逍遙散防治阿爾茨海默病的作用及配伍機制

王虎平　吳紅彥

(甘肅中醫藥大學，甘肅　蘭州　730000)

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逍遙散防治阿爾茨海默病的作用及配伍機制

王虎平1吳紅彥1

(甘肅中醫藥大學，甘肅蘭州730000)

目的探討逍遙散對D-半乳糖致阿爾茨海默病(AD)小鼠模型記憶能力及血清超氧化物歧化酶(SOD)、膽堿乙酰轉移酶(ChAT)、乙酰膽堿酯酶(AchE)活性與丙二醛(MDA)水平的影響。方法60只KM種SPF級小鼠隨機分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝健脾組、疏肝養血組、健脾養血組，每組10只。腹腔注射D-半乳糖復制擬AD小鼠模型并以逍遙散全方及各配伍藥組進行干預，給藥第41天 進行學習能力訓練，第42天進行記憶功能測試，然后股動脈取血測定血清SOD、ChAT、AchE活性及MDA水平。結果逍遙散全方及各配伍藥組皆可延長小鼠記憶潛伏時間，減少錯誤次數，提高血清SOD、ChAT活性,降低AchE活性與MDA水平,但記憶功能及血清SOD、MDA、ChAT、AchE的改善皆以逍遙散全方組最明顯。結論逍遙散能較好地改善擬AD模型小鼠記憶功能、抗氧化能力及中樞神經遞質活性。疏肝、健脾、養血是有效防治AD的統一體，缺一不可。

逍遙散；阿爾茨海默病；記憶功能；SOD；MDA；ChAT；AchE

阿爾茨海默病(AD)是一種進行性發展的神經系統退行性疾病，現代醫學對其發病機制的認識處于幾種“學說”階段，相應的對癥治療不能滿足臨床患者的需求。前期研究中，本課題組以調和肝脾之名方逍遙散(《太平惠民和劑局方》)對AD小鼠模型進行了干預研究，初步確證了逍遙散對AD的防治作用〔1～5〕。為了進一步探索逍遙散防治AD的配伍結構、精選防治AD的主要藥物，本研究以記憶功能及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、膽堿乙酰轉移酶(ChAT)、乙酰膽堿酯酶(AchE)活性為考察指標對逍遙散進行了疏肝、健脾、養血為單元藥組的拆方配對研究。

1　材料與方法

1.1主要材料60只KM種SPF級小鼠，(20±2)g，雌、雄各半，購自甘肅中醫藥大學動物中心，實驗動物合格證號：SCXK(甘)2004-0006。逍遙散各組成生藥(柴胡、薄荷、當歸、白芍、白術、茯苓、煨姜、甘草)均購自甘肅中醫藥大學附屬醫院。SOD、MDA、AchE、ChAT試劑盒及考馬斯亮藍蛋白測試盒均購自南京建成生物化學試劑有限公司，批號：20100522；D-半乳糖購自北京中泰化學試劑公司，批號：20100514。小鼠跳臺儀(DT-200)、小鼠避暗自動測試儀(BA-200)均購自成都泰盟科技有限公司。

1.2方法60只KM種SPF級小鼠，隨機分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝健脾組、疏肝養血組、健脾養血組，每組10只。空白組小鼠每天腹腔注射生理鹽水24 ml/kg，其余各組小鼠每天腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg(濃度為5 mg/ml)復制AD小鼠模型〔6〕。造模同時，空白組及模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散全方及各配伍藥組小鼠每天灌胃各組對應藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各組成藥物的劑量均按照2005版《中華人民共和國藥典》中逍遙丸〔7〕劑量，以人與小鼠體表面積體重比換算得到各實驗組劑量，即逍遙散全方組、疏肝健脾組(柴胡、薄荷、白術、茯苓、煨姜、甘草)、疏肝養血組(柴胡、薄荷、當歸、白芍)、健脾養血組(白術、茯苓、煨姜、甘草、當歸、白芍)小鼠對應生藥量分別為2.485、1.775、1.136及2.059 g/kg。連續灌胃42 d。

1.3指標測定動物給藥第41天，依次使用小鼠跳臺儀、小鼠避暗自動測試儀進行學習能力訓練，第42天依次使用小鼠跳臺儀、小鼠避暗自動測試儀進行記憶功能測試〔8〕。測試結束后，股動脈迅速取血測定小鼠血清SOD、AchE、ChAT活性及MDA含量。

1.4統計學處理應用SPSS13.0軟件作單因素方差分析。

2　結　果

2.1逍遙散對AD模型小鼠記憶功能的影響(跳臺法)模型組小鼠記憶潛伏時間縮短，錯誤次數增多，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可延長小鼠記憶潛伏時間、減少錯誤次數，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但差異以逍遙散全方組最明顯，且與疏肝健脾組、疏肝養血組及健脾養血組相比有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2逍遙散對AD模型小鼠記憶功能的影響(避暗法)模型組小鼠記憶潛伏時間縮短，錯誤次數增多，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可延長小鼠記憶潛伏時間、減少錯誤次數，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但差異以逍遙散全方組最明顯，且與疏肝健脾組、疏肝養血組及健脾養血組相比有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1　逍遙散對AD模型小鼠記憶功能的影響(跳臺法)

與模型組相比：1)P<0.05，2)P<0.01；與逍遙散全方組相比：3)P<0.05，下表同

表2　逍遙散對AD模型小鼠記憶功能的影響(避暗法)

2.3逍遙散對AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影響 模型組小鼠血清SOD活性降低、MDA水平升高，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可提高小鼠血清SOD活性、降低MDA水平，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但逍遙散全方組與疏肝健脾組、疏肝養血組及健脾養血組相比無統計學差異(P>0.05)。見表3。

表3　逍遙散對AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影響

2.4逍遙散對擬AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影響模型組小鼠血清ChAT活性降低、AchE活性升高，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可提高小鼠血清ChAT活性、降低AchE活性，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但ChAT活性改善以逍遙散全方組最為明顯，與疏肝健脾組及健脾養血組相比差異顯著(P<0.05)。見表4。

表4　逍遙散對AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影響

3　討　論

“肝者，將軍之官，謀慮出焉” (《素問·靈蘭秘典論》)、“肝者，罷極之本，魂之居也”(《素問·六節藏象論》)，肝為將軍之臟，性喜調達而惡抑郁，主疏泄、藏陰血，體陰而用陽，舍于魂而華于筋，為神魂之居、行為之主； “脾藏二神意與智，意不安，思無慮，神奪愚也” (《醫方類聚》)、“脾主身之肌肉”(《素問·痿論篇》)、“脾病不能為胃行其津液，四肢不得稟水谷氣，氣日以衰，脈道不利，筋骨肌肉皆無氣以生，敞不用焉”(《 素問·太陰陽明論》)，脾胃為后天之本，氣血生化之源，升清而灌四旁，散精而榮百脈，藏意智，主四肢，豐肌肉，為意智之舍、行為之力。可見，肝、脾二臟與人之精神、行為密切相關，而AD的主要臨床表現就是精神異常與行為失常兩方面，這與祖國醫學對肝、脾功能的認識非常吻合，據此提出了從肝、脾論治AD的科研假說。

逍遙散(《太平惠民和劑局方》)作為調和肝脾之名方，以肝脾為主治臟腑，以氣血為基礎物質，土木同調，氣血并治。其中柴胡、薄荷疏肝氣，解郁結，暢情志，悅神魂，又可促脾運，升清陽，啟清竅，醒腦神；當歸、白芍益陰血，藏神魂，舍意智，柔肝體，舒筋脈，又可充營血，強四肢，實肌肉；白術、茯苓、甘草、煨姜入中焦，健中土，陪補后天之本，資生氣血之源，既健中土，實四肢，充肌肉，又化陰血，強肝體，柔肝筋，還可泄濁毒，解蒙蔽，聰神明。八味相合，肝脾同調，氣血并治，神魂同寧，筋肉并健，如此，清陽健行左升之道，精氣上注元神之府，氣暢神安，血充筋柔，木達土旺，體健肉堅，腦靈神聰，行為自和，具有中醫藥防治AD的理論基礎；現代研究表明，逍遙散具有提高多巴胺等神經受體含量、營養保護神經元、抗焦慮、抗抑郁、抗自由基氧化、調節免疫、雌激素樣等作用〔8～10〕，具有現代醫學防治AD的藥理學基礎。

本研究表明，疏肝、健脾、養血三者的結合是中醫藥有效防治AD的統一體，缺一不可。而從疏肝、養血、健脾藥組中精選重點藥物組成新的防治AD的精方將是我們今后研究的方向之一，力爭為開發防治AD的中藥新產品奠定基礎。

1王虎平,吳紅彥.逍遙散及其配伍組方對阿爾茨海默病小鼠學習記憶的影響〔J〕.中國老年學雜志,2013;33(18):4459-61.

2王虎平,邢喜平,張雯娟,等.逍遙散對阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶及神經遞質的影響〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(9):2468-70.

3王虎平，吳紅彥.逍遙散對AD模型小鼠行為學、形態學及神經遞質活性的影響〔J〕.中國中西醫結合雜志,2014;34(4):471-4.

4王虎平，吳紅彥.逍遙散對阿爾茨海默病模型小鼠血清及腦組織勻漿中SOD、GSH-PX活性及MDA水平的影響〔J〕.甘肅中醫學院學報,2013;30(6):1-3.

5蔡大勇，黃啟福，賈旭.丹梔逍遙散對D-半乳糖擬老年性癡呆大鼠腦病理學變化的影響〔J〕.北京中醫藥大學學報，2006;29(2)：114-7.

6國家藥典委員會.中華人民共和國藥典第一部〔S〕.2005:564.

7李儀奎.中藥藥理實驗方法學〔M〕.第2版.上海:上海科學技術出版社,2006:256-8.

8徐志偉，敖海清，吳麗麗，等.逍遙散對慢性心理應激損傷大鼠海馬神經元的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2005;21(1):5-9.

9王靜怡，石玉瑁，查鵬洲，等.逍遙散的藥理研究〔J〕.中國醫院藥學雜志，2002;22(8)：489-90.

10楊玉峰，楊瑛.加味逍遙散對女性黃褐斑血清性激素水平的影響〔J〕.陜西中醫學院學報，2000;23(5)：41-2.

〔2015-10-27修回〕

(編輯袁左鳴)

The effect and compatibility mechanism of Xiaoyao Powder on the Alzheimer's disease

WANG Hu-Ping,WU Hong-Yan.

Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,Gansu,China

ObjectiveTo investigate the effect of Xiaoyao Powder on the memory function and activity of SOD,MDA,ChAT and AchE in serum of Alzheimer's disease (AD) model mice and discuss the effect and mechanism of Xiaoyao Powder on the AD and explain the compatibility mechanism of combination of Shugan,Yangxue and Jianpi of Xiaoyao Powder.Methods60 SPF mice were divided into the blank control,model and Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue groups,with 10 mice in each group. AD model mice was made by injecting D-gal. While,AD model mice was prevented by Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder.At the 41st day,the ability of learning and memory training was done. At 42nd day,the memory function was detected and then to measure content of SOD,MDA,ChAT,AchE in serum.ResultsQuanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder could improve memory function of AD model mice,and could improve SOD,ChAT and decrease MDA and AchE,but the effect of Quanfang group of Xiaoyao Powder was most obvious.ConclusionsXiaoyao powder can better improve the memory function,antioxidant activity and neurotransmitter of A D model mice,has better prevention and treatment on the AD. The Shugan,Yangxue,Jianpi is effective in preventing and treating AD prescription structure.

Xiaoyao Powder;Alzheimer's disease;Memory function;SOD;MDA;ChAT;AchE

國家自然科學基金項目(No.81060284)；甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室開放基金項目(No.ZDSYS-KJ-2013-010)；甘肅中醫藥大學中青年基金項目(No.2010-11)

吳紅彥(1963-)，男，博士生導師，教授，主要從事復方物質基礎與臨床應用研究。

王虎平(1980-)，男，碩士，在讀博士，主要從事老年病的中醫藥防治研究。

R749

A

1005-9202(2016)15-3632-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.009

1甘肅省中醫方藥挖掘與創新轉化重點實驗室甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室甘肅省中藥新產品創制工程實驗室