；個體化治療；細胞周期；凋亡

1吉林大學臨床學院2012級

2空軍航空大學教官訓練基地一團衛生隊

卵巢癌為三大婦科惡性腫瘤之一，發病隱匿，早期診斷率低，大部分患者確診時已是晚期，其死亡率居婦科腫瘤首位，隨著腫瘤細胞學的發展和大量靶向藥物的臨床應用及臨床試驗，使得腫瘤治療的個體化領域得到了迅速發展，從細胞水平預測治療方式的有效性和藥物敏感性不僅成為可能，而且也成為必然趨勢〔1〕。因此，對卵巢癌發病機制和診斷及靶向治療策略，具有一定的研究和應用價值。

1　材料與方法

1.1材料8例人卵巢癌組織由我科住院病人提供，均有病理診斷。RPMI1640培養基，噻唑藍(MTT)試劑購于美國sigma公司。4種抗腫瘤藥物：斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑、環磷酰胺、紫杉醇由我院藥劑科提供，

1.2方法(1)原代卵巢癌細胞制備方法參考文獻〔2〕進行，略加改進。(2)MTT比色法：取制備好的人卵巢癌細胞懸液，調細胞數為2×105/ml，加入96孔塑料培養板內，每孔100 μl。根據預實驗結果，分別加入斑蝥酸鈉維生素B6終濃度為5 μg/ml，順鉑5 μg/ml,紫杉醇5 μg/ml及環磷酰胺20 μg/ml，置37℃5%二氧化碳培養箱內靜止培養24 h。(3)流式細胞術、細胞培養及分組同(2)，不同之處是將96孔塑料培養板改為25 ml培養瓶進行。(4)透射電子顯微鏡技術，細胞培養及分組同(3)。

1.3統計學處理采用SPSS17.0軟件行t檢驗。

2　結　果

2.1MTT結果對照組、斑蝥酸鈉組、順鉑組、紫杉醇組、環磷酰胺組A值分別為1.36±0.12，0.78±0.19，0.89±0.17，0.95±0.23，1.04±0.17。斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對原代人卵巢癌細胞敏感性好，抑制率41.8%和34.6%，而紫杉醇，環磷酰胺抑制率為30.2%和23.6%，組間比較差異顯著(P<0.01,P<0.05)。

2.2流式細胞儀結果4種抗腫瘤藥物對原代人卵巢癌細胞周期進程均有影響，G0/G1期細胞增多，S期細胞減少，G2/M期細胞相對增多。但是，斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑敏感性較好，優于紫杉醇、環磷酰胺組。見表1。

表1　4種抗癌藥物對人卵巢癌細胞周期進程的影響±s，%)

與對照組比較：1)P<0.05;2)P<0.01

2.3透射電子顯微鏡結果四種抗腫瘤藥物均致卵巢癌細胞超微結構改變，可見細胞空化，膜系統破壞，染色質凝集深染，可見凋亡小體。見圖1。

A：斑蝥酸鈉組原代卵巢癌細胞染色質趨邊、凝集，可見凋亡小體；B：順鉑組原代卵巢癌細胞染色質呈條索狀，膜系統破壞；C：紫杉醇組原代卵巢癌細胞線粒體腫脹、胞器腫脹,大量空泡出現；D：環磷酰胺組原代卵巢癌細胞可見空泡形成圖1　四組細胞透射電子顯微鏡下改變(×5 000)

3　討　論

卵巢癌的常規治療是手術為主，并輔以術后化療的聯合治療。然而由于中晚期卵巢癌腫瘤體積大，腫瘤細胞在腹腔內形成多種組織器官的種植轉移，臨床治療時相對比較辣手〔3〕。因此，如何正確對卵巢癌術后復發實施恰當合理的治療是一個值得研究和探討的臨床問題〔4〕。本研究結果顯示斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對原代人卵巢癌細胞有明顯的增殖抑制作用，而紫衫醇、環磷酰胺次之，抑制細胞增殖是細胞凋亡的一種有效方式，這一點從細胞凋亡率上得到體現。研究證實MTT實驗可準確反映活細胞數量及細胞活化狀態，被廣泛于抗腫瘤藥物篩選和細胞毒性實驗研究，具有一定的客觀性。

流式細胞儀結果顯示，4種化療藥物對原代卵巢癌細胞周期進程均有影響，使細胞周期發生明顯改變，G0/G1期細胞比例升高，S期細胞比例減少，從而使G2/M期細胞相對增多，與正常對照組相比差異有統計學意義。細胞周期是細胞生命活動中一個重要過程。在細胞周期4個時相中，G0/G1期是啟動細胞周期循環的關鍵，細胞增殖是一個高度保守且備受多種細胞因子的嚴格控制〔5〕，任何一個環節失控即可發生功能和形態學改變。通過流式細胞儀分析，斑蝥酸鈉維生素B6組的細胞周期被阻滯在G0/G1期，增殖能力減弱，效果最好。斑蝥酸鈉是斑蝥素的半合成衍生物，保留了斑蝥素的抗腫瘤作用〔6〕，其機制為：①抑制腫瘤細胞蛋白質和核酸的合成，繼而影響RNA、DNA的生物合成；②降低腫瘤細胞CAMP磷酸二酯酶活性；③改變線粒體膜的通透性，尤其是斑蝥酸鈉與維生素B6合劑應用可進一步減輕化療的不良反應，效果明顯優于其他抗腫瘤藥物。文獻報道，人卵巢癌細胞對鉑類藥物敏感〔7〕。本文結果顯示5 μg/ml順鉑對人卵巢癌細胞抑制率為34.6%，較斑蝥酸鈉維生素B6次之。但是鉑類藥物毒副作用較強，且易產生耐藥，不宜長期使用；而紫杉醇雖然也是從植物中提取的抗腫瘤藥物，對人卵巢癌細胞抑制率為30.2%，但是由于昂貴的價格限制了臨床應用；而環磷酰胺屬于化學合成藥，具有一定的副作用，且療效一般。

此外，筆者還應用透射電子顯微鏡觀察不同抗腫瘤藥物對原代卵巢癌細胞的亞細胞水平改變。可見細胞器腫脹，線粒體膜破裂，有大量空泡呈現，細胞核染色質凝集，可見凋亡小體。

綜上所述，取手術切除的卵巢癌組織，制備單細胞培養，進行藥物敏感性實驗，用于卵巢癌術后的個體化治療，將為預防卵巢癌的復發提供最佳治療途徑。

1蘇丹，馬勝林，祁鳴.基因導向性腫瘤治療個體化研究進展〔J〕.國際腫瘤學雜志,2010;37(3)：176-8.

2程海光，李超.原代骨肉瘤細胞培養及藥敏試驗〔J〕.中國老年學雜志,2012;32(24):6223-5.

3Ahmed N,Abubakert K,Findlay J,etal.Epithelial mesenchymal transition and cancer stem cell-like phenotypes facilitate chemoresistance in recurrent ovarian cancer〔J〕.Curr Cancer Drug Targets,2010;10(3);268-78.

3Hope JM,Blank SV.Current status of maintenance therapy for advanced ovarian cancer〔J〕.Int J Women Health,2010;1:173-80.

4Cai Y,Xia Q,Luo R,etal.Berberine inhibits the growth of human colorectal adenocarcinoma in vitro and in vivo〔J〕.J Nat Med,2014;68(1):53-62.

5Pratheeshkumar P,Kuttan G.Oieanolie acid induces apoptosis by modulating P53,Bax,Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regu-lates the activstion of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ pathil Toxico J Oncol,2011;30(1):21-31.

6劉忠虎,陳艾江,馬新剛,等.斑蝥酸鈉維生素B6注射液輔以胸腔鏡內臟神經切斷術治療癌腹痛〔J〕.國際腫瘤學雜志,2013;40(5)：398-9.

7趙曉艷.晚期上皮性卵巢癌新輔助化療的療效分析〔J〕.國際腫瘤學雜志,2014;41(10):792-4.

〔2015-12-31修回〕

(編輯曲莉)

于龍光(1960-)，男，副教授，主要從事四肢關節研究。

劉賢英(1966-)，女，醫學博士，主要從事婦科腫瘤研究。

R735.3

A

1005-9202(2016)17-4167-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.014