老年晚期非小細胞肺癌組織p53,bcl-2,caspase-3表達變化及其與預后關(guān)系

姜愛英　孫迎燕　王　松　陳　培

(牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院呼吸內(nèi)科，黑龍江　牡丹江　157011)

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老年晚期非小細胞肺癌組織p53,bcl-2,caspase-3表達變化及其與預后關(guān)系

姜愛英孫迎燕1王松2陳培3

(牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院呼吸內(nèi)科，黑龍江牡丹江157011)

目的分析老年晚期非小細胞肺癌組織p53,bcl-2,caspase-3表達變化及和預后關(guān)系。方法老年晚期非小細胞肺癌患者58例的臨床資料。結(jié)果鱗癌、中央型、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化患者腫瘤組織中p53陽性表達率均顯著高于其他病理類型、周圍型、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化患者腫瘤組織中bcl-2陽性表達率均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化患者(P<0.05)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化患者腫瘤組織中caspase-3陽性表達率均顯著高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化患者(P<0.05)；p53,bcl-2表達陽性患者的2年生存率均顯著低于表達陰性患者(P<0.05)；腫瘤組織中bcl-2和caspase-3表達呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論老年晚期非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展可能受到p53,bcl-2,caspase-3的調(diào)控，能夠為臨床判斷患者預后提供有效依據(jù)。

晚期非小細胞肺癌；p53；bcl-2；caspase-3；表達變化；預后；關(guān)系

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一， 且已成為世界范圍內(nèi)癌癥患者死亡的首位原因〔1,2〕。非小細胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%，其中65歲以上的老年人占50%以上，確診時，55%的NSCLC患者已是局部晚期或遠處轉(zhuǎn)移〔3〕。研究表明〔4〕，腫瘤與細胞凋亡之間存在密切關(guān)系，細胞凋亡的過程受p53 等凋亡促進因子和bcl-2等凋亡抑制因子的共同調(diào)節(jié)。天冬氨酸特異的半胱氨酸蛋白酶家族在細胞凋亡中起重要作用〔5〕。本研究分析老年晚期NSCLC組織的p53,bcl-2,caspase-3表達變化及和預后關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料2013年3月至2016年3月我院老年晚期NSCLC患者58例，均經(jīng)術(shù)后病理學檢查確診，石蠟組織標本均存檔，患者均知情同意。年齡60～76歲，平均(65.0±3.8)歲。見表1。

1.2方法應用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的SP、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒，采用兔抗人CPP-32多克隆抗體、兔抗人p53單克隆抗體、兔抗人bcl-2單克隆抗體，分別為濃縮型1∶50、1∶100、1∶100稀釋。對標本進行連續(xù)石蠟切片，厚度為4 μm，運用SP法施行免疫組化技術(shù)，將陰性對照設(shè)定為替代一抗的磷酸鹽緩沖液(PBS)，將陽性對照設(shè)定為已知的陽性病例〔6〕。

1.3結(jié)果判定運用半定量法，p53,bcl-2,caspase-3分別主要在癌細胞核、癌細胞胞質(zhì)、癌細胞胞質(zhì)中表達，如果顆粒呈棕黃色或棕褐色，則評定為陽性細胞〔7〕。隨機將5個不同高倍視野從每例標本中選取出來，各計100個細胞，將腫瘤細胞中p53,bcl-2,caspase-3表達的陽性細胞數(shù)計算出來，計算方法為：首先，計分過程中嚴格依據(jù)陽性細胞數(shù)，分為0～4分5個等級，0、1、2、3、4分分別為0%～5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、76%及以上〔8〕；然后，計分過程中嚴格依據(jù)陽性細胞染色輕度，分為0～3分4個等級，0、1、2、3分分別為無染色、淺黃色、棕黃色、深棕色或棕褐色〔9〕；最后，將二者分數(shù)相加，陽性(+)標準為所得總分在3～7分，陰性(-)標準為所得總分在0～2分〔10〕。

1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗，生存分析用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，差異性檢驗用Log-rank，Spearman等級相關(guān)分析。

2　結(jié)　果

2.1臨床病理特征和p53,bcl-2,caspase-3陽性表達的關(guān)系鱗癌、中央型、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化患者腫瘤組織中p53陽性表達率均顯著高于其他病理類型、周圍型、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化患者，但不同性別、吸煙史、臨床分期患者腫瘤組織中p53陽性表達率之間的差異均不顯著；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化患者腫瘤組織中bcl-2陽性表達率均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化患者，但不同性別、吸煙史、病理類型、腫瘤類型、臨床分期患者腫瘤組織中bcl-2陽性表達率之間的差異均不顯著。見表1。

2.2預后和p53,bcl-2,caspase-3陽性表達的關(guān)系p53,bcl-2表達陽性患者的2年生存率〔8例(32.0%)、8例(36.4%)〕均顯著低于表達陰性患者〔21例(63.6%)、25例(69.4%)〕，但caspase-3表達陽性和陰性患者的2年生存率〔13例(61.9%)、25例(67.6%)〕差異不顯著。

2.3腫瘤組織中p53,bcl-2,caspase-3表達的相關(guān)性p53和bcl-2,caspase-3表達均無顯著相關(guān)性(r=0.087，P=0.458;r=0.085,P=0.361)。

表1　58例患者臨床病理特征和p53,bcl-2,caspase-3陽性表達的關(guān)系〔n(%)〕

3　討　論

研究證實〔11〕，腫瘤生長是一個復雜的過程，腫瘤細胞凋亡的失控與腫瘤組織生長密切相關(guān)。p53基因分野生型和突變型兩種。野生型p53基因是公認的抑癌基因，大約50%以上的人類腫瘤有p53基因的缺失和突變，p53可作為一個細胞周期調(diào)控因子，在細胞增殖與凋亡的平衡上同樣起著重要作用。突變型p53基因可促進細胞轉(zhuǎn)化，具有致癌的效應。p53蛋白的主要功能是使細胞基因組保持穩(wěn)定，并且致使其在非癌癥組織中的表達較低。在眾多的基因凋亡調(diào)控中，bcl-2蛋白家族和caspase家族尤為受到矚目。bcl-2是原癌基因，也是第一個被確定的可以對抗凋亡的基因，且與人類腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。bcl-2家族功能分為促進凋亡bcl-2蛋白和抗凋亡bcl-2蛋白。研究表明〔12〕，腫瘤細胞的生存是依靠較高水平的抗凋亡bcl-2家族蛋白來維持的，因此，可使凋亡途徑中其他組分完整性得到提高或使促凋亡bcl-2家族成員的敏感性得到提高從而抑制腫瘤中抗凋亡蛋白，繼而使自發(fā)的腫瘤細胞發(fā)生凋亡。caspase-3是caspase家族中最重要的成員，細胞凋亡最終均需caspase-3介導的信號傳導途徑，因此，它是細胞凋亡的重要執(zhí)行者。然而，細胞凋亡是一個由caspase家族成員介導的蛋白酶級聯(lián)反應過程，并且caspase-3大量存在于人體的不同正常組織細胞中，以無活性的酶原形式存在，只有在細胞凋亡的過程中形成有活性的caspase-3蛋白。本研究結(jié)果說明老年晚期NSCLC的發(fā)生發(fā)展可能受到p53,bcl-2,caspase-3的調(diào)控，能夠為臨床判斷患者預后提供有效依據(jù)。

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2馬志紅，沈琦斌，費淑祎，等.CEA、CA125、CYFRA21-1、NSE聯(lián)合檢測肺癌的臨床價值〔J〕.中國免疫學雜志,2013;29(11):1174-6.

3李軍,王曉敏,宋張駿,等.非小細胞肺癌中Ki-67 和BCL-2 表達的臨床意義及預后價值〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2012;28(6):921-4.

4古穎春，宋業(yè)琳，張春玲，等.p53、bcl-2、mn23蛋白在肺癌中的表達及與預后的關(guān)系〔J〕.山東醫(yī)藥，2011;51(13):54-5.

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6徐勤,高珊,趙瑞力,等.Livin 和Caspase-3 與惡性腫瘤的研究進展〔J〕.臨床薈萃,2012;27(3):997-1001.

7羅順祥，李偉，宋銳.GP方案與NP方案治療晚期非小細胞肺癌的Meta分析〔J〕.中國醫(yī)藥導報，2013;10(5):58-61.

8鄧亮,吳娣,洪一江,等.Bcl-2 家族的研究新進展〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學,2012;40(6):1936-8.

9沈曉詠,呂帆真,武韞,等.bcl-2,bax 和p53 在小細胞肺癌中的表達及對細胞凋亡的影響〔J〕.四川醫(yī)學,2013;34(3):915-7.

10曹紅一，劉樹立，李明珠，等.Axin、p53在非小細胞肺癌中的表達及意義〔J〕.解剖科學進展，2012;18(2):159-62.

11黃凱，崔廣暉，趙松，等.非小細胞肺癌組織BAG-1和Caspase-3基因的表達及其關(guān)系〔J〕.中國老年學雜志，2012;32(4):696-7.

12余旭舟,吳曉虞.益氣化瘀法與化療聯(lián)用對老年晚期非小細胞肺癌的有效性及安全性〔J〕.中國老年學雜志,2015;35(23):6839-40.

〔2014-12-11修回〕

(編輯苑云杰)

2014年度牡丹江市科學技術(shù)計劃項目(No.Z2014s029)

陳培(1981-)，女，講師，主要從事腦老化與腦血管病研究。

姜愛英(1981-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事肺癌研究。

R734.4

A

1005-9202(2016)15-3735-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.058

1牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院超聲科

2牡丹江市腫瘤醫(yī)院內(nèi)二科

3牡丹江醫(yī)學院病理生理教研室