低氧誘導因子-1α、Delta樣配體4在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達及臨床意義

焦　德　路　煒　張學東

(聊城市人民醫(yī)院乳腺及甲狀腺外科，山東　聊城　252000)

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低氧誘導因子-1α、Delta樣配體4在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達及臨床意義

焦德路煒1張學東2

(聊城市人民醫(yī)院乳腺及甲狀腺外科，山東聊城252000)

目的探討低氧誘導因子(HIF-)1α、Delta樣配體(DLL)4在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測乳腺癌組織〔基底細胞樣型17例、人表皮生長因子受體(HER)-2過表達型21例、Luminal A型54例、Luminal B型23例與普通乳腺樣型23例〕與癌旁組織(對照組)HIF-1α、DLL4表達。結果115例乳腺癌組織HIF-1α、DLL4分別為70.43%、69.57%，明顯高于對照組(25.00%、22.00%)(P<0.05)，其中基底細胞樣型、HER-2過表達型、Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織HIF-1α、DLL4的陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細胞樣型乳腺癌組織HIF-1α、DLL4的陽性表達率明顯高于Luminal A型， HER-2過表達型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達率明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達與年齡、組織學分級無明顯的關系(P>0.05)，與腋窩淋巴結轉移、臨床分期具有明顯的關系，其中中青年乳腺癌患者HIF-1α、DLL4陽性表達較高，腋窩淋巴結轉移者上述因子陽性表達率更高，Ⅲ/Ⅳ期上述因子陽性表達率更高(P<0.05))。結論HIF-1α、DLL4在基底細胞樣型、HER-2過表達型乳腺癌組織中的表達較高，而在Luminal A、B型乳腺癌組織中的表達較低；其可能與臨床病理特征及預后狀況有一定的關系。

HIF-1α；DLL4；乳腺癌

隨著基因芯片技術與乳腺癌研究的不斷深入，根據不同分子標志物表達將乳腺癌分子亞型分為基底細胞樣型、HER-2過表達型、Luminal A型與Luminal B型。為了充分準確評估乳腺癌臨床預后并指導制定個體化治療方案，深入研究不同乳腺癌分子亞型組織的相關分子標志物在指導乳腺癌的診治中具有重要的意義〔1〕。相關文獻顯示，低氧誘導因子(HIF)-1α、Delta樣配體(DLL)4是決定乳腺癌微環(huán)境狀況的主要分子標志物〔2〕。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2012年1月至2015年1月我院乳腺癌患者115例，納入標準：全部患者均具有手術適應證，手術病理組織學檢查明確乳腺癌的診斷〔3〕，自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標準：具有手術禁忌證，術前接受化療、放療與內分泌治療，合并肝腎功能障礙、其他惡性腫瘤與精神性疾病患者。年齡29～78歲，平均(49.8±6.32)歲。腋窩淋巴結轉移(≥4枚)61例，無腋窩淋巴結轉移54例，組織學分級參照美國癌癥聯合委員會(AJCC)分級標準：Ⅰ級24例，Ⅱ級71例，Ⅲ級20例。根據雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子受體(HER)-2。檢測結果將患者分為基底細胞樣型(17例)、HER-2過表達型(21例)、Luminal A型(54例)與Luminal B型(23例)。同時采集癌旁組織(距癌組織>3 cm處)100例作為對照組。

1.2檢測方法全部乳腺癌組織均采用免疫組織化學法檢測。①試劑與儀器：兔抗人HIF-1α多克隆抗體、即用型兔抗人DLL4多克隆抗體(中國武漢博士德公司)，KIT-5020即用型快捷免疫組化檢測試劑盒、DAB-0031氨基聯苯胺顯色試劑盒(福州邁新公司)。②操作步驟：手術期間采集乳腺癌組織與癌旁組織，全部組織標本經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，EDTA抗原或0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖溶液修復，采用免疫組化法染色，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3觀察指標HIF-1α、DLL4定位于細胞質，陽性反應為棕黃色染色，100倍顯微鏡下隨機觀察5個不同視野，每個視野計數250個細胞，陽性細胞比例>75%計4分，50%～75%計3分，25%～50%計2分，<25%計1分，無陽性細胞計0分；染色強度：無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分，總分=陽性細胞比例分值+染色強度分值，總分≤2分作為陰性，≥3分作為陽性。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS18.0軟件行χ2檢驗。

2　結　果

2.1不同乳腺癌分子亞型組織HIF-1α的表達115例乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達率為70.43(81/115)，明顯高于對照組(25.00%)(χ2=44.18，P<0.05)，其中基底細胞樣型〔15例(94.12%)〕、HER-2過表達型〔21例(95.04%)〕、Luminal A型〔30例(53.70%)〕與Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細胞樣型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達率明顯高于Luminal A型， HER-2過表達型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達率明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。

2.2不同乳腺癌分子亞型組織DLL4的表達115例乳腺癌組織DLL4的陽性表達率為69.57%(80/115)，明顯高于對照組(22.00%)(χ2=48.53，P<0.05)，其中基底細胞樣型〔16例(94.12%)〕、HER-2過表達型〔20例(95.24%)〕、Luminal A型〔29例(53.70%)〕與Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌組織DLL4的陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細胞樣型、HER-2過表達型乳腺癌組織DLL4的陽性表達率均明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。

2.3乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達與臨床病理特征的關系乳腺癌組織HIF-1α表達與組織學分級無明顯的關系(P>0.05)，與年齡腋窩淋巴結轉移、臨床分期具有明顯的關系，其中中青年人群、腋窩淋巴結轉移者HIF-1α陽性表達率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4陽性表達率更高(P<0.05)；乳腺癌組織DLL4表達與組織學分級無明顯的關系(P>0.05)，與年齡、腋窩淋巴結轉移、臨床分期具有明顯的關系，其中中青年人群、腋窩淋巴結轉移者DLL4陽性表達率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4陽性表達率更高，比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1 。

表1　乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

3　討　論

目前，關于乳腺癌的病理原因尚未明確，乳腺癌的個體差異性較高，根據ER、PR、HER-2表達的情況將乳腺癌分為4種分子亞型，即基底細胞樣型(ER-、PR-、HER-2-)、HER-2過表達型(ER-、PR-、HER-2+)、Luminal A型(ER+或PR+、HER-2-)與Luminal B型(ER+或PR+、HER-2+)。相關文獻顯示，基底細胞樣型與HER-2過表達型乳腺癌的預后狀況最差，而Luminal A 型乳腺癌的預后狀況最佳〔4〕。微環(huán)境對細胞生物學行為具有重要的調控作用，當細胞癌變形成后，腫瘤容易產生多種生長因子，降解基膜與細胞外基質，誘導腫瘤新生血管形成，促進腫瘤細胞轉移與浸潤〔5〕。

DLL4是Notch信號通路配體，在正常人血管結構中幾乎不表達，但在膀胱腫瘤、腎臟腫瘤與胃臟腫瘤等組織中的表達明顯增高，促進腫瘤新生血管形成，與腫瘤的生長繁殖具有緊密的關系〔6〕。DLL4位于血管內皮生長因子信號下游，通過激活Notch信號通路，從而擴寬血管腔，增加腫瘤血流灌注量，降低耗氧量，促進腫瘤的生長繁殖。大量研究顯示，DLL4在多種腫瘤組織中的表達上調，其在參與腫瘤發(fā)生與發(fā)展中具有重要的作用〔7，8〕。本研究結果顯示，DLL4在乳腺癌組織中的表達顯著上調，預后欠佳的基底細胞樣型、HER-2過表達型乳腺癌組織DLL4的陽性表達率均明顯高于預后較佳的Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織，揭示了DLL4表達可能與預后狀況具有緊密的關系，其中DLL4陽性表達含量越高，其預后越差，且與相關文獻〔9〕具有一致性。同時，乳腺癌組織DLL4表達與腋窩淋巴結轉移、臨床分期具有明顯的關系。因此，其中DLL4陽性高表達者不僅促進腋窩淋巴結轉移，且促進腫瘤臨床分期的進展。另一方面，腫瘤是細胞異常增殖分化的最終產物，腫瘤組織生長繁殖過快必然導致腫瘤微環(huán)境低氧改變。HIF-1α為細胞耐受缺氧表達的主要因子之一。乳腺癌在微氧環(huán)境缺氧期間，HIF-1α通過激活糖酵解酶與葡萄糖轉運蛋白，從而促進葡萄糖的轉運與攝取，滿足腫瘤缺氧缺血微環(huán)境下的迅速增殖的能量需求〔10〕。相關文獻顯示，HIF-1α具有促進腫瘤細胞增殖生長、轉移與侵襲的作用，多種實質性腫瘤組織HIF-1α表達均明顯上調〔11〕。本研究結果顯示，HIF-1α在乳腺癌組織中的表達顯著上調，其中基底細胞樣型、HER-2過表達型乳腺癌組織HIF-1α陽性表達率較高，而Luminal A、B型乳腺癌組織HIF-1α陽性表達率較低，揭示HIF-1α可能與乳腺癌預后狀況具有緊密的關系。DLL4通過促進腫瘤新生血管形成，增加腫瘤細胞的血流灌注量，從而改變腫瘤的缺氧性改變，促進惡性腫瘤發(fā)展；而HIF-1α通過為腫瘤微環(huán)境缺氧提供能量需求，從而改變腫瘤細胞缺氧，促進惡性腫瘤發(fā)展。因此，DLL4、HIF-1α通過改變腫瘤細胞微環(huán)境狀態(tài)，從而促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

1劉秋明,曹亞麗,吳曉波,等.早期乳腺癌分子亞型與前哨淋巴結轉移關系的探討〔J〕.山東醫(yī)藥,2015;55(34):34-5.

2Dufraine J，Funahashi Y，Kitajewski J.Notch signaling regulates tumor angiogenesis by diverse mechanisms 〔J〕.Oncogene,2008;27(38):5132-7.

3周炳娟,孫吉瑞,趙文明,等.乳腺癌分子亞型中 HIF-1α和 Glut-1表達及其與基底細胞樣型乳腺癌的關系〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2015;31(9):991-5.

4覃舒婷,莫軍揚,周韜.乳腺癌分子亞型對新輔助化療療效及預后的預測價值〔J〕.實用醫(yī)學雜志,2015;31(6):953-5.

5Nielsen TO,Hsu FD,Jensen K,etal.Immunohistochemical and clinical characterization of the basal 2 like subtype of invasive breast carcinoma〔J〕 Clin Cancer Res,2004;10(16):5367-74.

6劉紅,謝佳,劉毫,等.FOXC2調控DLL4/Notch1信號通路對乳腺癌MCF-7細胞血管生成的影響〔J〕.吉林大學學報：醫(yī)學版,2014;34(3):488-92.

7Suchting S,Freitas C,Le Nobel F,etal.The Notch ligand Delta-like 4 negatively regulates endothelial tip cell formation and vessel branching〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2007;104(9):3225-30.

8Patel NS,Li JL,Generali D,etal.Up-regulation of delta-like 4 ligand in human tumor vasculature and the role of basal expression in endothelial cell function〔J〕.Cancer Res,2005;65(19):8690-7.

9郎志強,吳艷秋,蔡莉.乳腺浸潤性導管癌中DLIA的表達及其與血管生成的關系〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2013;29(1):93-5.

10李延輝，吳偉群，何小杰.HIF-1α VEGF在甲狀腺腫瘤中的表達及其與腫瘤血管生成的關系〔J〕.病理與臨床,2013;51(21):73-5.

11牛海艷,鄭藝菲.乳腺癌中HIF-1α與Ki-67、Caspase-3和VEGF表達的意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2015;31(7):804-6.

〔2016-01-12修回〕

(編輯李相軍)

焦德(1979-)，男，碩士，主要從事乳腺腫瘤的侵襲與轉移機制研究。

R739

A

1005-9202(2016)17-4248-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.055

1婦產科2病理科