布地奈德對(duì)哮喘大鼠免疫功能、細(xì)胞炎癥因子水平的影響

梁偉烽　于海建　王燦良　戴　明　黃展芬

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬花都人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東　廣州　510800)

?

布地奈德對(duì)哮喘大鼠免疫功能、細(xì)胞炎癥因子水平的影響

梁偉烽于海建王燦良戴明黃展芬

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬花都人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東廣州510800)

目的探討布地奈德對(duì)哮喘大鼠免疫功能、細(xì)胞炎癥因子的影響機(jī)制。方法SD雄性大鼠36只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、布地奈德組，每組12只。正常對(duì)照組不造模，給予等劑量生理鹽水，每日2次；模型組于造模成功后給予等劑量生理鹽水，每日2次；布地奈德組霧化吸入布地奈德混懸液0.5 mg，每日2次。比較各組大鼠一般情況、肺功能指標(biāo)、免疫功能指標(biāo)、細(xì)胞炎癥因子水平及HE染色結(jié)果。結(jié)果造模成功后與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組呼吸頻率加快、呼氣峰流量和吸氣峰流量及潮氣量均下降(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組呼吸頻率減慢、呼氣峰流量和吸氣峰流量及潮氣量均上升(P<0.05)；與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組血清免疫球蛋白(Ig)E、干擾素(IFN)-γ水平均上升(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組血清IgE、IFN-γ水平均下降(P<0.05)；與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-5水平均上升，而IL-10水平下降(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組血清CRP、IL-4、IL-5水平均下降，IL-10水平升高(P<0.05)。結(jié)論布地奈德可明顯改善哮喘大鼠免疫功能，減輕大鼠炎癥狀態(tài)及改善肺通氣功能。

布地奈德；哮喘；免疫功能；細(xì)胞炎癥因子

支氣管哮喘簡(jiǎn)稱哮喘，主要是一種抗原性或者非抗原性刺激所致的氣管-支氣管反應(yīng)造成的氣道阻塞性慢性炎性疾病，其病理特征主要為氣道高反應(yīng)性以及可逆性氣流受限〔1～3〕。布地奈德是治療哮喘的一線藥物，是應(yīng)用較廣泛的一種糖皮質(zhì)激素，但目前臨床相關(guān)布地奈德對(duì)哮喘大鼠免疫機(jī)制研究甚少〔4,5〕。本研究通過分析布地奈德對(duì)哮喘大鼠免疫功能、細(xì)胞炎癥因子的影響，旨在為臨床治療哮喘提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD雄性大鼠36只，均為SPF級(jí)，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(湘)2009-0004。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，保持良好通風(fēng)條件，室溫23℃～25℃，空氣濕度50%。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、布地奈德組，每組12只。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物布地奈德混懸液(商品名：普米克令舒；生產(chǎn)廠家：澳大利亞AstraZeneca Pty Ltd；注冊(cè)證號(hào)：H20090902)。

1.3哮喘模型制作及給藥方法模型組、布地奈德組大鼠進(jìn)行造模。第1、8天大鼠腹腔注射1 ml致敏混懸劑(含氫氧化鋁干粉100 mg、卵清蛋白100 mg、滅火百日咳桿菌5×10個(gè))；第15天應(yīng)用1%卵清蛋白生理鹽水霧化吸入激發(fā)哮喘，其時(shí)間為每日上午9時(shí)，20 min/次，1次d，共7 d。所有大鼠均造模成功，以大鼠出現(xiàn)嗆咳、煩躁、打噴嚏，以及腹式呼吸明顯和點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)、呼吸頻率加快、嚴(yán)重大鼠四肢癱軟、行動(dòng)遲滯、呼吸減慢、反應(yīng)遲鈍等癥狀為激發(fā)成功。

給藥方法：正常對(duì)照組及模型組給予等劑量生理鹽水置入壓縮霧化器中霧化吸入，每日2次；布地奈德組予布地奈德混懸液0.5 mg，置入壓縮霧化器中霧化吸入，每日2次。各組大鼠霧化吸入均為2 w。

1.4觀察指標(biāo)(1)各組大鼠一般情況，主要包括體質(zhì)量、毛色、大小、呼吸等。(2)各組大鼠呼吸頻率、呼氣峰流量、吸氣峰流量、潮氣量變化。(3)各組大鼠免疫功能指標(biāo)，包括免疫球蛋白E(IgE)、干擾素-γ(IFN-γ)。于給藥第15天處死大鼠前稱重，采用2.5 ml/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，3 000 r/min離心，-80℃保存待測(cè)。(4)各組大鼠細(xì)胞炎癥因子水平，包括C反應(yīng)蛋白(CRP)、白介素(IL)-4、IL-5、IL-10。標(biāo)本留取同(3)。(5)各組大鼠肺組織病理切片。于給藥第15天處死大鼠，打開胸腔，取左肺組織，經(jīng)固定、切片、HE染色觀察病理情況。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件，多個(gè)樣本均數(shù)方差分析及均數(shù)間兩兩比較行SNK-q檢驗(yàn)。若方差不齊，通過數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使方差齊，再進(jìn)行檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠一般情況正常對(duì)照組大鼠活動(dòng)正常，未見明顯變化；模型組大鼠活動(dòng)減少，呼吸急促，打噴嚏；布地奈德組大鼠較模型組有不同程度改善。

2.2各組大鼠呼吸頻率、呼氣峰流量、吸氣分流量、潮氣量比較與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組呼吸頻率加快、呼氣峰流量和吸氣分流量及潮氣量均下降(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組呼吸頻率減慢、呼氣峰流量和吸氣分流量及潮氣量均上升(P<0.05)。見表1。

2.3各組大鼠免疫功能指標(biāo)水平變化比較與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組血清IgE、IFN-γ水平均上升(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組血清IgE、IFN-γ水平均下降(P<0.05)。見表1。

2.4各組大鼠細(xì)胞炎癥因子水平變化比較與正常對(duì)照組比較，模型組和布地奈德組血清CRP、IL-4、IL-5水平均上升，而IL-10水平下降(P<0.05)；與模型組比較，布地奈德組血清CRP、IL-4、IL-5水平均下降，而IL-10水平升高(P<0.05)。見表2。

表1　各組大鼠呼吸情況及免疫指標(biāo)比較±s,n=12)

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.5各組大鼠HE染色病理結(jié)果正常對(duì)照組大鼠未見氣道上皮纖毛結(jié)構(gòu)完整，平滑肌層無(wú)增厚；模型組大鼠可見氣道上皮細(xì)胞壞死脫落，平滑肌增厚以及官腔內(nèi)大量分泌物；布地奈德組大鼠較模型組明顯減輕。見圖1。

表2　各組大鼠細(xì)胞炎癥因子水平比較±s,n=12)

圖1　各組大鼠HE染色病理結(jié)果(×200)

3　討　論

布地奈德是一種強(qiáng)效糖皮質(zhì)激素，能夠降低氣道炎癥，抑制炎癥介質(zhì)的釋放。該藥物作用機(jī)制主要包括以下幾方面〔6～8〕：①抗炎作用；②直接作用于毛細(xì)血管后靜脈上皮細(xì)胞，從而造成血管收縮及抑制內(nèi)皮活化介質(zhì)與趨化因子的釋放或產(chǎn)生；③降低呼吸道高反應(yīng)性；④表面激素吸入對(duì)黏附因子表達(dá)有直接抑制作用。近年來(lái)研究報(bào)道顯示布地奈德應(yīng)用于哮喘患者治療，取得了明顯臨床療效，且可明顯改善患者肺功能。本研究結(jié)果表明，布地奈德可明顯改善肺通氣功能。

CRP是機(jī)體發(fā)生炎癥或損傷時(shí)，主要由TNF-α、IL-6等促炎因子刺激肝臟產(chǎn)生的急性期反應(yīng)蛋白。研究報(bào)道顯示，CRP可能在氣道炎癥反應(yīng)的增強(qiáng)、減輕過程中起調(diào)節(jié)作用〔9〕。IL-4是一種由Th2細(xì)胞分泌的促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化及其活性的細(xì)胞因子，可通過下調(diào)P-選擇素的表達(dá)，提高IL-10基因表達(dá)抑制Th1的功能〔10〕。IL-5在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用主要包括以下幾方面〔11，12〕：①協(xié)同IL-4刺激B細(xì)胞合成IgE；②特異性地作用于嗜酸粒細(xì)胞(EOS)，從而促進(jìn)骨髓EOS祖細(xì)胞增殖、分化，從而延長(zhǎng)EOS生存期，增強(qiáng)抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的EOS脫顆粒。IL-10對(duì)Th2型細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的過敏性免疫應(yīng)答具有良好的抑制作用，可抑制嗜酸性粒細(xì)胞在氣道內(nèi)的浸潤(rùn)，誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞不應(yīng)答而實(shí)現(xiàn)免疫耐受〔13〕。本研究結(jié)果表明，布地奈德可通過降低血清CRP、IL-4、IL-5水平、增加IL-10水平，減輕患者炎癥狀態(tài)。

哮喘主要是由IgE介導(dǎo)的一種變態(tài)反應(yīng)，IgE大量產(chǎn)生且與嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞表面受體交聯(lián)，使炎癥因子釋放，進(jìn)而致使氣道高反應(yīng)而引發(fā)哮喘〔14,15〕。IFN-γ是一種由活化NK細(xì)胞、T細(xì)胞分泌的具有抑制Th2細(xì)胞、抗病毒及激活巨噬細(xì)胞作用的細(xì)胞因子，可抑制氣道黏膜中EOS聚集和血中IgE產(chǎn)生〔16,17〕。近年來(lái)研究顯示，IgE和IFN-γ參與哮喘發(fā)生發(fā)展〔18〕。本研究結(jié)果表明，布地奈德可通過降低血清IgE、IFN-γ水平，增強(qiáng)免疫功能。

綜上所述，布地奈德可明顯改善哮喘大鼠免疫功能，減輕大鼠炎癥狀態(tài)及改善肺通氣功能。

1賀娟梅,李小榮,李復(fù)紅.支氣管哮喘流行病學(xué)觀察以及危險(xiǎn)因素分析〔J〕.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015;9(12):1224-7.

2王志旺,孫少伯,郭玫,等.轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3在哮喘模型大鼠肺組織中的表達(dá)及歸喘寧滴丸的干預(yù)作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2015;35(6):1642-4.

3劉學(xué)志.支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制〔J〕.中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥,2004;11(10):31-2.

4江麗娜,張愛美,冷振香,等.吸入布地奈德對(duì)哮喘大鼠氣道重塑影響的研究〔J〕.中國(guó)醫(yī)刊,2012;47(12):75-6.

5方麗,陳培英,童夏生,等.布地奈德對(duì)哮喘模型大鼠肺組織Toll樣受體4和5表達(dá)的影響〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014;24(6):480-2.

6方麗,陳培英,童夏生,等.哮喘大鼠肺組織Toll樣受體3和9的表達(dá)及布地奈德的影響〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2014;31(7):805-9.

7湯志洪.布地奈德吸入劑聯(lián)合特布他林治療哮喘的臨床療效觀察〔J〕.當(dāng)代醫(yī)學(xué),2014;20(30):144-5.

8趙炳蓮.布地奈德聯(lián)合孟魯司特治療支氣管哮喘的療效觀察〔J〕.吉林醫(yī)學(xué),2014;35(9):1902.

9何承輝,康小龍,邢建國(guó),等.香青蘭總黃酮對(duì)哮喘大鼠白三烯B-4、白三烯C-4、C反應(yīng)蛋白和白介素-10表達(dá)的影響〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志,2014;18(2):615-7.

10陳偉,馬磊,楊立山.甘草次酸對(duì)支氣管哮喘大鼠IgE、IL-4及TNF-α的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2015;19(3):52-5.

11徐增梅,丁偉偉,尹婷婷,等.麻芍平喘湯對(duì)支氣管哮喘大鼠氣道重塑及IL-5、IL-13影響研究〔J〕.實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2014;9(12):1074-5.

12金朝紅,李建強(qiáng),楊嬋,等.牛磺酸對(duì)支氣管哮喘大鼠氣道MLCK和血清IL-5表達(dá)的影響〔J〕.國(guó)際呼吸雜志,2015;35(7):492-6.

13王志旺,藺興遙,任遠(yuǎn),等.當(dāng)歸精油對(duì)哮喘模型大鼠的平喘作用及其對(duì)IL-10、IL-17A的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2015;11(3):76-8.

14王志旺,郭玫,孫少伯,等.歸喘寧滴丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性哮喘大鼠IL-4、IFN-γ和IgE的影響〔J〕.華西藥學(xué)雜志,2014;29(3):28-9.

15鄭明睿,劉海霞,黨亞潔,等.煙曲霉暴露對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥、氣道反應(yīng)性及血清總IgE水平的影響〔J〕.中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志,2015;24(1):25-7.

16丁偉偉,楊程,徐增梅,等.陽(yáng)和平喘顆粒對(duì)哮喘大鼠肺組織形態(tài)學(xué)及血清IL-17、TNF-α和IFN-γ表達(dá)的影響〔J〕.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015;14(3):148-51.

17李志軍,王有鵬.抗支口服液對(duì)哮喘大鼠IFN-γ與IL-6含量的影響〔J〕.中醫(yī)藥信息,2015;32(5):66-7.

18韓玉杰,張慶,王少飛,等.不同年齡支氣管哮喘患者臨床特征和特異性IgE 抗體的變化〔J〕.廣東醫(yī)學(xué),2014;35(10):1555-7.

〔2016-07-08修回〕

(編輯曲莉)

廣東省自然科學(xué)基金(S2011010002100)

于海建(1963-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事肺癌防治研究。

梁偉烽(1976-)，男，主治醫(yī)師，主要從事呼吸系統(tǒng)疾病研究。

R562.25

A

1005-9202(2016)15-3644-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.015