抗磷脂酶A2受體抗體檢測在老年人特發(fā)性膜性腎病腎組織及血液中的表達(dá)

符克英　蔡俊宏　符生苗　韓葉光　王　茹　張　培

(海南省人民醫(yī)院醫(yī)院腎病研究室，海南　海口　570311)

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抗磷脂酶A2受體抗體檢測在老年人特發(fā)性膜性腎病腎組織及血液中的表達(dá)

符克英蔡俊宏符生苗韓葉光王茹張培

(海南省人民醫(yī)院醫(yī)院腎病研究室，海南海口570311)

目的探討血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)在老年人特發(fā)性膜性腎病(IMN)診斷中的意義。方法分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和間接免疫熒光方法檢測老年人IMN患者腎活檢組織anti-PLA2R和血液中anti-PLA2R的表達(dá)情況，分析其相關(guān)性。結(jié)果腎活檢組織中anti-PLA2R敏感性為75.0%，特異性為95.0%；血液中的anti-PLA2R敏感性為77.5%，特異性為95.0%；血液與腎活檢組織中anti-PLA2R結(jié)果的相關(guān)性分析，陽性符合率96.9%，陰性符合率96.6%，總符合率98.3%；Kappa一致性檢驗，Kappa=0.996，P<0.001。結(jié)論間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R水平與免疫組織化學(xué)方法檢測腎活檢組織中anti-PLA2R的表達(dá)呈正相關(guān)，可成為體外診斷老年人IMN的特異性指標(biāo)。

抗磷脂酶A2受體抗體；特發(fā)性膜性腎病；免疫組織化學(xué)方法；間接免疫熒光方法

特發(fā)性膜性腎病(IMN)是最常見的以腎病綜合征為特點(diǎn)的腎臟疾病〔1，2〕。病理學(xué)特征主要是大量免疫復(fù)合物沉積于腎小球基底膜內(nèi)和上皮下，免疫熒光主要表現(xiàn)為IgG及C3陽性，細(xì)顆粒狀沉積毛細(xì)血管袢。以前，IMN的診斷主要依靠腎活檢〔1〕。但是，腎臟病理檢查是有創(chuàng)的檢查手段，臨床上仍存在某些患者因為年齡、適應(yīng)證等問題未能及時進(jìn)行腎活檢，因此不能及時得到診斷，更不能排除如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性乙型肝炎病毒感染、 惡性腫瘤、腎臟移植等原因引起的繼發(fā)性膜性腎病。筆者擬通過檢測老年人血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)，與腎活檢組織中anti-PLA2R的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，探討anti-PLA2R在老年人IMN診斷中的意義。

1　材料和方法

1.1對象來自2008～2015年本院腎病風(fēng)濕科住院老年患者60例，年齡65～76歲，平均年齡69歲，其中IMN 40例，狼瘡性腎炎10例，乙肝相關(guān)性腎炎10例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：IMN根據(jù)臨床診斷及腎臟病理光鏡、電鏡、免疫熒光診斷納入。排除標(biāo)準(zhǔn)：乙肝相關(guān)性腎、狼瘡性腎炎、腫瘤相關(guān)膜性腎病、其他繼發(fā)性膜性腎病。

1.2研究分組將IMN設(shè)為實驗組；繼發(fā)性膜性腎病(狼瘡性腎炎和乙肝相關(guān)性腎炎)為對照組；并將相對應(yīng)血液樣本分為3組：實驗組、對照組、正常人組。

1.3主要試劑SABC法試劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，anti-PLA2R購自美國abcam公司。間接免疫熒光試劑盒購自德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司。

1.4方法(1)收集了腎活檢組織標(biāo)本(石蠟常溫保存)和血液樣本(-80℃保存)各60例，以健康獻(xiàn)血員血液樣本20例作為正常人組。(2)應(yīng)用SABC法進(jìn)行腎活檢組織免疫組化染色，分析各組腎活檢組織中anti-PLA2R的表達(dá)、分布情況。(3)應(yīng)用間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R水平。分析其與各組腎活檢組織中anti-PLA2R表達(dá)量的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS18.0軟件，計算各組檢測的敏感性及特異性、陽性符合率、陰性符合率及總符合率，進(jìn)行χ2檢驗及Kappa一致性檢驗。

2　結(jié)　果

2.1免疫組織化學(xué)方法檢測腎活檢組織中anti-PLA2R實驗組陽性例數(shù)為30例(30/40)，敏感性為75%，特異性為95%；對照組陽性1例，敏感性5%，特異性95%。陽性樣本均可見anti-PLA2R在腎小球基底膜足細(xì)胞呈高表達(dá)。見圖1。

圖1　anti-PLA2R在腎小球基底膜足細(xì)胞呈高表達(dá)

2.2間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R實驗組陽性例數(shù)為31例(31/40)，敏感性為77.5%，特異性為95.0%。健康獻(xiàn)血員血液樣本20例中，無陽性結(jié)果，特異性100%。對照組陽性1例，敏感性5%，特異性95%。陽性樣本可見特異性胞質(zhì)熒光。見圖2。

2.3血液與腎活檢組織中anti-PLA2R結(jié)果的相關(guān)性分析陽性符合率96.9%，陰性符合率96.6%，總符合率98.3%。Kappa一致檢驗，Kappa=0.996，χ2=55.991,P<0.001。

圖2　anti-PLA2R與基質(zhì)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞反應(yīng)

3　討　論

PLA2R屬于Ⅰ型跨細(xì)胞膜受體，主要分為M型和N型，并確認(rèn)自身抗體的主要靶抗原是M型PLA2R〔3～6〕。PLA2R與IgG4共定位于IMN患者腎小球足細(xì)胞，以免疫復(fù)合物沉積于腎小球毛細(xì)血管袢上，引起足細(xì)胞的損傷、腎小球基底膜的增厚以及通透性的改變〔1，5〕。從IMN患者沉積免疫復(fù)合物中提純IgG可識別PLA2R，主要為IgG4亞型，這是腎小球沉積物中的主要免疫球蛋白亞類，因此認(rèn)為PLA2R是直接導(dǎo)致IMN的主要靶抗原之一。檢測血液中的anti-PLA2R對于IMN的病情活動、鑒別診斷和治療監(jiān)測具有重要作用〔3，7〕。繼發(fā)性膜性腎病(狼瘡性腎炎、乙肝相關(guān)性腎炎或惡性腫瘤相關(guān)膜性腎病等)抗體以IgG2、IgG3為主要亞型，為原發(fā)性膜性腎病和繼發(fā)性膜性腎病鑒別診斷提供了充分的依據(jù)。Fervenza等〔2～4，6〕研究表明，IMN疾病活動度與anti-PLA2R滴度高低密切相關(guān)，在臨床評價治療效果上可以作為一項重要指導(dǎo)指標(biāo)。

周廣宇等〔8〕研究認(rèn)為anti-PLA2R可能是IMN關(guān)鍵的特異性致病抗體。Qin等〔9〕報道也認(rèn)為anti-PLA2R對于IMN具有很高的特異性，其滴度大小對于判斷患者的療效和預(yù)后具有重要意義。Hofstra等〔10，11〕認(rèn)為anti-PLA2R水平可作為臨床診斷IMN及治療效果的監(jiān)測手段。 根據(jù)國外報道，免疫組織化學(xué)法可以用來檢測anti-PLA2R，并且以轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為檢測基質(zhì)的間接免疫熒光法是目前臨床實驗室血清學(xué)檢測anti-PLA2R的一種便捷可靠的方法，且該方法可以進(jìn)行定性和定量分析〔3，5〕。

本研究結(jié)果提示，免疫組織化學(xué)法和間接免疫熒光法均能作為診斷IMN的指標(biāo)，但免疫組織化學(xué)法較復(fù)雜，是有創(chuàng)方法，且需要患者具備腎活檢的條件；相比免疫組織化學(xué)法，間接免疫熒光法更加便利快捷，能與免疫組織化學(xué)法相互補(bǔ)，可作為體外診斷老年人特發(fā)性膜性腎病的特異性指標(biāo)，在老年人特發(fā)性膜性腎病和繼發(fā)性膜性腎病的鑒別診斷中具有重要意義。

1Ponticelli C，Passerini P.Can prognostic factors assist therapeutic decisions in idiopathic membranous nephropathy〔J〕?J Nephrol，2010;23(2)：156-63.

2Fervenza FC，Sethi S，Specks U.Idiopathic membranous nephropathy：diagnosis and treatment〔J〕.Clin J Am Soc Nephrol，2008;3(3)：905-19.

3Beck LH Jr，Bonegio RG，Lambeau G，etal.M-type phospholipase A2 receptor as target antigen in idiopathic membranous nephropathy〔J〕.N Engl J Med，2009;361(1)：11-21.

4Ronco P，Debiec H.Antigen identification in membranous nephropathy moves toward targeted monitoring and new therapy〔J〕.J Am Soc Nephrolb，2010;21(4)：564-9.

5Euroimmun AG,St?cker W，Schlumberger W.Alle beitr?ge zum thema autoimmundiagnostik.Medizinische Labordiagnostik von A-Z〔M〕.Heidelberg:Springer Medizin Verlag，2012:198,1072.

6Beck LH Jr，Salant DJ.Membranous nephropathy：recent travels and new roads ahead〔J〕.Kidney Int，2010;77(9)：765-70.

7Beck LH Jr，F(xiàn)ervenza FC，Beck DM，etal.Rituximab-induced depletion of anti-PLA2R autoantibodies predicts response in membranous nephropathy〔J〕.J Am Soc Nephrol，2011；22(8)：1543-50.

8周廣宇，金玲晶，于晶，等.成人膜性腎病患者血液抗PLA2R抗體與病情的相關(guān)性〔J〕.中華腎臟病雜志，2012；28(2)：111-4.

9Qin W，Beck LH Jr，Zeng C，etal.Anti-phospholipase A2 receptor antibody in membranous nephropathy〔J〕.J Am Soc Nephrol，2011；22(6)：1137-43.

10Hofstra JM，Beck LH Jr，Beck DM，etal.Anti-phospholipase A2 receptor antibodies correlate with clinical status in idiopathic membranous nephropathy〔J〕.Clin J Am Soc Nephrol.2011；6(6)：1286-91.

11Hofstra JM，Wetzels JF.Anti-PLA2R antibodies in membranous nephropathy：ready for routine clinical practice〔J〕?Neth J Med，2012；70(3)：109-13.

〔2016-07-05修回〕

(編輯曲莉)

海南省衛(wèi)生廳立項課題(瓊衛(wèi)2012 PT-16)

韓葉光(1979-)，男，主管技師，主要從事腎臟病病理及實驗室診斷工作。

符克英(1971-)，男，副主任技師，主要從事腎臟病實驗室診斷及研究工作。

R692.06

A

1005-9202(2016)17-4281-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.073